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士鋒生物氣相色譜柱的安裝操作流程2014/07/15

色譜柱的正確安裝才能保證發(fā)揮其*的性能和延長使用壽命。正確的安裝請參考以下步驟：步驟1、檢查氣體過濾器、載氣、進樣墊和襯管等檢查氣體過濾器和進樣墊，保證輔助氣和檢測器的用氣暢通有效。如果以前做過較臟樣品或活性較高的化合物，需要將進樣口的襯管清洗或更換。步驟2、將螺母和密封墊裝在色譜柱上，并將色譜柱兩端要小心切平。步驟3、將色譜柱連接于進樣口上色譜柱在進樣口中插入深度根據(jù)所使用的GC儀器不同而定。正確合適的插入能zui大可能地保證試驗結(jié)果的重現(xiàn)性。通常來說，色譜柱的入口應(yīng)保持在進樣口的中下部，當(dāng)進

士鋒生物液相色譜常見14個問題及其解決方法2014/07/14

一、問：用hplc進行分析時，保留時間有時發(fā)生漂移，有時發(fā)生快速變化，原因何在?如何解決?關(guān)于漂移問題：1.溫度控制不好，解決方法是采用恒溫裝置，保持柱溫恒定。2.流動相發(fā)生變化，解決辦法是防止流動相發(fā)生蒸發(fā)、反應(yīng)等。3.柱子未平衡好，需對柱子進行更長時間的平衡。關(guān)于快速變化問題：1.流速發(fā)生變化，解決辦法是重新設(shè)定流速，使之保持穩(wěn)定。2.泵中有氣泡，可通過排氣等操作將氣泡趕出。3.流動相不合適，解決辦法為改換流動相或使流動相在控制室內(nèi)進行適當(dāng)混合。二、問：色質(zhì)聯(lián)用中毛細柱的選擇應(yīng)注意什么問題?

DNS（二硝基水楊酸）比色法還原糖含量測定實驗2014/07/11

還原糖的測定實驗是生化技術(shù)中基礎(chǔ)實驗，是生化課程中必須掌握的實驗操作技術(shù)，不明白還原糖的測定原理、測定方法？本文羅列了DNS還原糖含量測定實驗原理、步驟、DNS試劑的制備、葡萄糖標準曲線的繪制、樣品的測定。一、實驗?zāi)康摹NS(二硝基水楊酸)比色法還原糖含量測定實驗實驗?zāi)康膶W(xué)習(xí)和了解還原糖和總糖測定的基本原理、比色法測定還原糖的操作步驟和分光光度計的使用方法。二、實驗原理還原糖的測定是糖定量測定的基本方法。還原糖是指含有自由醛基或酮基的糖類。單糖都是還原糖，雙糖和多糖不一定是還原糖，例如乳糖和麥

士鋒生物端錨聚合酶與端粒2014/07/09

粒是真核細胞染色體末端的一個特殊結(jié)構(gòu)，由一段具有特定重復(fù)序列的DNA和端粒結(jié)合蛋白組成，是維持染色體結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的重要因素。端粒dna的復(fù)制不是由dna聚合酶完成的，而是由端粒酶(omerase)催化合成后添加到染色體的末端。正常細胞隨著細胞分裂活動的進行，端粒DNA逐漸縮短，當(dāng)縮短到一定程度時，染色體結(jié)構(gòu)被破壞，細胞進入衰老期并以死亡而告終。但當(dāng)細胞發(fā)生癌變時，由于端粒酶的重新激活，這種端粒DNA隨分裂活動發(fā)生漸進性縮短的趨勢受到阻遏，使正常細胞轉(zhuǎn)化成具有無限分裂能力的永生化惡性細胞。研究表明，端

公司Taq DNA聚合酶屬性介紹2014/07/08

(一)酶活性與熱穩(wěn)定性該酶基因全長2496個堿基，編碼832個氨基酸，酶蛋白分子為94KDa.其比活性為200000單位/mg.75～80℃時每個酶分子每秒鐘可延伸約150個核苷酸，70℃延伸率大于60個核苷酸/秒，55℃時為24個核苷酸/秒.溫度過高(90℃以上)或過低(22℃)都可影響TaqDNA聚合酶的活性，該酶雖然在90℃以上幾乎無DNA合成，但確有良好的熱穩(wěn)定性，在PCR循環(huán)的高溫條件下仍能保持較高的活性.在92.5℃、95℃、97.5℃時，PCR混合物中的TaqDNA聚合酶分別經(jīng)13

