成人做爰免费视频免费看_成人a级高清视频在线观看,成人a大片在线观看,成人a大片高清在线观看,成人av在线播放,一a一级片,一级黄 中国色 片,一级黄 色蝶 片,一级黄色 片生活片

考馬斯亮藍蛋白膠快速染色液常見問題2015/05/13

問題原因對策背景高SDS及鹽類等雜質未除盡電泳結束后，取膠放入雙蒸水或去離子水中，延長洗滌時間或增加洗滌次數。染色過程中試劑變成藍色染色后未見蛋白條帶SDS及鹽類等雜質未除盡電泳結束后，取膠放入雙蒸水或去離子水中，延長洗滌時間或增加洗滌次數。凝膠過厚（超過1mm）建議使用厚度小于1mm的凝膠；如果膠非常厚，每次的洗滌時間需加長。蛋白上樣量太少建議在電泳時加兩個不同量的BSA，并將此兩個泳道作為陽性對照。

選擇純化凝膠的具體方法2015/05/07

生物分子下游純化的對象一般包括蛋白、酶、重組蛋白、單抗、抗體及抗原、肽類、病毒、核酸等。純化前首先需要測定生物分子的各物理和化學特性，然后通過實驗選擇出zui有效的純化流程。1.測定------分子量、PI當目標蛋白的物理特性如分子量、PI等都不清楚時，可用PAGE電泳方法或層析方法加以測定。分離范圍廣闊的SuperoseHR預裝柱很適合測定未知蛋白的分子量。用少量離子交換介質在多個含不同PH緩沖液的試管中，可簡易地測出PI，并選擇純化用緩沖液的*PH。2.選擇------層析方法若對目標蛋白的

考馬斯亮蘭法（Bradford法）測定蛋白濃度2015/04/24

(一)實驗原理雙縮脲法(Biuret法)和Folin?酚試劑法(Lowry法)的明顯缺點和許多限制，促使科學家們去尋找更好的蛋白質溶液測定的方法。1976年由Bradford建立的考馬斯亮蘭法(Bradford法)，是根據蛋白質與染料相結合的原理設計的。這種蛋白質測定法具有超過其他幾種方法的突出優點，因而正在得到廣泛的應用。這一方法是目前靈敏度zui高的蛋白質測定法。考馬斯亮蘭G-250染料，在酸性溶液中與蛋白質結合，使染料的zui大吸收峰的位置(lmax)，由465nm變為595nm，溶液的顏

蛋白定量技術2015/04/14

（一）雙縮脲測定法1．原理蛋白質中的肽鍵有雙縮脲反應，在堿性溶液中與二價銅離子形成藍紫色的絡合物，在一定的范圍內，顏色的深淺與蛋白質的含量成正比。此法特異性強，游離的氨基酸、小肽和核酸均不產生這種反應，但此法不夠敏感，僅能測出毫克水平。2．試劑配制硫酸銅（CuSO4.5H2O）1.50g酒石酸鉀鈉5.00gH2O500.0ml10%氫氧化鈉（不含硫酸鈉）300mlH2O加至1000ml此溶液可長期保存，如產生暗紅色沉淀，則應廢棄重配。3．標準曲線的制備⑴準確稱取牛血清白蛋白1.0g（必要時須首先

表達蛋白的SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分析2015/03/27

一、原理細菌體中含有大量蛋白質，具有不同的電荷和分子量。強陰離子去污劑SDS與某一還原劑并用，通過加熱使蛋白質解離，大量的SDS結合蛋白質，使其帶相同密度的負電荷，在聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）上，不同蛋白質的遷移率僅取決于分子量。采用考馬斯亮蘭快速染色，可及時觀察電泳分離效果。因而根據預計表達蛋白的分子量，可篩選陽性表達的重組體。二、試劑準備1、30%儲備膠溶液：丙烯酰胺（Acr）29.0g，亞甲雙丙烯酰胺（Bis）1.0g，混勻后加ddH2O，37℃溶解,定容至100ml,棕色瓶存于室溫。

