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細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路*新模型2014/11/28: 繁復(fù)的細(xì)胞信號(hào)網(wǎng)絡(luò)的解析一直是困擾生物學(xué)界的一個(gè)難題，眾多的傳導(dǎo)路徑往往使研究人員無(wú)從入手，給具體實(shí)驗(yàn)研究帶來(lái)極大困擾。而英國(guó)格拉斯哥大學(xué)研究人員zui近證實(shí)，通過(guò)貝葉斯統(tǒng)計(jì)模型，不僅能對(duì)細(xì)胞信號(hào)通路模型進(jìn)行評(píng)級(jí)，選出*的傳導(dǎo)路徑，還可對(duì)細(xì)胞信號(hào)網(wǎng)絡(luò)模型進(jìn)行全新的詮釋。這一代表了細(xì)胞信號(hào)領(lǐng)域突破性進(jìn)展的研究成果作為封面文章發(fā)表在近期出版的《科學(xué)—信號(hào)傳導(dǎo)》雜志上。細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路即是一個(gè)典型的多因子、多參數(shù)、相互調(diào)節(jié)的立體空間網(wǎng)絡(luò)。雖然科學(xué)家已經(jīng)可以在具體實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)上建立細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)模型，但

革蘭氏染色法（原理、方法和意義）2014/11/27: 革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法，這種染色法是由一位丹麥醫(yī)生漢斯·克里斯蒂安·革蘭（HansChristianGram，1853年－1938年）于1884年所發(fā)明，zui初是用來(lái)鑒別肺炎球菌與克雷白氏肺炎菌之間的關(guān)系。未經(jīng)染色之細(xì)菌，由于其與周?chē)h(huán)境折光率差別甚小，故在顯微鏡下極難觀察陽(yáng)性紫色陰性紅色。染色后細(xì)菌與環(huán)境形成鮮明對(duì)比，可以清楚地觀察到細(xì)菌的形態(tài)、排列及某些結(jié)構(gòu)特征，而用以分類(lèi)鑒定。實(shí)驗(yàn)原理通過(guò)結(jié)晶紫初染和碘液媒染后，在細(xì)胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物，革蘭氏

G418篩選穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系2014/11/25: 1.G418的配制：取1gG418溶于1ml1M的HEPES液中，加蒸餾水至10ml，過(guò)濾消毒，4度保存。2.細(xì)胞培養(yǎng)：取待測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞，制備成細(xì)胞懸液，按等量接種入多孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)6小時(shí)左右開(kāi)始加藥。3.制備篩選培養(yǎng)基：在100ug/ml~1000ug/ml范圍內(nèi)確定幾個(gè)梯度，比如先做個(gè)100ug/ml、400ug/ml、800ug/ml、1000ug/ml，按梯度濃度用培養(yǎng)基稀釋G418制成篩選培養(yǎng)基。4.加G418篩選：吸除培養(yǎng)孔中培養(yǎng)基，PBS洗滌一次，每孔中加入不同濃度的篩選培養(yǎng)基。5

小膠質(zhì)細(xì)胞原代培養(yǎng)2014/11/24: 混合膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)來(lái)源于1-2天的大鼠，如同星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)，有輕微的改動(dòng)。乳鼠斷頭后大腦收集在DMEM-Ham‘sF-12含有1%抗菌素的溶液中。除去腦膜，血管和白質(zhì)后，用機(jī)械勻漿法將大腦皮層勻漿，然后將細(xì)胞懸液依次通過(guò)230μm和104μm孔徑的鋼網(wǎng)過(guò)濾，然后用離心法收集細(xì)胞，用小膠質(zhì)細(xì)胞條件培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。條件培養(yǎng)基的成分：DMEM-Ham’sF-12培養(yǎng)基，添加2mML-谷氨酸，1mM丙酮酸鈉，1×非必須氨基酸，10%胎牛血清和0.5%雙抗溶液。然后接種到培養(yǎng)皿中。小膠質(zhì)細(xì)胞的分離：混合膠