免疫組化問題及解決辦法2014/07/07

1、染色過強原因解決辦法抗體的濃度過高或抗體孵育時間過長降低抗體滴度（一般指濃縮性抗體）抗體孵育時間：室溫1小時或4℃過孵育溫度過高，孵育溫度超過37℃一般室溫20-28℃DAB顯色時間過長或DAB濃度過高顯色時間不能超過5-10分鐘，以顯微鏡下觀察為準2、非特異性背景染色原因解決辦法操作過程中沖洗不充分每步?jīng)_洗3×5組織中含過氧化物酶未阻斷可再配置新鮮3%H2O2封閉，孵育時間延長組織中含內(nèi)源性生物素正常非免疫動物血清再封閉血清蛋白封閉不充分延長血清蛋白封閉時間3、染色弱原因解決辦法抗體濃度過

如何進行枯草桿菌細胞固定化2014/07/03

一、原理：把細胞懸浮在海藻酸鈉溶液中，滴進氯化鈣溶液中，形成海藻酸鈣凝膠小球。細胞保埋在凝膠的小孔中，制成固定化細胞。二、試劑與材料1、枯草桿菌細胞：將枯草桿菌在培養(yǎng)液中培養(yǎng)，在對數(shù)生長期離心(3000r/min，20min)收集細胞。2、海藻酸鈉溶液：用蒸餾水配制成1.5%的海藻酸鈉，滅菌后備用。3、氯化鈣溶液：配制成0.1M，滅菌后備用。注射器、無菌水、固定化細胞培養(yǎng)液三、操作方法1、取枯草桿菌濕細胞2g，懸浮在10ml海藻酸鈉溶液中混合均勻。2、用注射器吸取上述懸浮液，逐滴滴入到50ml氯

士鋒生物凝膠層析法蛋白質(zhì)脫鹽2014/07/02

一、原理：含鹽蛋白質(zhì)溶液流經(jīng)凝膠層析柱時，低相對分子量的鹽分子因浸入凝膠顆粒的微孔中，所以向下移動的速度較慢；而大分子的蛋白質(zhì)不能進入凝膠顆粒的微孔，以較快的速度流過凝膠柱，從而使蛋白質(zhì)與鹽分開。二、材料與試劑：葡聚糖凝膠（SephadexG25）、洗脫液（蒸餾水或適宜的緩沖溶液）、含鹽的蛋白質(zhì)溶液、蛋白質(zhì)檢測試劑、無機鹽檢測試劑（依具體情況而定）三、操作方法1、凝膠的準備：稱取葡聚糖5g，加入80ml洗脫液（可用水或適宜的緩沖液），在沸水浴中溶脹30min，用傾瀉去懸浮的小顆粒。然后裝進內(nèi)徑1

血清蛋白質(zhì)醋酸纖維素薄膜電泳2014/06/27

【實驗原理】1.電泳的基本原理帶電顆粒在電場中向著與其電性相反方向移動的現(xiàn)象稱為電泳。電泳時不同的帶電粒子在同一電場中泳動速度不同。帶電顆粒(球形分子)在電場中的電泳速度(V)實驗二血清蛋白質(zhì)醋酸纖維素薄膜電泳從上式看出，帶電顆粒在電場中的移動速度(V)與顆粒帶電荷量(Q)以及電場強度(E)成正比，與球形分子的大小(半徑為r)及所在介質(zhì)的粘度(η)成反比。因此,在同一電場、同一介質(zhì)中進行電泳時，帶不同電荷，不同大小的顆粒就可以通過電泳而被分離。在實際操作中，為了不考慮不同電壓對電泳速度的影響，我

血清三酰甘油的含量測定2014/06/26

三酰甘油的主要生理功能是儲能和供能，主要分布在皮下、腹腔大網(wǎng)膜、腸系膜、內(nèi)臟周圍等脂肪組織中。在血清中，內(nèi)源性三酰甘油主要以VLDL的形式運輸，外源性三酰甘油主要以CM的形式運輸。在正常成人空腹血脂中，三酰甘油的含量為0.11～1.69(均值為1.13)。血脂的含量受膳食、種族、性別、年齡、職業(yè)、運動狀況、生理狀態(tài)以及激素水平等多因素影響，波動范圍較大。例如：青年人血漿膽固醇水平低于老年人，某些疾病時，血脂含量有很大變化，如糖尿病和動脈粥樣硬化的患者，血脂一般都明顯升高。因此，測定血脂的含量在臨

