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細胞技術專題：大鼠肝星狀細胞培養實驗2014/03/03

實驗方法細胞培養技術實驗方法原理選用Wistar大鼠經消化酶灌注肝臟后,用分離液分離HSC，通過觀察其自發熒光及其顯著特征性結構的脂肪染色、細胞免疫化學染色等方法鑒定。實驗材料雄性SD大鼠試劑、試劑盒戊巴比妥鈉小牛血清DMEM酶消化液I、ⅡNycodenzD-Hanks’液HBSS臺盼蘭儀器、耗材手術器械尼龍網相差顯微鏡熒光顯微鏡實驗步驟一、實驗步驟1.大鼠腹腔麻醉后在超凈臺上剖腹，進行門靜脈插管。2.以D-Hanks’液灌注，同時剪開下腔靜脈，沖掉血液后，改灌以100ml酶消化液I(0.05%

細胞技術專題：大鼠星型膠質細胞培養實驗2014/03/03

標簽：大鼠星型膠質大鼠星型膠質細胞培養可以：（1）用于神經系統發育、分化及再生等基礎研究；（2）腦缺血預處理上調神經保護蛋白的機制研究；（3）腦損傷和腦疼痛的研究；（4）新蛋白的功能研究。實驗方法酶消化法胰酶消化法胰蛋白酶消化法實驗方法原理大鼠星形膠質細胞原代培養后，作膠質纖維酸性蛋白(GFAP)免疫細胞化學染色鑒定，應用缺氧D-Hank液及缺氧培養罐行OGD后用臺盼藍染色及乳酸脫氫酶(LDH)漏出率檢測細胞損傷程度。實驗材料Wistar大鼠乳鼠試劑、試劑盒FBSDMEM胰蛋白酶EDTA酒精儀器

細胞技術專題：神經膠質細胞培養實驗2014/03/03

標簽：神經膠質神經膠質細胞培養可以：（1）獲得神經膠質細胞；（2）用于神經膠質細胞電生理特性，如膜電位、去極化等；（3）用于免疫應答研究。實驗方法酶消化法胰蛋白酶消化法實驗方法原理神經細胞（神經元）不易培養，只有在適宜情況下，如接種在膠原底層上，或加入神經生長因子和膠質細胞因子時，可出現一定程度的分化，長出突起等現象，但很難使之增值。而神經膠質細胞是神經組織中比較容易培養的成分。實驗材料大鼠試劑、試劑盒MEMFBS胰酶EDTAD-Hanks’液儀器、耗材眼科剪滴管離心機培養皿CO2培養箱實驗步驟

細胞技術專題：大鼠大腦皮層神經元細胞培養實驗2014/02/25

標簽：大鼠大腦皮層神經元大鼠大腦皮層神經元細胞培養可以：（1）獲得大鼠大腦皮層神經元細胞；（2）用于神經元細胞定向分化研究；（3）用于神經元細胞凋亡研究。實驗方法機械性劃割培養酶消化法實驗方法原理SD胎鼠腦皮層神經元體外培養7d，微量移液器塑料滴頭于培養孔內機械性劃割培養之神經元，依劃割程度不同分為輕、中、重3組，對照組除不進行機械性劃割，其余處理同損傷組，傷后不同時間點（10，30min，1，3，6，12，24h）檢測細胞存活率及培養液上清乳酸脫氫酶(LDH)含量。實驗材料SD大鼠試劑、試劑盒

細胞技術專題：人臍動脈平滑肌細胞培養實驗2014/02/25

標簽：臍動脈平滑肌細胞培養人臍動脈平滑肌細胞培養可以：（1）獲得人臍動脈平滑肌細胞；（2）作為重大動脈疾病的研究底物；（3）研究血管模型；（4）對血管疾病的藥理學和治療繼續提供信息。實驗方法消化法貼塊法實驗方法原理運用消化法進行人臍動脈血管平滑肌細胞的培養，并用倒置顯微鏡進行形態學觀察和用免疫組化對培養細胞進行鑒定。實驗材料臍帶試劑、試劑盒膠原酶消化液胰蛋白酶膠原酶彈性蛋白酶DMEM儀器、耗材眼科剪滴管離心機培養皿CO2培養箱實驗步驟一、實驗步驟1.冰冷無菌D-Hanks’液中漂洗，用眼科剪仔細