培養(yǎng)細(xì)胞活力測(cè)定2014/11/20: 培養(yǎng)細(xì)胞活力測(cè)定是腫瘤體外研究中應(yīng)用zui廣的技術(shù)手段之一。任何培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)生長(zhǎng)的細(xì)胞都由死細(xì)胞和活細(xì)胞組成，從形態(tài)上區(qū)別死、活細(xì)胞是困難的。方法：四唑鹽（MTT）比色法四唑鹽（MTT）商品名為噻唑藍(lán)四唑鹽比色法的原理：活細(xì)胞中脫氫酶能將四唑鹽還原成不溶干水的藍(lán)紫色產(chǎn)物（formazan），并沉淀在細(xì)胞中，而死細(xì)胞沒(méi)有這種功能。二甲亞砜（DMSO）能溶解沉積在細(xì)胞中藍(lán)紫色結(jié)晶物，溶液顏色深淺與所含的formazan（甲月替）量成正比。再用酶標(biāo)儀測(cè)定OD值。MTT法簡(jiǎn)單快速、準(zhǔn)確，廣泛應(yīng)用于新藥篩選、

癌細(xì)胞的分離培養(yǎng)和接種2014/11/17: 、組織塊——酒精浸泡——剪碎——Hank's沖洗——胰酶消化——離心——Hank's沖洗——離心——計(jì)數(shù)——轉(zhuǎn)至培養(yǎng)瓶——37℃培養(yǎng)——接種。2、組織塊——酒精浸泡——剪碎——轉(zhuǎn)至培養(yǎng)瓶——加培養(yǎng)液——37℃培養(yǎng)——接種。具體操作步驟：一、材料及試劑：儀器：培養(yǎng)箱(調(diào)整至37℃)，培養(yǎng)瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、紗布、手術(shù)器械、血球計(jì)數(shù)板、離心機(jī)、水浴箱(37℃)。材料：小鼠c26結(jié)腸癌和lewis肺癌組織塊。試劑：1640培養(yǎng)基(含20%小牛血清)，0.25%胰酶，Hank'

CHO細(xì)胞與酵母細(xì)胞比較2014/11/14: CHO細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)與畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)是當(dāng)前發(fā)展前景看好的兩個(gè)表達(dá)系統(tǒng)，為了能夠更加直觀地對(duì)兩個(gè)表達(dá)系統(tǒng)有一定的認(rèn)識(shí)，特意在此篇中對(duì)兩個(gè)表達(dá)系統(tǒng)作一定的比較，從而能夠更進(jìn)一步的對(duì)兩個(gè)表達(dá)系統(tǒng)有更深的了解一、CHO細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)1、優(yōu)點(diǎn)CHO細(xì)胞屬于成纖維細(xì)胞，既可以貼壁生長(zhǎng)。也可以懸浮生長(zhǎng)。目前常用的CHO細(xì)胞包括原始CHO和二氫葉酸還原酶雙倍體基因缺失型(DHFR-)突變株CHO。近年來(lái)，為降低生產(chǎn)成本和減少血制品帶來(lái)的潛在危害性，動(dòng)物細(xì)胞生產(chǎn)開(kāi)始使用無(wú)血清培養(yǎng)基(SFM)，但SFM往往導(dǎo)致細(xì)胞活

脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞的融合2014/11/13: 1、脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞一般按2：1-5：1的密度混合，有的報(bào)道可以到10：1，不過(guò)總體來(lái)說(shuō)我們常選3：1-5：1，記住，原則是脾細(xì)胞的數(shù)量比骨髓瘤的多。2、融合前，一般用HAT培養(yǎng)基做飼養(yǎng)細(xì)胞鋪板，這是融合前的準(zhǔn)備工作，因?yàn)轱曫B(yǎng)細(xì)胞分泌的某些細(xì)胞因子有助與融合的雜交瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，并且提供一定的細(xì)胞密度。通常是可以融合前一天做飼養(yǎng)細(xì)胞，老鼠選ICR或是BALB/C與ICR雜交的鼠，一只老鼠可以鋪2-3塊96孔板。3、我們?nèi)诤线x用96孔細(xì)胞培養(yǎng)板。融合時(shí)將脾細(xì)胞與骨髓瘤混合后離心，然后用手掌稍稍搓離心