體內體外表達2015/03/25

作為分子生物學領域老牌廠家，Promega同樣有很有特色的原核表達系統，不過縱觀Promega近年的表現，似乎不滿足于此，而是將目光投向了跨物種間的穿梭表達，以及越來越熱的體外表達系統了。蛋白純化，永遠是蛋白表達后zui令人關注的問題。Promega的PinPoint?Xa表達系統則是巧妙利用了生物素作為親和純化的中介――將目的基因克隆到表達載體上的一段“神秘”多肽的DNA序列后面，這段‘神秘’多肽表達后在細胞體內會自然被生物素修飾，所以大腸桿菌表達出的融合蛋白就是已經被生物素標記了的融合蛋白―

蛋白質組，蛋白質組學及研究技術路線2015/03/17

因組(genome)包含的遺傳信息經轉錄產生mRNA，一個細胞在特定生理或病理狀態下表達的所有種類的mRNA稱為轉錄子組(transcriptome)。很顯然，不同細胞在不同生理或病理狀態下轉錄子組包含的mRNA的種類不盡相同。mRNA經翻譯產生蛋白質，一個細胞在特定生理或病理狀態下表達的所有種類的蛋白質稱為蛋白質組(proteome)。同理，不同細胞在不同生理或病理狀態下所表達的蛋白質的種類也不盡相同。蛋白質是基因功能的實施者，因此對蛋白質結構，定位和蛋白質-蛋白質相互作用的研究將為闡明生命現

聚丙烯酰胺凝膠層析（PAGE）的技術數據2015/03/12

大分子核酸的檢測通常使用瓊脂糖凝膠層析，但是由于其分辨率不夠，所以檢測小分子核酸使用聚丙烯酰胺凝膠（PAGE）層析，分辨率可以達到幾個bp。對于PAGE膠的一些技術參數羅列如下表：型號排阻的下限（Mr）分級分離的范圍（Mr）膨脹后的床體積（mL/g干凝膠）膨脹所需zui少時間（室溫，小時）Bio-gel-P-21600200~20003.82~4Bio-gel-P-43600500~40005.82~4Bio-gel-P-646001000~50008.82~4Bio-gel-P-1010000

轉錄分析的5種方法2015/03/10

號通路，只有一個目的：將細胞的外部信號轉換成細胞的內部變化。不管是胰島素，還是異亮氨酸，抗原還是腎上腺素，它們的*目的總是如出一則：對轉錄活性的改變。這些對于轉錄活性的影響來自于轉錄因子與基因的調控區域：如啟動子、增強子、沉默子等結合達到的。經典的凝膠遷移滯后試驗（theelectrophoreticmobilityshiftassay）已經成為證明某種蛋白能與特定的短基因序列結合的有力方法手段。但是凝膠遷移滯后試驗具有速度慢，通量低，不定量和具有放射性的特點。即使完了你還不知道究竟是何種蛋白或

堿性磷酸酶偶氮―偶聯 法2015/03/03

人工合成的磷酸萘酚鹽經堿性磷酸酶水解后釋放出萘酚，后者立即與重氮鹽偶聯生成不溶性偶氮色素。1)孵育液配制萘酚AS(或萘酚AS-MX)10―25rugN，N―二甲基甲酰胺液0．5ml0．2mol／LTris鹽酸緩沖液(pH8．2―9．2)50ml堅牢藍B(或BB、RR，或堅牢紅TR、堅牢藍VRT)50mg混合、攪拌及過濾，必要時可使用氫氧化鈉調整pH。2)操作程序：①新鮮組織冰凍切片：②人孵育液，37C(或室溫下)孵育5―60分鐘；③雙蒸水洗3～5分鐘；④4％甲醛，室溫下固定10～15分鐘；⑤蒸餾