細胞技術專題：兔膀胱平滑肌細胞培養實驗2014/02/25

標簽：兔膀胱平滑肌細胞培養兔膀胱平滑肌細胞培養可以：（1）分離得到高純度兔膀胱平滑肌細胞；（2）進行細胞學鑒定研究；（3）用于細胞學其他研究。實驗方法酶分離法實驗方法原理運用顯微手術器械在肉眼下仔細剔除膀胱黏膜層及漿膜層后，完整分離膀胱平滑肌層。然后以酶分離法獲取兔膀胱平滑肌細胞，體外原代和傳代培養分離細胞。在倒置顯微鏡下觀察細胞形態及生長狀況，同時進行細胞爬片H-E染色和透射電鏡等形態學觀察分析，并應用免疫熒光染色平滑肌*的α-肌動蛋白進行細胞學鑒定分析。zui后根據細胞計數繪制細胞生長曲線和

細胞技術專題：大鼠腦微血管內皮細胞原代培養實驗2014/02/25

標簽：大鼠腦微血管內皮細胞原代培養大鼠腦微血管內皮細胞原代培養可以：（1）應用于血腦屏障的研究；（2）腦血管疾病的病理生理及分子生物學研究；（3）新藥篩選；（4）腦微血管內皮細胞生理生化及藥理學研究。實驗方法酶消化法實驗方法原理丁香園站友參考文獻采用以大腦皮質為材料、酶消化及梯度離心分離腦微血管段并進行原代培養,，成功地摸索出大鼠腦微血管內皮細胞分離和原代培養的方法，并獲得純度較高的腦微血管內皮細胞。實驗材料SD大鼠試劑、試劑盒纖連蛋白Ⅳ型膠原明膠肝素鈉堿性成纖維細胞生長因子青霉素鏈霉素NaHC

細胞技術專題：大鼠肝星狀細胞原代培養實驗2014/02/25

標簽：大鼠肝星狀細胞原代培養大鼠肝星狀細胞原代培養可以：（1）用于細胞保種；（2）用于分子生物學研究；（3）用于基因治療研究。實驗方法胰酶消化法實驗方法原理將小鼠的肝細胞從機體中取出，經胰酶、螯合劑（常用EDTA）處理，分散成單細胞，置合適的培養基中培養，使細胞得以生存、生長和繁殖。實驗材料SD大鼠試劑、試劑盒戊巴比妥鈉小牛血清DMEM酶消化液D-Hanks'液酚紅臺盼蘭HBSS氯化鈉PBS儀器、耗材手術刀手術剪尼龍網相差顯微鏡熒光顯微鏡實驗步驟一、實驗材料準備1.動物：雄性SD大鼠(體重250

細胞技術專題：腫瘤細胞原代培養實驗2014/02/25

標簽：腫瘤細胞原代培養腫瘤細胞原代培養可以：（1）研究癌變機理；（2）研究抗癌藥檢測；（3）研究癌分子生物學；（4）用于闡明和解決癌癥。詳細實驗方法組織塊法酶消化法脫落細胞法實驗方法原理腫瘤細胞的原代培養與正常細胞的原代培養的條件基本相似。一般常用原代細胞的基礎培養基，10%血清濃度即可，在原代培養時需加入原代細胞培養的特制添加物，或原患者血清（1%-2%）以利細胞生長。用細胞生長因子如胰島素、松、雌激素等等。也可以考慮動物媒介培養。根據細胞種類不同選用不同的促細胞生長因子。實驗材料瘤組織試劑、

細胞技術專題：staurosporine誘導小鼠心肌細胞凋亡模型構建2014/02/20

原代心肌細胞的培養及實驗方案取出生后0~24hC57BL/6cr小鼠心臟，按改良的Lader方法進行細胞的分離。獲取博動的心臟迅速放置于無Ca2+、Mg2+的Hank’s平衡液中。剪碎心臟，放置在4℃條件下100g/L的Trypsin溶液中消化16~18h，用Trypsin抑制劑中止消化。然后在37℃下，用膠原酶Ⅱ于CO2培養箱內，在搖床上繼續孵化消化45~60min，zui后用70μm直徑尼龍過濾網過濾獲取心肌細胞，用含有25mmol/LHCO3-，100mL/LFSB，1×105u/L青霉素