細(xì)胞培養(yǎng)的污染及控制2014/11/10: 污染的類(lèi)型細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的污染不僅僅指微生物，而且還包括所有混入培養(yǎng)環(huán)境中的、對(duì)細(xì)胞生存有害或造成細(xì)胞不純的物質(zhì)，包括生物和化學(xué)物質(zhì)。一、細(xì)菌污染細(xì)菌污染是實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的污染，即使在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入了抗菌素(一般為預(yù)防劑量)，也可能因?yàn)椴僮鞑簧鞫鹞廴尽ui常見(jiàn)的有革蘭氏陽(yáng)性菌，如枯草桿菌以及大腸桿菌、假單胞菌等革蘭氏陰性菌，其中又以白色葡萄球菌較常見(jiàn)。培養(yǎng)細(xì)胞受細(xì)菌污染后，會(huì)出現(xiàn)培養(yǎng)液變混濁，pH改變。也有的培養(yǎng)液肉眼觀察無(wú)多少改變，只能在鏡下發(fā)現(xiàn)菌體才知污染。所以，每天應(yīng)仔細(xì)觀察

染色體制片程序2014/11/07: 1、取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞一個(gè)T75或T25瓶。2、將培養(yǎng)基換成10mlDMEM(H)+10%FBS+0.1ug/ml秋水仙素的培養(yǎng)基，處理1~2小時(shí)。3、將細(xì)胞培養(yǎng)液倒掉，馬上加入3~4ml0.1%胰蛋白酶，并立即搖晃0.5~1min。當(dāng)在顯微鏡下看到分裂相細(xì)胞脫壁后，馬上加入終止液終止消化，并將分裂相細(xì)胞收集在一個(gè)15ml的離心管中，并在1200r/min離心4min。4、將上清液倒掉，剩余50ul左右的液在管中，并輕微震動(dòng)，使細(xì)胞沉淀重新懸浮。5、加入10ml的低滲液（0.075MKCL），*毫

基底動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞原代培養(yǎng)2014/11/03: 培養(yǎng)液：MEM(GIBCO)，20％FBS，雙抗100IU／ml；原代細(xì)胞培養(yǎng)：取5kg左右兔空氣栓塞法處死后斷頭，于無(wú)菌條件下從枕大孔處用大止血箝扳開(kāi)顱骨暴露并小心取出腦組織放入裝有DMEM的培養(yǎng)皿中，用眼科鑷分離基底動(dòng)脈后按常規(guī)平滑肌方法貼塊培養(yǎng)。傳代：（1）吸除培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液。（2）D-Hanks液沖洗2遍。（3）加入消化液少許，以能覆蓋瓶底為限。（4）倒置顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞胞質(zhì)回縮、細(xì)胞間隙增大時(shí)，立即終止消化。（5）吸除消化液，向瓶底注入D-Hanks液數(shù)毫升，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶，把殘留

有關(guān)培養(yǎng)基的PH值問(wèn)題2014/10/27: ：配培養(yǎng)基的時(shí)候調(diào)PH為7.25，分裝-20度保存，幾天后解凍再測(cè)為7.80，怎么回事啊，難不成每次配時(shí)得調(diào)到7以下嗎？解凍后重新調(diào)PH值，再過(guò)濾分裝，還能用嗎？還能－20度保存嗎？答：看來(lái)你用的是粉末DMEM，說(shuō)明書(shū)上說(shuō)應(yīng)該加3.7g碳酸氫鈉，還說(shuō)過(guò)濾的時(shí)候PH值升高0.1-0.2.但是3.7g碳酸氫鈉對(duì)應(yīng)的是10%的CO2培養(yǎng)環(huán)境，如果你用的是5%的CO2，那么你只要加入1.85g碳酸氫鈉就行，我試過(guò)，這時(shí)候基本不用調(diào)節(jié)PH值，然后開(kāi)始過(guò)濾，過(guò)濾的時(shí)候PH會(huì)上升，但基本上也是在要求的范圍。但

