1、脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞一般按2：1-5：1的密度混合，有的報道可以到10：1，不過總體來說我們常選3：1-5：1，記住，原則是脾細(xì)胞的數(shù)量比骨髓瘤的多。

2、融合前，一般用HAT培養(yǎng)基做飼養(yǎng)細(xì)胞鋪板，這是融合前的準(zhǔn)備工作，因為飼養(yǎng)細(xì)胞分泌的某些細(xì)胞因子有助與融合的雜交瘤細(xì)胞生長，并且提供一定的細(xì)胞密度。通常是可以融合前一天做飼養(yǎng)細(xì)胞，老鼠選ICR或是BALB/C與ICR雜交的鼠，一只老鼠可以鋪2-3塊96孔板。

3、我們?nèi)诤线x用96孔細(xì)胞培養(yǎng)板。融合時將脾細(xì)胞與骨髓瘤混合后離心，然后用手掌稍稍搓離心管，將離心壓緊的細(xì)胞松散開，再加融合劑PEG，在45秒內(nèi)加完1毫升的PEG，之后靜置30-60秒，這個時間時給PEG作用使細(xì)胞膜融合的，此時將離心管握在手中，利用自己的體溫給細(xì)胞一個比較溫暖的環(huán)境。之后加30-40毫升DMEM終止（1640也行，只要用不*培養(yǎng)基即可），一般前30-45秒速度慢一些，中間30秒可以一滴滴的加，zui后30-60秒就快速加。終止后靜置在37度水浴約10分鐘，然后離心，用HAT重懸，分裝96孔板即可。

4、融合后3-4天補加HAT培養(yǎng)基（2-3滴），融合后7-8天則開始給細(xì)胞換液，用HT培養(yǎng)基培養(yǎng)，根據(jù)你的細(xì)胞具體情況看，可以換1-2次液。一般細(xì)胞如果狀態(tài)好的話，9-11天就可以生長起來了，后面檢測細(xì)胞時HT培養(yǎng)細(xì)胞。