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細胞實驗技術及基本知識（三）2014/09/25

器械的清洗和消毒玻璃器械洗消：一、新的玻璃器皿的洗消：1.自來水刷洗，除去灰塵。2.烘干、泡鹽酸：烤箱中烘干，然后再浸入5％稀鹽酸中12小時以除去臟物、鉛、砷等物。3.刷洗、烘干：12小時后立即用自來水沖洗，再用洗滌劑刷洗，自來水沖干凈后用烤箱烘干。4.泡酸、清洗：用清潔液（重鉻酸鉀120g：濃硫酸200ml：蒸餾水1000ml）浸泡12小時，然后從酸缸內撈出器皿用自來水沖洗15次，zui后蒸餾水沖洗3-5次和用雙蒸水過3次。5.烘干、包裝：洗干凈后先烘干，然后用牛皮紙（油光紙）包裝。6.高壓消

無血清技術及其培養基2014/09/23

經歷了天然培養基、合成培養基后，無血清培養基和無血清培養成為當今細胞培養領域的一大趨勢。采用無血清培養可降低生產成本，簡化分離純化步驟，避免病毒污染造成的危害。無血清培養基(serumfreemedium,SFM):是不需要添加血清就可以維持細胞在體外較長時間生長繁殖的合成培養基。但是它們可能包含個別蛋白或大量蛋白組分。雖然基礎培養基加少量血清所配制的*培養基可以滿足大部分細胞培養的要求，但對有些實驗卻不適合，如觀察一種生長因子對某種細胞的作用，這時需要排除其他生長因子的干擾作用。而血清中可能含

無菌操作注意事項2014/09/22

體外培養細胞缺乏抗感染能力，所以防止污染是決定培養成功或失敗的首要條件。即便使用設備完善的實驗室。若實驗者粗心大意，技術操作不規范,也會導致污染。因而．為在一切操作中為zui大可能的保證無菌。每一項工作都必須做到有條不紊和*靠?！九囵B前準備】在開始實驗前要制定好實驗計劃和操作程序。有關數據的計算要事先做好。根據實驗要求，準備各種所需器材和物品、清點無誤后將其放置操作場所(培養室、超凈臺)內，然后開始消毒。這可以避免開始實驗后，因物品不全往返拿取而增加污染機會。【操作野消毒】無菌培養室每天都要用0

細胞分化與腫瘤2014/09/18

腫瘤是細胞在各種致瘤因素的作用下，基因發生改變，失去對其生長的正常調控，導致細胞異常增生。惡性腫瘤又稱為癌癥（cancer），是目前危害人類健康zui嚴重的一類疾病。我國城市地區居民死因*位為惡性腫瘤。腫瘤細胞在很多生物學特性上不同于正常細胞，也有別于修復性增生的細胞，具有明顯的去分化現象。一、腫瘤細胞的分化特征惡性腫瘤細胞的特征之一是分化程度低，表現為形態上的幼稚性，功能上的異常，細胞的多種表型（phenotype）又回到原始的胚胎細胞表型，即發生細胞的去分化現象。機體在致癌物質的作用下，干細

實驗室細胞培養注意事項2014/09/15

1.實驗進行前，無菌室及無菌操作臺(laminarflow)以紫外燈照射30-60分鐘滅菌，以70%ethanol擦拭無菌操作抬面，并開啟無菌操作臺風扇運轉10分鐘后，才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株，且即使培養基相同亦不共享培養基，以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺，以70%ethanol擦拭無菌操作抬面。操作間隔應讓無菌操作臺運轉10分鐘以上后，再進行下一個細胞株之操作。2.無菌操作工作區域應保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時

蝗蟲減數分裂過程觀察2014/09/11

一實驗目的1.通過實驗了解高等動物精子形成中的減數分裂過程，觀察其染色體的動態變化；2.學習并掌握制備蝗蟲減數分裂玻片標本的方法。二實驗原理在高等生物的雌雄性細胞形成的過程中，由有性組織(如花藥和胚珠、精巢和卵巢)中的某些細胞分化為孢母細胞(2n)，以及精母與卵母細胞(2n)。進一步由這些細胞進行減數分裂，zui終各自產生4個小孢子或精細胞，或是分別產生一個大孢子或卵細胞與三個退化的極體(1n)。在減數分裂過程中，可以辨認染色體形態和數量上的動態變化，從而為遺傳學研究中遠緣雜種的分析、染色體工程

如何進行BrdU標記法2014/09/09

1．細胞以1.5×105/ml細胞數接種于直徑35ml培養皿中（內放置一蓋玻片），培養1天，用含0.4％FCS培養液同步化3天，使絕大多數細胞處于G0期。2．終止細胞培養前，加入BrdU（終濃度為30μg/L），37℃，孵育40min。3．棄培養液，玻片用PBS洗滌3次。4．甲醇/醋酸固定10min。5．經固定的玻片空氣干燥，0.3％H2O2-甲醇30min滅活內源性氧化酶。6．5％正常兔血清封閉。7．甲酰胺100℃，5min變性核酸。8．冰浴冷卻后PBS洗滌，加1抗即抗小鼠BrdU單抗（工作濃