士鋒生物電泳技術(shù)及其應(yīng)用2014/06/25

一：電泳（Electrophoresis）：帶電粒子在直流電場中向著所帶電性相反的電極移動的現(xiàn)象。電泳分析技術(shù)：利用電泳現(xiàn)象進行物質(zhì)分離的技術(shù)。二：影響電泳的因素：1．帶電粒子的帶電狀態(tài)（電量和電性）。2．帶電粒子的分子量大小和分子形狀。3．電場強度。4．緩沖液的PH值，組成成分及離子強度。5．支持介質(zhì)的吸附和電滲作用。三：蛋白質(zhì)電泳的機理1．蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì)：當(dāng)PH=PI時，所帶凈電荷為零；當(dāng)PHPI時，所帶凈電荷為負；當(dāng)PH距離PI越遠時，所帶電量越多。2．不同蛋白質(zhì)等電點不同，在同一緩沖

士鋒生物薄層色譜法介紹2014/06/24

薄層色譜具有設(shè)備簡單、速度快、分離效果好、靈敏度高以及能使用腐蝕性顯色劑等優(yōu)點，是一種微量的分離分析方法。它可以與光譜或質(zhì)譜結(jié)合起來，是一種很有發(fā)展前途的分析技術(shù)。薄層色譜是把吸附劑或支持物（如氧化鋁、硅膠和纖維素粉等）均勻地鋪在一塊玻璃板上形成薄層，將分離樣品滴加在薄層的一端，當(dāng)流動相沿著含有固定相的支持物上移動時，被分離組分就在固定相與流動相之間進行分配或吸附，經(jīng)過反復(fù)無數(shù)次的分配平衡或吸附平衡，zui后按照各個組分的差異而被分離。三、基本操作薄層色譜中，鋪薄層的板可用玻璃板，也可用塑料板。

士鋒生物瓊脂糖凝膠電泳實驗技巧2014/06/19

核酸分子是兩性解離分子，在高于其等電點的電泳緩沖液中，其堿基不解離，而磷酸基團全部解離，核酸分子因而帶負電荷，電泳時向正極遷移。瓊脂糖主要從海洋植物瓊脂中提取而來并經(jīng)糖基化修飾，為一種聚合鏈線性分子，使用瓊脂糖凝膠作為電泳支持介質(zhì)，發(fā)揮分子篩功能，使得大小和構(gòu)象不同的核酸分子的遷移率出現(xiàn)較大差異，從而達到分離的目的。瓊脂糖凝膠電泳操作簡單、快速，通過調(diào)整其使用濃度，使得分辨率達到大多數(shù)實驗的要求，因此成為分離、鑒定、純化核酸分子的常用方法。但操作過程中仍有不少要注意的問題。1凝膠制作1．1凝膠濃

士鋒生物雙向電泳的技術(shù)流程和樣品制備2014/06/17

基因組學(xué)蛋白質(zhì)組學(xué)：可視為分子生物學(xué)的大規(guī)模篩選技術(shù)，目的在于歸類細胞中的蛋白質(zhì)的整體分布，鑒定并分析感興趣的個別蛋白，zui終闡明它們的關(guān)系與功能。上述兩種學(xué)科的研究內(nèi)容在互補的水平上研究了細胞的分子架構(gòu)，又都在各自的水平上提供了增強對方效應(yīng)的信息，因此二者存在有很強的且?guī)в邢到y(tǒng)性相互關(guān)系。Applicationsofproteomics?Proteinidentification/characterization?Protein-proteininteraction?Post-transla

染色體免疫共沉淀法（ChIP）分析細胞和組織中未固定染色體中組2014/06/09

INTRODUCTIONIncellsａndtissues,thehistoneproteinsthatconstitutethenucleosomescanpresentmultiplepost-translationalmodifications,suchaslysineacetylation,lysineａndargininemethylation,serinephosphorylation,ａndlysineubiquitination.Ontheirown,orincombinatio