細(xì)胞培養(yǎng)FAQ2014/10/24: 1、冷凍管應(yīng)如何解凍？取出冷凍管后，須立即放入37°C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化，并注意水面不可超過(guò)冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí)，必須注意安全，預(yù)防冷凍管之爆裂。2、細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時(shí)，是否應(yīng)馬上去除DMSO？除少數(shù)特別注明對(duì)DMSO敏感之細(xì)胞外，絕大部分細(xì)胞株（包括懸浮性細(xì)胞），在解凍之后，應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中，待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無(wú)法生長(zhǎng)或貼附之問(wèn)題。3、可否

細(xì)胞培養(yǎng)污染的途徑、危害及預(yù)防措施2014/10/22: 污染是細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中面臨的主要問(wèn)題。某些污染的發(fā)生往往難以察覺(jué)檢測(cè)，而且污染源能長(zhǎng)期共存于培養(yǎng)體系中，這類(lèi)染事實(shí)上大部分被人們忽視了。培養(yǎng)的細(xì)胞作為個(gè)生物體，會(huì)對(duì)培養(yǎng)環(huán)境以及環(huán)境中的污染物作相應(yīng)的反應(yīng)，造成培養(yǎng)細(xì)胞生物學(xué)特性的改變，而實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成潛在的威脅，而且隨著污染時(shí)間的長(zhǎng)而增加。培養(yǎng)環(huán)境中的物理、化學(xué)及生物因素都可能入培養(yǎng)環(huán)境造成污染。由于入侵的微生物在培養(yǎng)系中不斷增殖、代謝，因此生物性的污染對(duì)細(xì)胞的害zui大。隨著污染微生物的不斷增殖，交叉污染可能性也不斷增加。此外，微生物代謝消耗大量需

足細(xì)胞的來(lái)源及培養(yǎng)方法2014/10/20: 大鼠原代足細(xì)胞：丁香園網(wǎng)友gaoxueyan99的觀點(diǎn)為：培養(yǎng)方法：過(guò)篩：100目，150目，200目，收集200目?jī)?nèi)為小球1、選取100克左右大鼠，無(wú)菌取腎，去包膜，分離皮質(zhì)，剪刀切成小塊！2、100目上注射器芯研磨，DMEM培養(yǎng)液沖洗100目網(wǎng)篩多遍，DMEM沖洗200目?jī)?nèi)組織！3、離心管收集，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘！4、*培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于培養(yǎng)瓶或皿！一只大鼠一皿或一瓶！5、5％CO2，37度培養(yǎng)箱zui內(nèi)測(cè)放置.6、培養(yǎng)五天細(xì)胞換液，七天左右細(xì)胞傳代！

細(xì)胞損傷模型2014/10/16: 體外肝細(xì)胞損傷模型建立（CCl4和H2O2）1、大鼠肝細(xì)胞的分離和培養(yǎng)大鼠4％戊巴比妥麻醉，門(mén)靜脈插管，先以無(wú)鈣灌流液灌流，繼以37℃通入O2的Ⅳ型膠原酶灌流液繼續(xù)循環(huán)灌流15min。將肝臟移至一平皿內(nèi)，輕輕撕去肝包膜后，加入含5％小牛血清的清洗液，用吸管吹打成單個(gè)肝細(xì)胞懸液，200目尼龍網(wǎng)過(guò)濾，低速離心（500r·min-1，1min，4℃）棄上清，同法用清洗液反復(fù)洗3次。然后用*1640培養(yǎng)液（內(nèi)含10％小牛血清，105U·L-1青霉素，100mg·L-1鏈霉素和10mg·L-1胰島素）制成