Feulgen反應原理及Sohiff液的配制2015/01/30

Feulgen反應原理及Sohiff液的配制Feulgen反應是顯示DNA的經典而特異的染色方法，由Feulgen(孚爾根)在1924年提出，因而得名。(一)Feulgen反應原理DNA可在酸性條件下水解，嘌呤―脫氧核糖之間的糖苷鍵斷開，形成醛基(―CHO)，再用顯示醛基的特異性試劑Schiff試劑處理，形成光鏡下所見的細胞核內紫紅色反應產物。DNA經稀鹽酸處理而水解。除可破壞脫氧核糖與嘌呤堿外，還可水解嘧啶堿。酸水解核酸的程度與水解時間長短有關，隨著水解時間的延長，嘌呤堿基增多，形成的醛基也隨

原代肝細胞培養、肝非實質細胞、肝臟干細胞2015/01/27

原代肝細胞培養、肝非實質細胞、肝臟干細胞肝實質細胞：指具有執行和完成肝功能單位的細胞。肝非實質細胞：指非具有執行和完成肝功能單位的細胞，這些細胞的功能主要是具有連接和支撐肝實質細胞的作用。如血竇內皮細胞、Kupffer細胞、陷窩細胞（pitcell）及肝臟星狀細胞（hepaticslatecell；HSC）。肝臟干細胞：是一種來源于肝臟Herring狹隙和肝內膽管的具有雙向分化潛能的細胞，能夠分化為肝實質細胞和膽管上皮細胞。這種細胞的細胞質少，具有卵圓形細胞核，故又稱卵圓細胞。在正常的情況，卵圓

培養細胞的細胞生物學2015/01/19

1.基本概念通常，體外培養的生物成分無外乎兩種結構形式：其一是小塊組織或稱為組織塊（tissueblock），一般稱為外植塊；其二是將生物組織分散后制成的單個細胞，一般稱為分離的細胞(isolatedcell)或者分散的細胞(dissociatedcell)。分散的過程通常在培養液或平衡鹽溶液中進行，分散的細胞被懸浮于培養液或平衡鹽溶液中。單個細胞分散存在于培養液或其它平衡鹽溶液中、緩沖溶液中，就稱為細胞懸液(cellsuspension)。狹義的細胞培養(cellculture)主要是指分離（

白細胞計數法（試管法）2015/01/08

一、原理用稀乙酸將血液稀釋20倍，使紅細胞全部溶解，滴入白細胞計數池中，在顯微鏡下計數，求得每立方毫米血液中的白細胞數。二、器材和試劑1.器材生物顯微鏡、Neubauer氏血細胞計數池、0.02ml吸管、小試管、刺血針、2ml吸管。2.試劑白細胞稀釋液:采用3%乙酸溶液。三、稀釋液的配制采用3%乙酸溶液。即取冰乙酸3ml，加蒸餾水至100ml混合。亦可于上述稀釋液中加美藍或龍膽紫液1~2滴，便于觀察。稀釋液應經常過濾，以除去塵埃、異物或微生物的影響。四、方法1.取血于小試管中加入稀釋液0.38m

脂肪干細胞（ASCs）的提取及鑒定2015/01/05

一、實驗技術及原理運用細胞培養技術、流式細胞術（體外擴增后ACSs的表型會發生改變，主要體現在細胞表面蛋白和細胞因子表達的變化），差異離心術（可將基質血管細胞沉淀與懸浮的成熟脂肪細胞分離，沉淀中除ASCs，還包括血細胞、成纖維細胞和內皮細胞，基質血管細胞沉淀可以接種到孰料培養瓶中，基質細胞可貼壁，造血和其他雜質細胞不貼壁，在隨后的傳代過程中被出去，zui終得到的ASCs可再很長時間內保持摸分化狀態）。取C57BL／6WT小鼠2只，常規麻醉消毒，取腹股溝脂肪組織剪碎至糊狀，PBS液沖洗去麻藥及血液