細胞技術專題：腫瘤細胞的軟瓊脂集落培養實驗2014/02/20

標簽：腫瘤軟瓊脂集落在體外培養基中由一個祖先細胞增殖形成的細胞團，稱之為集落。腫瘤細胞能無限繁殖，所以具有這種能力，而成熟分化的細胞則不能形成集落。實驗方法基本方案實驗方法原理HL-60細胞是一種急性早幼粒細胞白血病細胞，在體外無需加刺激因子，可在軟瓊脂培養基中形成集落。二甲基亞砜是一種細胞分化誘導劑，經二甲基亞砜處理后的HL-60細胞按粒系途徑定向成熟分化，同時細胞的增殖力降低，幾乎全部細胞喪失了軟瓊脂中形成集落的能力。因此，這種方法可用于細胞分化的基礎研究和臨床腫瘤治療的療效檢驗等方面。實驗

細胞技術專題：大鼠胰島細胞培養實驗2014/02/20

細胞培養技術實驗方法原理水合氯醛腹腔麻醉，采用膠原酶ⅴ逆行灌注、原位消化及Ficoll-400梯度離心的方法分離、純化大鼠胰島，并分離、培養胰島單細胞。實驗材料一周齡Wistar大鼠試劑、試劑盒D-Hanks’液胰蛋白酶Ⅴ型膠原酶葡萄糖碘乙酸儀器、耗材手術剪手術鉗眼科剪刀眼科鑷子大頭針手術刀片培養皿實驗步驟一、實驗步驟1.一周齡Wistar大鼠，斷頸處死，于75%乙醇浸泡15分鐘，無菌取出胰腺，于冰冷無菌D-Hanks’液中漂洗，用眼科剪仔細清除脂肪、包膜、血管等胰外組織，轉入青霉素小瓶中。2.

細胞技術專題：大鼠乳鼠成骨細胞培養實驗2014/02/20

標簽：大鼠乳鼠成骨細胞大鼠乳鼠成骨細胞培養培養可以：（1）獲得大鼠乳鼠成骨細胞；（2）用于骨修復的細胞學機制研究。實驗方法酶消化法實驗方法原理取材于出生2~3d小鼠顱骨，以含20%胎牛血清的DMEM培養液進行培養，采用膠原酶消化法分離成骨細胞，并進行細胞接種與傳代。采用膠原酶消化法分離培養成骨細胞是一種可靠、簡便、快速的細胞原代分離培養方法。實驗材料SD大鼠試劑、試劑盒F12*培養液胰蛋白酶Ⅱ型膠原酶酒精儀器、耗材手術器械磁力攪拌器實驗步驟一、實驗步驟1.拉頸處死24小時內新生的SD大鼠，75%

細胞技術專題：光學顯微鏡檢測腫瘤細胞形態實驗2014/02/20

標簽：光學顯微鏡檢測腫瘤細胞形態光學顯微鏡檢測腫瘤細胞形態可以：（1）輔助判斷腫瘤細胞是否凋亡；（2）用于病理檢查；（3）提取腫瘤細胞微細結構信息。詳細實驗方法瑞氏-吉姆薩混染法HE染色法實驗方法原理吉姆薩染液由天青，伊紅組成。染色原理和結果與瑞特染色法基本相同。1）嗜酸性顆粒為堿性蛋白質，與酸性染料伊紅結果，染粉紅色，稱為嗜酸性物質；2）細胞核蛋白和淋巴細胞胞漿為酸性，與堿性染料美藍或天青結合，染紫藍色，稱為嗜堿性物質；3）中性顆粒呈等電狀態與伊紅和美藍均可結合，染淡紫色，稱為中性物質。PH對

細胞技術專題：小鼠肝細胞原代培養實驗2014/02/20

標簽：小鼠肝細胞原代培養小鼠肝細胞原代培養可以：（1）用于細胞保種；（2）用于分子生物學研究；（3）用于基因治療研究。實驗方法胰酶消化法實驗方法原理將小鼠的肝細胞從機體中取出，經胰酶、螯合劑（常用EDTA）處理，分散成單細胞，置合適的培養基中培養，使細胞得以生存、生長和繁殖。實驗材料小鼠試劑、試劑盒DMEM無血清DMEM培養基胰酶PBS儀器、耗材飯盒紗布剪子鑷子燒杯平皿研磨玻片濾網離心管6孔培養板吸管移液管手套微量加樣器實驗步驟一、實驗材料準備1.動物：小鼠。2.試劑：DMEM(含血清)、無血清