傳代培養細胞染色體顯示法2014/09/01

1．培養細胞：取處于指數生長期、用較大瓶皿培養的、80％～90％匯合單層培養細胞。2．加秋水仙素：使用zui終濃度為0.02～0.8微克/毫升營養液，溫箱繼續培養6～10小時；或用低溫封閉法：把培養細胞置于4℃條件下6～12小時后，再于37℃溫箱繼續培養6～10小時處理（加秋水仙素）。3．采集分裂細胞：可利用分裂中期細胞體變圓與底物附著不牢特點，此時手持培養瓶，左右反復橫向水平搖動，令培養液在培養細胞表面反復沖刷。應用此法可使90％的中期分裂細胞從瓶壁脫落，注意勿用力過猛，以防多量非分裂細胞脫落

士鋒生物人類外周血染色體制備2014/08/27

一、原理人外周血小淋巴細胞，通常都處在G1期（或G0期），一般情況下不進行分裂。如在培養液中加入植物血凝素（PHA），這種小淋巴細胞受到刺激可轉化為淋巴母細胞，進入有絲分裂。短期培養后，經秋水仙素處理，低滲和固定，即可得到大量的有絲分裂細胞。人體的1ml外周血內一般含有約1×106～3×106個小淋巴細胞，足夠染色體標本制備和分析之用。二、用品和試劑1．5ml注射器（7號針尖），培養瓶、刻度吸管，需15磅滅菌20分鐘。離心管、吸管、量筒、載玻片，經洗液按常規清洗、烘干備用。2．超凈工作臺，恒溫培

骨髓細胞染色體標本制備2014/08/25

一、原理骨髓染色體標本制備通常用于白血病患者，特別是慢性或急性粒細胞性白血病，因為骨髓反映粒系統細胞增生情況，這些病人不宜用外周血。即使是淋巴細胞性白血病，也不主張用外周血，因為加PHA刺激外周血培養，只能獲得正常淋巴細胞分裂相，并不能反映那些病理淋巴細胞的染色體改變。骨髓細胞屬不斷增殖的細胞，培養可分短期培養和直接制片法，無論哪種其培養液中均不需加PHA。二、用品和試劑同外周血染色體制備。三、操作步驟（一）短期培養法1．取材、培養：從髂骨取骨髓液0.2—0.5ml，無菌注入裝有5ml培養液的培

細胞器的光鏡切片和電鏡照片觀察實驗2014/08/19

一、三種細胞器的光鏡切片（一）高爾基復合體(GolgiComplex)用鍍銀法染色的豚鼠脊神經節光鏡切片:神經細胞因合成運輸大量的蛋白質而含有發達的內質網和高爾基復合體，在低倍鏡下觀察，神經節的假單極細胞體被神經束分隔成群。神經細胞的胞體呈圓形或橢圓形。轉換高倍鏡觀察，細胞中央不著色的圓形區為細胞核。在核的周圍有黑褐色顆粒狀或呈不規則的條索狀結構即為高爾基復合體。細胞器的光鏡切片和電鏡照片觀察實驗圖5一l神經節細胞(示高爾基復合體)(二)尼氏小體(Nissl’sBody)甲苯胺蘭染色的牛脊髓涂片

如何進行細胞電融合實驗2014/08/14

目的要求使學生在了解電融合原理的基礎上，學會掌握各種細胞懸液的制備及電融合過程的操作方法。實驗原理游離的動物細胞或原生質體，置于電融合室中，在高頻交流電場的作用下，細胞被極化，成為偶極子，造成細胞之間相互連接，如果施加的高頻交流電壓（既正弦波的P-P值）過高或作用時間過長，則細胞連接成串珠狀，應適當控制以上條件，盡量是兩細胞處于點接觸狀態；然后施加方波脈沖予以刺激，由于電脈沖的瞬間作用，可擊破兩細胞接觸點部位的質膜，此時質膜脂類分子發生重組，同時由于細胞表面的張力作用，使兩細胞融合逐步完成。實驗

士鋒生物細胞凝集反應實驗2014/08/13

細胞質膜是由蛋白質不同程度鑲嵌在脂雙層中所形成的動態流動結構，蛋白質和脂類分子又與寡糖鏈結合為糖蛋白和糖脂分子，糖蛋白和糖脂分子伸至細胞表面的分枝狀寡糖鏈在質膜表面形成細胞外被（又稱為糖萼）。許多研究結果表明：細胞間的分子識別、細胞的生長和分化、免疫反應和腫瘤發生等均與細胞外被（分枝狀寡糖鏈）有關。凝集素能與細胞外被的糖分子相連接、在細胞間形成“橋”，從而達到細胞凝集的效果。1．實驗目的1．1觀察血細胞的凝集現象；1．2掌握凝集素促使細胞凝集的原理。2．實驗原理凝集素（1ectin）是一類含糖的

