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革蘭氏染色法(原理、方法和意義)

來源:上海士鋒生物科技有限公司   2014年11月27日 08:23  

革蘭氏染色法

 

是細菌學中廣泛使用的一種鑒別染色法,這種染色法是由一位丹麥醫生漢斯·克里斯蒂安·革蘭(Hans Christian Gram,1853年-1938年)于1884年所發明,zui初是用來鑒別肺炎球菌與克雷白氏肺炎菌之間的關系。

 

未經染色之細菌,由于其與周圍環境折光率差別甚小,故在顯微鏡下極難觀察陽性紫色陰性紅色。染色后細菌與環境形成鮮明對比,可以清楚地觀察到細菌的形態、排列及某些結構特征,而用以分類鑒定。

 

實驗原理

 

通過結晶紫初染和碘液媒染后,在細胞壁內形成了不溶于水的結晶紫與碘的復合物,革蘭氏陽性菌由于其細胞壁較厚、肽聚糖網層次較多且交聯致密,故遇乙醇或丙酮脫色處理時,因失水反而使網孔縮小,再加上它不含類脂,故乙醇處理不會出現縫隙,,因此能把結晶紫與碘復合物牢牢留在壁內,使其仍呈紫色;而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯度差,在遇脫色劑后,以類脂為主的外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖網不能阻擋結晶紫與碘復合物的溶出,因此通過乙醇脫色后仍呈無色,再經沙黃等紅色染料復染,就使革蘭氏陰性菌呈紅色。

 

致病菌

 

如:金黃色葡萄球菌、綠色溶血性鏈球菌、肺炎球菌、白喉桿菌、炭疽桿菌等 屬革蘭氏染色陽性菌。

 

百日咳桿菌、大腸桿菌、傷寒桿菌、痢疾桿菌、霍亂弧菌、流行性腦膜炎雙球菌、淋病雙球菌等 屬革蘭氏陰性。

 

所以根據細菌的革蘭氏染色性質,可以縮小鑒定范圍,有利于進一步分離鑒定,以對疾病做出診斷。又由于各種抗生素的抗菌譜不同,革蘭氏染色尚可做為選用抗生素的參考。

 

實驗方法

 

革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟,具體操作方法是: 

1)涂片固定。 

2)草酸銨結晶紫染1分鐘。 

3)自來水沖洗。 

4)加碘液覆蓋涂面染約1分鐘。 

5)水洗,用吸水紙吸去水分。 

6)加95%酒精數滴,并輕輕搖動進行脫色,20秒后水洗,吸去水分。 

7)蕃紅梁色液(?。┤?分鐘后,自來水沖洗。干燥,鏡檢。

 

染色結果

 

革蘭氏正反應菌體都呈紫色,負反應菌體都呈紅色。

 

臨床意義

 

其重要的臨床意義在于:

 

1、鑒別細菌

 

2、選擇藥物

 

3、與致病性有關:革蘭氏陽性菌能產生外毒素,革蘭氏陰性菌能產生內毒素,兩者的致病作用不同。

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