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免疫學(xué)技術(shù)專題：中性粒細(xì)胞吞噬功能的測定2014/06/18: 中性粒細(xì)胞（polymorphonuclearleukocyte，PMN）的功能包括粘附、移動、吞噬殺菌等，是機(jī)體天然免疫力的重要組成部分。試劑及材料1.白色葡萄球菌2.肉湯培養(yǎng)基3.鹼性美藍(lán)液操作方法1.菌液的制備將白色葡萄球菌接種于中，放37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)12h左右；置水浴中加熱100℃10min殺死細(xì)菌，用無菌生理鹽水稀釋成6×108細(xì)菌/ml備用；2.用血紅蛋白吸管吸取受試者耳垂或指血40μl，立即加入盛有20μl肝素（濃度為20U/ml）的潔凈凹玻片的凹孔內(nèi)，輕輕攪動混勻，再加上述葡萄球

免疫學(xué)技術(shù)專題：組織病理實驗2014/06/03: 標(biāo)簽：組織病理組織學(xué)技術(shù)包括、組織學(xué)制片技術(shù)、胚胎學(xué)制片技術(shù)、組織化學(xué)技術(shù)、熒光組化及免疫組化技術(shù)、組織培養(yǎng)技術(shù)、各種特殊顯微技術(shù)、電鏡組織學(xué)技術(shù)。組織學(xué)技術(shù)不但應(yīng)用于組織學(xué)本學(xué)科，并且廣泛應(yīng)用于其他多學(xué)科，如生物學(xué)、解剖學(xué)、病理學(xué)、腫瘤學(xué)、法醫(yī)學(xué)、臨床診斷學(xué)等。實驗方法石蠟切片法冰凍切片實驗方法原理石蠟切片是zui基本的切片技術(shù)，冰凍切片和超薄切片等都是在石蠟切片基礎(chǔ)上發(fā)展起來的。蘇木素與伊紅對比染色法（簡稱H.E.對染法）是組織切片zui常用的染色方法。這種方法適用范圍廣泛，對組織細(xì)胞的各種

免疫學(xué)技術(shù)專題：染色質(zhì)免疫沉淀芯片（Chip-Chip）2014/06/03: 該技術(shù)能夠快速在目標(biāo)基因組的染色體中確定特異DNA結(jié)合蛋白的準(zhǔn)確結(jié)合位點，ChIP芯片也可以在一個基因組的任何感興趣的區(qū)域內(nèi)尋找染色體的結(jié)構(gòu)改變。一、ChIP-Chip的用途（1）在基因組范圍內(nèi)確定基因轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合位點和其他DNA結(jié)合蛋白或蛋白復(fù)合體的DNA結(jié)合位點。（2）染色體活性狀態(tài)的定量分析。（3）組蛋白修飾的功能研究。通過用?；蚣谆慕M蛋白的特異抗體和沒有進(jìn)行修飾的組蛋白的特異抗體，可以確定與組蛋白修飾有關(guān)的結(jié)合模式的變化。（4）聚合酶活性的定量分析。（5）精煉生物信息方法

免疫學(xué)技術(shù)專題：斑點金免疫滲濾測定法（DIGFA）2014/06/03: 基本原理斑點金免疫滲濾測定法是在斑點免疫滲濾測定法基礎(chǔ)上，改用膠體金標(biāo)記物代替酶，省去底物顯色的步驟。試驗方法是以硝酸纖維素膜（NC膜）為載體，將試劑及標(biāo)本滴加在膜上，通過滲濾而逐步反應(yīng)。全過程可于數(shù)分鐘內(nèi)完成，陽性結(jié)果在膜上呈紅色斑點。試劑及材料1.滲濾裝置：為一塑料小盒（4x3x0.6cm），分為底、蓋兩層，蓋的中央有一個直徑0.5cm的小孔。盒底充填吸水性較強的墊料，蓋孔下，緊貼墊料放置一片NC膜。緊閉盒蓋，即為滲濾裝置。在孔中的NC膜上點加1-2ml特異性抗體(一抗)或抗原，室溫自然干燥

