培養(yǎng)細胞活力測定

來源：上海士鋒生物科技有限公司 2014年11月20日 07:56

培養(yǎng)細胞活力測定是腫瘤體外研究中應(yīng)用zui廣的技術(shù)手段之一。

任何培養(yǎng)瓶內(nèi)生長的細胞都由死細胞和活細胞組成，從形態(tài)上區(qū)別死、活細胞是困難的。

方法：四唑鹽（MTT）比色法

四唑鹽（MTT）商品名為噻唑藍

四唑鹽比色法的原理：活細胞中脫氫酶能將四唑鹽還原成不溶干水的藍紫色產(chǎn)物（formazan），并沉淀在細胞中，而死細胞沒有這種功能。二甲亞砜（DMSO）能溶解沉積在細胞中藍紫色結(jié)晶物，溶液顏色深淺與所含的formazan（甲月替）量成正比。再用酶標儀測定OD值。

MTT法簡單快速、準確，廣泛應(yīng)用于新藥篩選、細胞毒牲試驗、腫瘤放射敏感性實驗等。

操作步驟

（1）100μL單細胞懸液接種于96孔板（5×104）。37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一段時間（根據(jù)實驗目的決定培養(yǎng)時間）

（2）加入2mg/ml的MTT液（50μL/孔）；繼續(xù)培養(yǎng)3小時。

（3）吸出孔內(nèi)培養(yǎng)液后，加入DMSO液（150μL/孔），將培養(yǎng)板置于微孔板扳蕩器上振蕩10分鐘，使結(jié)晶物溶解。

（4）酶標儀檢測各孔OD值（檢測波長570納米）。記錄結(jié)果，繪制。

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