單核細(xì)胞的分離2014/10/15: 基本原理：本文分離單核細(xì)胞所用方法是Percoll非連續(xù)性密度梯度離心法，主要是根據(jù)不同細(xì)胞間密度的差別進(jìn)行細(xì)胞分離。此法易操作，且使用通常的實(shí)驗(yàn)設(shè)備即可完成。試劑與器材·外周血單個(gè)核細(xì)胞·PBS1×和PBS10×（無(wú)Ca2+、Mg2+），含0.5mMEDTA·胎牛血清（56℃，30分鐘加熱滅活）·HCl1mol/l·Percoll分層液（密度=1.130g/ml,商品）·4g/L臺(tái)盼藍(lán)染液（溶解在PBS液中）·50ml聚丙烯圓錐管·毛細(xì)吸管·移液管（1、2、10ml）·CO2孵箱·超凈臺(tái)·有旋

跨膜運(yùn)輸技術(shù)講解2014/10/10: 估計(jì)細(xì)胞膜上與物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān)的蛋白占核基因編碼蛋白的15~30%，細(xì)胞用在物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)方面的能量達(dá)細(xì)胞總消耗能量的2/3。細(xì)胞膜上存在兩類(lèi)主要的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，即：載體蛋白（carrierprotein）和通道蛋白（channelprotein）。載體蛋白又稱(chēng)做載體（carrier）、通透酶（permease）和轉(zhuǎn)運(yùn)器（transporter），有的需要能量驅(qū)動(dòng)，如：各類(lèi)APT驅(qū)動(dòng)的離子泵；有的則不需要能量，如：纈氨酶素。通道蛋白能形成親水的通道，允許特定的溶質(zhì)通過(guò)，所有通道蛋白均以自由擴(kuò)散的方式運(yùn)輸溶質(zhì)。

腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)2014/10/09: 腫瘤細(xì)胞在組織培養(yǎng)中占有核心的位置，首先癌細(xì)胞是比較容易培養(yǎng)的細(xì)胞。當(dāng)前建立的細(xì)胞系中癌細(xì)胞系是zui多的。另外腫瘤對(duì)人類(lèi)是威脅zui大的疾病。腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)是研究癌變機(jī)理、抗癌藥檢測(cè)、癌分子生物學(xué)極其重要的手段。腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)闡明和解決癌癥將起著不可估量的作用。一、組織培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特性腫瘤細(xì)胞與體內(nèi)正常細(xì)胞相比，不論在體內(nèi)或在體外，在形態(tài)、生長(zhǎng)增值、遺傳性狀等方面都有顯著的不同。生長(zhǎng)在體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞和在體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞，其差異較小，但也并非*相同。培養(yǎng)中的腫瘤細(xì)胞具以下突出特點(diǎn)：（－）形

成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)和形態(tài)2014/10/08: 成纖維細(xì)胞培養(yǎng)（一）原代培養(yǎng)1、在手術(shù)室無(wú)菌條件下，切取新鮮的皮膚，增殖性瘢痕和瘢痕疙瘩組織，修除表皮和皮下組織，鹽水反復(fù)沖洗后放入含PS的DMEM培養(yǎng)液內(nèi)帶回?zé)o菌工作間。2、把組織塊置于培養(yǎng)皿內(nèi)，Hank,s液漂洗三遍后吸凈Hank,s液，眼科剪反復(fù)剪切組織塊成0.5－1mm3大小。用彎頭吸管吸取組織塊接種于40ml培養(yǎng)方瓶瓶壁上，組織塊間留約0.3－0.5cm的間距。3、塞好瓶塞，放入37℃電熱恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)3.5小時(shí)使培養(yǎng)的組織小塊微干涸。4、從溫箱中取出培養(yǎng)瓶，向瓶底輕輕注入含20%CS及

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