免疫組化專題：流式細(xì)胞儀檢測技術(shù)實驗2014/06/03: 標(biāo)簽：流式細(xì)胞儀流式細(xì)胞儀（flowcytometer）是一種能夠探測和計數(shù)以單細(xì)胞液體流形式穿過激光束的細(xì)胞檢測裝置，由于在檢測中使用的細(xì)胞標(biāo)志示蹤物質(zhì)為熒光標(biāo)記物，因此，用來分離、鑒定細(xì)胞的流式細(xì)胞儀有被稱為熒光激活細(xì)胞分類儀，是分離和鑒定細(xì)胞群及亞群的一種強而有力的應(yīng)用工具。實驗方法流式細(xì)胞儀實驗方法原理流式細(xì)胞儀的使用一般分為三個步驟。*，是儀器前階段，包括試劑的準(zhǔn)備，細(xì)胞制備、細(xì)胞的熒光染色；第二，是流式細(xì)胞儀階段，主要是儀器的操作；第三，是結(jié)果分析階段。實驗材料淋巴細(xì)胞外周血的白細(xì)胞

免疫組化專題：腫瘤細(xì)胞體外傳代培養(yǎng)及保種2014/06/03: 一.細(xì)胞復(fù)蘇與培養(yǎng)將液氮或-80℃保存的腫瘤細(xì)胞于37℃水浴，快速溶化，用8.0ml培養(yǎng)基混勻已融化的腫瘤細(xì)胞懸液，于1500轉(zhuǎn)/分，離心3分鐘。棄上清，再吸取8.0ml培養(yǎng)基質(zhì)混勻細(xì)胞沉淀，再1500轉(zhuǎn)/分，離心3分鐘，棄上清，細(xì)胞沉淀用1.0ml培養(yǎng)基混勻，備用。另取一個75cm2方瓶，加入14.0ml培養(yǎng)基質(zhì)，將上述制備的含腫瘤細(xì)胞懸液(1.0ml)加入此方瓶中，于37℃，5%CO2孵育箱中培養(yǎng)。若此腫瘤細(xì)胞懸浮生長，大約3－4天細(xì)胞基質(zhì)會變黃，5.0ml細(xì)胞懸液可傳代一個方瓶培養(yǎng)，可用3

免疫組化技術(shù)專題：MTT（四唑鹽比色實驗）大匯總2014/05/07: 一、實驗前應(yīng)明確的問題1.選擇適當(dāng)?shù)募?xì)胞接種濃度。一般情況下，96孔培養(yǎng)板的一內(nèi)貼壁細(xì)胞長滿時約有105個細(xì)胞。但由于不同細(xì)胞貼壁后面積差異很大，因此，在進(jìn)行MTT試驗前，要進(jìn)行預(yù)實驗檢測其貼壁率、倍增時間以及不同接種細(xì)胞數(shù)條件下的生長曲線，確定試驗中每孔的接種細(xì)胞數(shù)和培養(yǎng)時間，以保證培養(yǎng)終止致細(xì)胞過滿。這樣，才能保證MTT結(jié)晶形成酌量與細(xì)胞數(shù)呈的線性關(guān)系。否則細(xì)胞數(shù)太多敏感性降低，太少觀察不到差異。2.藥物濃度的設(shè)定。一定要多看文獻(xiàn)，參考別人的結(jié)果再定個比較大的范圍先初篩。根據(jù)自己初篩的結(jié)果縮

免疫組化專題：酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）實驗2014/05/07: 標(biāo)簽：酶聯(lián)免疫吸附ELISA酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）可以：（1）免疫酶染色各種細(xì)胞內(nèi)成份的定位。（2）研究抗酶抗體的合成。（3）顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng)。（4）定量檢測體液中抗原或抗體成份。實驗方法雙抗體夾心法（測抗原）間接法（測抗體）競爭法測抗原實驗方法原理圖1.雙抗體夾心法測抗原示意圖本法首先也是用特異性抗體包被于固相載體，經(jīng)洗滌后加入含有抗原之待測樣品，如待檢樣品中有相應(yīng)抗原存在，即可與包被于固相載體上的特異性抗體結(jié)合，經(jīng)保溫孵育洗滌后，即可加入酶標(biāo)記特異性抗體，再經(jīng)孵育洗滌后，加底物顯色

免疫組化技術(shù)專題：免疫組化Elivison二步法2014/05/07: 1、石蠟切片置于67℃烘箱中，烘片2小時，脫蠟至水，用pH7.4的PBS沖洗三次，每次3分鐘（3×3’）。2、取一定量pH=6.0檸檬酸鹽緩沖液，加入微波盒中，微波加熱至沸騰，將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫塑料切片架上，放入已沸騰的緩沖液中，中檔微波處理10分鐘，取出微波盒流水自然泠卻，從緩沖液中取出玻片，先用蒸餾水沖洗兩次，之后用PBS沖洗2×3’。（注：不是所有的抗體都需要微波修復(fù)的，視具體情況而定）3、每張切片加1滴3%H2O2，室溫下孵育10分鐘，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性。PBS沖

