培養(yǎng)液：MEM(GIBCO)，20％FBS，雙抗100IU／ml；

原代細(xì)胞培養(yǎng)：取5kg左右兔空氣栓塞法處死后斷頭，于無(wú)菌條件下從枕大孔處用大止血箝扳開(kāi)顱骨暴露并小心取出腦組織放入裝有DMEM的培養(yǎng)皿中，用眼科鑷分離基底動(dòng)脈后按常規(guī)平滑肌方法貼塊培養(yǎng)。

傳代：

（1）吸除培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液。

（2）D-Hanks液沖洗2遍。

（3）加入消化液少許，以能覆蓋瓶底為限。

（4）倒置顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞胞質(zhì)回縮、細(xì)胞間隙增大時(shí)，立即終止消化。

（5）吸除消化液，向瓶底注入D-Hanks液數(shù)毫升，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶，把殘留消化液沖掉。

（6）用吸管吸取培養(yǎng)液輕輕反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞，使之從瓶壁脫離形成細(xì)胞懸液；傳代將原代細(xì)胞按1：1傳代，此后按1：3進(jìn)行傳代。

（7）傳代后細(xì)胞放置在37℃，5%CO2孵育箱內(nèi)培養(yǎng)。

我在做細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)的一些小經(jīng)驗(yàn)：

（1）在超凈臺(tái)操作（廢液杠放入）前要用紫外燈照30MIN以上，75%酒精擦手

（2）貼塊法要細(xì)胞貼壁好一定剪的夠碎（先把血管剪成小段再狂剪一頓），鋪開(kāi)時(shí)要平均的展開(kāi)，聚在一起翻面時(shí)容易沖掉。

（3）做原代的時(shí)候從取材直到放進(jìn)孵箱都要嚴(yán)格無(wú)菌操作，該換的管子還是換了，別省了根管子壞了一瓶細(xì)胞

（4）原代培養(yǎng)FBS含量高些，原代很嬌貴的