Caspase 3 活性測定（FIENA法）檢測細胞凋亡2014/12/29

Caspase3的激活在凋亡過程的細胞事件啟動中起著重要作用，有證據表明，在蛋白酶級聯切割過程中，Caspase3處于核心位置。本法運用熒光酶聯免疫吸附法（flurometricimmunosorbentenzymeassay，FIENA）的原理，Caspase3激活后會作用于其特異的底物：乙酰化天冬氨酸-谷氨酸-纈氨酸-天冬氨酰胺（Ac-DEVD），如將Ac-DEVD與熒光素連接（Ac-DEVD-AFC），即會產生熒光裂解產物AFC，而且caspase3的活性與Ac-DEVD-AFC的分解量或

臺盼藍染色法2014/12/22

材料：1.顯微鏡、玻片、蓋玻片、滴管；2.試劑：0.4%臺盼藍染液；3.臺盼藍（Trypanblue）：0.4g；4.生理鹽水：100ml；操作步驟：1.用Hanks液配制0.1%臺盼藍溶液；2.用0.5%胰蛋白酶：0.2%EDTA=1：1混合液來消化培養的貼壁細胞；3.再加入適量Hanks液制成細胞懸液；4.將待染色細胞稀釋至所需濃度（方法及濃度范圍與細胞計數相同）；5.每0.1ml細胞懸液約加新鮮配制的染液一小滴，室溫下染3—5min；6.染色過的細胞材料，取一滴細胞懸液置玻片上，加蓋玻片后

Hoechst-PI染色法檢測細胞凋亡2014/12/15

亞“G1”峰方法簡便，但只是代表G0/G1期發生凋亡的細胞，S期和G2期細胞凋亡發生于G1峰后，無法觀察。此外，由于全部細胞均經固定，因此不能區別死細胞和活細胞。Hoechst-PI染色則可彌補上述不足。Hoechst33258可被活細胞攝取，與DNA結合在紫外光下呈藍色熒光。繼而PI使死細胞著染產生紅色熒光。因此在細胞二維直方圖上根據紅藍兩種熒光可分辨三種細胞：正常活細胞對染料有拒染性，藍色和紅色熒光均較少；凋亡細胞有膜通透性改變，主要攝取Hoechst染料，表現為強藍色熒光，弱紅色熒光；壞死

人和哺乳動物原代細胞的蛋白質抽提步驟2014/12/04

一、培養的貼壁原代細胞的蛋白質抽提基本步驟1、從貼壁細胞培養瓶中小心傾去培養液。2、預冷的1×PBS（pH7.4）清洗貼壁的細胞2次，小心傾去PBS。3、PriCells蛋白質抽提試劑（1ml抽提試劑中加入5μl蛋白酶抑制劑混合液\5μlPMSF和5μl磷酸酶混合液等等）。4、細胞瓶中加入預冷的含抑制劑的蛋白質抽提劑（107個細胞中加入1ml抽提試劑；5×106個細胞中加入0.5ml抽提試劑），輕輕搖動5分鐘。5、用一預冷的橡膠和塑料細胞刮將培養瓶壁上貼壁細胞刮下來，轉移細胞懸浮液到離心管中，冰

羊水細胞染色體標本的制備2014/12/02

一、原理人的羊水細胞能長成單層并可連續進行傳代培養，但它們的一些特征與一般成纖維細胞不同。在羊水中存在著各種不同類型的胎兒細胞，依據其外形和生長特征可區分為以下三類：上皮細胞（E）、成纖維細胞（F）和羊水細胞（AF）。E細胞在胰酶消化的連續培養中不再生長，所以在培養過程中的生長期zui短。AF細胞在再培養中一開始就長得很好，染色體分析大多用這類細胞。F細胞在再培養中潛在的生長期zui長，在較老的羊水培養物中占優勢。通常在培養后3-4天（可能更早些）即出現E細胞的集落，它們不適合再培養作染色體分析