士鋒生物原位雜交與熒光原位雜交2014/06/04

一、原位雜交(InSituHybridization,ISH)是用標記的核酸探針，使用非放射檢測系統(tǒng)或放射自顯影系統(tǒng)，在組織切片、細胞涂片及染色體制片上等對核酸進行定性、定位和相對定量研究的一種分子生物學(xué)方法，具有靈敏、特異、直觀等優(yōu)點。已逐漸成為分子生物學(xué)和分子病理學(xué)的常見技術(shù)之一，廣泛應(yīng)用于腫瘤生物學(xué)、血液病理學(xué)、遺傳、微生物學(xué)、細胞和分子生物學(xué)、神經(jīng)內(nèi)分泌學(xué)、免疫學(xué)等領(lǐng)域及治療評估和預(yù)后判斷等研究中。菌落原位分子雜交：是指將轉(zhuǎn)化或感染后的菌落印影在濾膜上，用堿裂解，中和后洗凈烘干，再用目的

士鋒生物比色分析法和分光光度法測定蛋白質(zhì)含量2014/06/03

1.掌握比色分析法和分光光度法基本原理、標準曲線的制作及使用，標準管法結(jié)果計算2.熟悉蛋白質(zhì)含量測定常用方法、原理及應(yīng)用3.了解常用可見光、紫外分光光度計的測定原理及使用【教學(xué)內(nèi)容】1.酚試劑法蛋白質(zhì)含量測定Lambert-Beer定律，比色分析法和分光光度法基本原理,722型分光光度計使用，常用蛋白質(zhì)含量測定方法及應(yīng)用，酚試劑法測定蛋白質(zhì)含量原理、操作,標準曲線的制備及使用2.雙縮脲法蛋白質(zhì)含量測定自學(xué)和獨立完成實驗并與酚試劑法比較，結(jié)果計算3.紫外分光光度法蛋白質(zhì)含量測定紫外分光光度法測定蛋

士鋒生物纖維素酶活力的測定2014/05/29

纖維素酶是一種多組分酶，包括C1酶、CX酶和|?-葡萄糖苷酶三種主要組分。其中C1酶的作用是將天然纖維素水解成無定形纖維素，CX酶的作用是將無定形纖維素繼續(xù)水解成纖維寡糖，|?-葡萄糖苷酶的作用是將纖維寡糖水解成葡萄糖。纖維素酶水解纖維素產(chǎn)生的纖維二糖、葡萄糖等還原糖能將堿性條件下的3,5-二硝基水楊酸（DNS）還原，生成棕紅色的氨基化合物，在540nm波長處有zui大光吸收，在一定范圍內(nèi)還原糖的量與反應(yīng)液的顏色強度呈比例關(guān)系，利用比色法測定其還原糖生成的量就可測定纖維素酶的活力。三、實驗材料、

如何進行旋光法測定谷氨酸2014/05/26

谷氨酸鈉分子結(jié)構(gòu)中含有一個不對稱碳原子，具有光學(xué)活性，能使偏振光面旋轉(zhuǎn)一定角度，可用旋光儀測定其旋光度。三、試劑與儀器儀器旋光儀(精度±0.01°)備鈉光燈(鈉光譜D線589.3nm)。試劑鹽酸四、操作步驟1.稱取于98±1℃干燥5h的樣品10g(稱準至0.0001g)，加50mL水溶解并移入100mL容量瓶中，加20mL鹽酸，混勻，待冷卻至室溫，補加水至刻度，搖勻。2.在恒溫室(20℃)里將上述樣液倒入旋光管中，按一般旋光法操作，測定其旋光度，同時記錄樣液溫度。用旋光法測定含量時，比旋光度應(yīng)在

士鋒生物具體層析方法：氣相色譜層析2014/05/23

1)載氣常用的載氣主要有氮、氬、氫和二氧化碳等。這些氣體一般都由高壓氣瓶供給(2)進樣器氣相色譜儀可以用于分離固相、氣相和液相標本。液相標本采用微升注射器穿過橡皮隔片注入，氣相標本采用特種氣相注射器注入。(3)譜柱及加熱爐色譜柱一般由金屬或玻璃制成，通常采用的柱長2m~4m，內(nèi)徑2mm，毛細管柱長度可達20m～150m，內(nèi)徑為0.2mm。載體一般采用惰性、多孔的固體顆粒。多由硅藻土或玻璃珠制成，分析不同極性的微生物化合物，為了獲得zui適的分離條件，要求有不同固定相的載體。目前比較常用的載體有：