細(xì)胞技術(shù)專題：原代胚胎成纖維細(xì)胞培養(yǎng)2014/04/17: 實驗器材手術(shù)小直剪刀三把、眼科直鑷子三把、眼科彎鑷子兩把、玻璃平皿三套、200目尼龍濾網(wǎng)、50ML、15ML離心管和手術(shù)刀片。以上物品均需要高壓滅菌消毒處理。實驗試劑無Ca2+和Mg2+的PBS、0.05%胰酶0.53mmol/LEDTA溶液、小鼠胚成纖維細(xì)胞（MEF）生長培養(yǎng)基：高糖DMEM加10%FCS。實驗動物孕期14至16天的孕鼠實驗步驟1.處死孕鼠，置于75%酒精里全身浸泡，然后在超凈臺中用一把剪刀和一把鑷子把孕鼠外皮剪開，用另外一把剪刀和一把鑷子把內(nèi)皮剪開，露出子宮，zui后用第三把

細(xì)胞技術(shù)專題：補體介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗2014/04/17: 1、實驗原理帶有特異抗原的靶細(xì)胞（如正常細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、病毒感染細(xì)胞）與相應(yīng)抗體結(jié)合后，在補體的參與下，引起靶細(xì)胞膜損傷，導(dǎo)致細(xì)胞膜的通透性增加、細(xì)胞死亡。染料（例如：伊紅-Y、臺盼藍(lán)）可通過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)使細(xì)胞著色，故可用于指示死細(xì)胞或瀕死細(xì)胞，而活細(xì)胞不著色。此即補體依賴性細(xì)胞毒試驗，利用細(xì)胞毒試驗可以檢查細(xì)胞膜抗原，亦可鑒定抗體的特異性。本實驗中，Thy-1抗原是小鼠胸腺T細(xì)胞特異的表面抗原，在體外利用抗小鼠Thy-1的單克隆抗體通過補體的協(xié)同作用，可殺傷95％以上的胸腺細(xì)胞。2、實驗材

細(xì)胞技術(shù)專題：細(xì)胞生長曲線實驗2014/04/17: 標(biāo)簽：細(xì)胞生長曲線細(xì)胞生長曲線是測定細(xì)胞生長數(shù)的常用方法，是判定細(xì)胞活力的重要指標(biāo)。一般細(xì)胞傳代之后，經(jīng)過短暫的懸浮然后貼壁，隨后度過長短不同的潛伏期，即進(jìn)入大量分裂的指數(shù)生長期。為了準(zhǔn)確描述整個過程中細(xì)胞數(shù)目的動態(tài)變化，典型的生長曲線可分為生長緩慢的潛伏期，斜率較大的指數(shù)生長期，呈平臺狀的平頂期及退化衰亡4個部分。實驗方法細(xì)胞生長曲線實驗方法原理細(xì)胞生長曲線是觀察細(xì)胞生長基本規(guī)律的重要方法。只有具備自身穩(wěn)定生長特性的細(xì)胞才適合在觀察細(xì)胞生長變化的實驗中應(yīng)用。因而在細(xì)胞系細(xì)胞和非建系細(xì)胞生長特性

細(xì)胞技術(shù)專題：小鼠腹腔巨噬細(xì)胞培養(yǎng)實驗2014/04/17: 標(biāo)簽：小鼠腹腔巨噬細(xì)胞培養(yǎng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞培可以：（1）吞噬與清除異物；（2）分泌生物活性物質(zhì)；（3）對仿生全降解材料，降解后的無機(jī)產(chǎn)物與生命過程中有機(jī)物的合成作用。實驗方法細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)實驗方法原理取小鼠腹腔巨噬細(xì)胞與乳膠顆粒在不同培養(yǎng)條件下混合后定量加入24孔板，37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中孵育后，熒光顯微鏡下計數(shù)吞噬百分率和吞噬指數(shù)。實驗材料小鼠試劑、試劑盒1640培養(yǎng)基小牛血清雙抗臺盼蘭儀器、耗材手術(shù)器械一次性注射器眼科鑷眼科剪96孔板CO2培養(yǎng)箱實驗步驟一、實驗步驟1.如果采用刺激物，則可