動物細胞培養技術平臺2014/08/12

動物細胞大規模培養已成為生物制藥領域zui重要的關鍵技術之一，并以其研究的深入和進展推動生物技術產業的迅速發展。專家預言：蛋白治療藥物如糖蛋白、抗體和多肽藥物僅僅只是剛剛開始進入市場，預計在下一個10年或20年會有更為快速的發展。屆時，蛋白治療藥物的迅速增長和市場需求將遠遠超過*的生產能力。動物細胞規模化生產重組蛋白和抗體的工藝選擇可考慮使用當前較成熟的工業化支持技術平臺，以縮短產品工藝研發的時間，加快工業化進程。當前已獲FDA批準的生物技術產品以及公開發表的生產工藝中，占有主流優勢的是攪拌式生

士鋒生物染色體分帶技術2014/08/07

染色體顯帶技術是在顯示染色體基礎上發展起來的技術，其優點是能顯現染色體本身更細微的結構，有助于更準確地識別每條染色體及染色體異常疾病。染色體分帶技術能適用于各種細胞染色體標本。染色體顯帶是沿著整條染色體的長軸，能顯現出著色深淺不同、橫向走的帶型。目前認為染色體顯帶現象是染色體結構所致。但用特殊方法處理后，再用染料染色，則帶型更加清晰，隨顯帶方法不同，顯現出的帶型的特點也不一樣，這說明帶的出現與染料的特異結合相關。人類染色體能顯現出近2000個G帶，這些帶再融合成一般顯微鏡下可見的850條左右的高

士鋒生物細胞原代培養2014/08/06

一、原理將動物機體的各種組織從機體中取出，經各種酶（常用胰蛋白酶）、螯合劑（常用EDTA）或機械方法處理，分散成單細胞，置合適的培養基中培養，使細胞得以生存、生長和繁殖，這一過程稱原代培養。二、儀器、材料及試劑儀器：培養箱（調整至37℃），培養瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、紗布、手術器械、血球計數板、離心機、水浴箱（37℃）材料：胎鼠或新生鼠試劑：1640培養基（含20%小牛血清），0.25%胰酶，Hank’s液，碘酒三、操作步驟（一）胰酶消化法1、器材：將孕鼠或新生小鼠拉頸椎致

士鋒生物免疫熒光樣品制備與觀察2014/08/04

一、原理（一）什么是熒光，簡單地講，當用一定波長的光（如紫外光）照射某種物質時，經過照射的物質在極短時間內即可發射出一種可見的光，這種光即為熒光。在生物中，由于產生熒光的方式不同，可以概括地歸納為以下幾種：1．自發熒光：在生物的某些組織中，經紫外線照射后能直接發射出熒光的稱為自發熒光（或直接熒光）。如植物組織中的葉綠素，經紫外線照射后，即可發出紅色熒光。2．次生熒光：有些生物組織經紫外線照射后，并不能發出熒光，但是當它吸收熒光染料后也可以產生熒光，這種稱為次生熒光（或間接熒光）。如吖啶橙，DAP

PCR產物的克隆技術2014/07/23

在許多研究中,需要將PCR產物克隆,以獲得目的dna片段。此時,所用PCR循環數應盡量小,以減少平臺效應或非特異性擴增產物的干擾。通常將PCR產物插入到載體中有下列一些方法。1.平末端連接：由于Taqdna聚合酶往往在PCR產物3'端加上多余的非模板依賴堿基,在用平末端連接克隆PCR產物前,可用Klenow片段或T4DNA聚合酶處理補平末端。2.在PCR產物尾部加dT或ddT：TaqDNA聚合酶會在3'端加上多余的非模板依賴堿基,而且對A優先聚合,所以PCR產物末端的多余堿基大部分都是A.。利用

純水和超純水的區別及純水儀的工作原理2014/07/21

純水和超純水是分子和細胞實驗中常用的實驗試劑，不同的實驗需要的水的級別是不一樣的，常常遇見剛進實驗室的同學常有個疑問：純水和超純水是一樣的么？下文主要講述了純水和超純水區別以及純水儀和超純水儀的工作原理。純水和超純水區別在正確選擇實驗室超純水機之前，我們必須很好地了解如下幾個概念：什么是純水?什么是超純水?二者有何區別?純水又稱純凈水，是指以符合生活飲用水衛生標準的水為原水，通過電滲析器法、離子交換器法、反滲透法、蒸餾法及其他適當的加工方法，制得的密封于容器內，且不含任何添加物，無色透明，可直接

PCR-酶聯免疫法檢測端粒酶活性攻略2014/07/17

1994年，Kim發明的TRAP由于具有靈敏度高等優點曾被廣泛應用于端粒酶的活性檢測中，不過安全性不夠，現在的端粒酶活性檢測實驗都在其基礎上進行了改良，更顯和人性化。以下是具體的實驗方法：端粒是真核生物染色體末端的特異DNA-蛋白結構，端粒DNA是一系列重復的富含G的DNA序列，這一序列在生物進化中有高度的保守性(人重復序列為TTAGGG)。已確認端粒在保護基因組DNA不被降解、防止染色體有害的結合(如染色體末端融合、重排、染色體移位和染色體缺失)中起重要作用。由于dna聚合酶不能復制線性DNA