細胞技術專題：腫瘤細胞侵襲試驗（Tumour Invasion Assay）2014/02/18

一、原理Matrigel是從小鼠EHS肉瘤中提取的基質成分，含有LN、IV型膠原、接觸蛋白和肝素硫酸多糖，鋪在無聚乙烯吡硌烷酮的聚碳酸酯濾膜上，能在DMEM培養基中重建形成膜結構，這種膜結構與天然基質膜結構極為相似。濾膜孔徑一般為8um，而且膜孔都被Matrigel覆蓋，細胞不能自由穿過，必須分泌水解酶，并通過變形運動才能穿過這種鋪有Martrigel的濾膜，這與體內情況較為相似。鋪有Martrigel的濾膜放在以BlindWell腔或MICS腔上下室之間，鋪有Martrigel面朝向上室，在下

細胞技術專題：細胞劃痕實驗2014/02/18

材料：6孔板marker筆直尺20微升槍頭（滅菌）無血清培養基PBS準備：所有能滅菌的器械都要滅菌，直尺和marker筆在操作前紫外照射30min（超凈臺內）流程：1、先用marker筆在6孔板背后，用直尺比著，均勻地劃橫線，大約每隔0.5~1cm一道，橫穿過孔。每孔至少穿過5條線。2、在空中加入約5X105個細胞，具體數量因細胞不同而不同，掌握為夜能鋪滿。3、第二天用槍頭比著直尺，盡量垂直于背后的橫線劃痕，槍頭要垂直，不要傾斜。4、用PBS洗細胞3次，去除劃下的細胞，加入無血清培養基。5、放入

細胞技術專題：平板細胞克隆形成試驗2014/02/18

概念：細胞克隆形成率即細胞接種存活率，表示接種細胞后貼壁的細胞成活并形成克隆的數量。貼壁后的細胞不一定每個都能增殖和形成克隆，而形成克隆的細胞必為貼壁和有增殖活力的細胞。克隆形成率反映細胞群體依賴性和增殖能力兩個重要性狀。基本步驟：1、取對數生長期的各組細胞，分別用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成單個細胞，并把細胞懸浮在10%胎牛血清的DMEM培養液中備用。2、將細胞懸液作梯度倍數稀釋，每組細胞分別以每皿50、100、200個細胞的梯度密度分別接種含10mL37℃預溫培養液的皿中，并輕輕轉動，使細

細胞技術專題：細胞周期測定實驗2014/02/18

標簽：細胞周期體外培養周期測定細胞周期測定可以：（1）作為生物相容性評價指標；（2）用于研究細胞凋亡；（3）作為選擇細胞的依據。詳細實驗方法細胞計數法BrdU滲入法流式細胞儀測定法實驗方法原理體外培養細胞生長、分裂繁殖的能力，可用分裂指數來表示。它與生長曲線有一定的，如隨著分裂指數的不斷提高，細胞也就進入了指數生長期。分裂指數指細胞群體中分裂細胞所占的百分比，它是測定細胞周期的一個重要指標，也是不同實驗研究選擇細胞的重要依據。實驗材料細胞試劑、試劑盒胰酶甲醇培養液冰醋酸Giemsa染液儀器、耗材

細胞技術專題：大鼠主動脈內皮細胞培養實驗2014/02/18

標簽：大鼠主動脈內皮細胞細胞培養大鼠血管內皮細胞培養可以：（1）用于血液流動性、防止血栓形成、調節血管張力等研究；（2）用于選擇性通透性以及免疫調節等方面研究。實驗方法貼塊法實驗方法原理貼塊法適用于內皮細胞產量低的、管徑較小血管的內皮細胞培養，其方法較酶消化法簡便、經濟。但缺點使易混有成纖維細胞和平滑肌細胞，前者的貼壁時間和內皮接近，后者貼壁較內皮慢，而且會被肝素所抑制。實驗材料雄性Wistar大鼠試劑、試劑盒DMEM胎牛血清內皮細胞生長因子肝素鈉青鏈霉素明膠胰蛋白酶PBSD-Hanks’液儀器