Abnova高通量蛋白表達(dá)系統(tǒng)2014/03/19: 亞諾法生技公司是*一家結(jié)合中國臺灣IT產(chǎn)業(yè)之生產(chǎn)管理、自動化及量化的精華及其概念，將人類重要基因有計劃性的快速大量生產(chǎn)，利用快速有效的抗體生產(chǎn)平臺，建立起zui大的蛋白質(zhì)及抗體銀行。亞諾法使用的體外小麥胚無細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)，此小麥胚屬于真核生物，故生產(chǎn)出來的蛋白較E.coli制成的蛋白更似天然人源蛋白的結(jié)構(gòu)和正確的折疊，加上*的全自動化的生產(chǎn)設(shè)備，亞諾法生產(chǎn)出的重組蛋白產(chǎn)品是率、高產(chǎn)量、*，目前已擁有超過22,000種重組蛋白，其中包括全長及部分序列人源重組蛋白，還有各類針對哺乳動物細(xì)胞和昆蟲細(xì)

Abnova無內(nèi)毒素生長因子-您干細(xì)胞研究的Z佳幫手2014/03/19: 內(nèi)毒素(Endotoxin)，也被稱為脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS），會干擾細(xì)胞之功能和生長等，特別是以干細(xì)胞zui易受影響。目前可接受的內(nèi)毒素濃度水平為小于1EU/μg(≈0.1ng/μg)(1)，這是目前大多數(shù)生長因子產(chǎn)品的上限。但是，在體外干細(xì)胞的研究顯示，0.005ng/ml的內(nèi)毒素可抑制中胚層的形成，并導(dǎo)致胚狀體(EmbryoidBodies,EBs)無法分化成為成骨細(xì)胞(2)。0.005ng/ml此一濃度就相當(dāng)于將5個濃度為10ng/ml的生長因子（每個含接

InvivoGen,為您提供更專業(yè)的天然免疫系統(tǒng)研究工具2014/03/19: InvivoGen致力于天然免疫系統(tǒng)相關(guān)產(chǎn)品的研發(fā)和生產(chǎn)。天然免疫系統(tǒng)在抵抗病毒感染方面發(fā)揮著重要作用，在天然免疫過程中識別特定的病原體相關(guān)的分子模式（pathogen-associatedmolecularpatterns，PAMPs）需要依賴于有限的一組模式識別受體（patternrecognitionreceptors，PRRs），這些PRRs能夠觸發(fā)炎癥反應(yīng)并能有效地將入侵病原體清除。PRRs包含有四大類：Toll樣受體（Toll-LikeReceptors，TLRs）；NOD樣受體（N

細(xì)胞技術(shù)專題：軟瓊脂克隆形成實驗2014/03/12: 原理：細(xì)胞接種存活率只表示接種細(xì)胞后貼壁的細(xì)胞數(shù)，但貼壁后的細(xì)胞不一定每個都能增殖和形成克隆。而形成克隆的細(xì)胞必為貼壁和有增殖活力的細(xì)胞。克隆形成率反映細(xì)胞群體依賴性和增殖能力兩個重要性狀。由于細(xì)胞生物學(xué)性狀不同，細(xì)胞克隆形成率差別也很大，一般初代培養(yǎng)細(xì)胞克隆形成率弱，傳代細(xì)胞系強；二倍體細(xì)胞克隆形成率弱，轉(zhuǎn)化細(xì)胞系強；正常細(xì)胞克隆形成率弱，腫瘤細(xì)胞強。并且克隆形成率與接種密度有一定關(guān)系，做克隆形成率測定時，接種細(xì)胞一定要分散成單細(xì)胞懸液，直接接種在碟皿中，持續(xù)一周，隨時檢查，到細(xì)胞形成克隆時終

細(xì)胞技術(shù)專題：細(xì)胞增殖檢測：3H同位素滲入法實例2014/03/12: 一、原理淋巴細(xì)胞在有絲分裂原PHA、ConA等的刺激下，產(chǎn)生增殖反應(yīng)，DNA和RNA合成明顯增加，如在培養(yǎng)液中加入3H－胸腺嘧啶核苷（3H-TdR），則可被轉(zhuǎn)化中的細(xì)胞攝入。測定標(biāo)記淋巴細(xì)胞的放射強度可反映淋巴細(xì)胞增殖的程度。二、儀器和材料RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)液、小牛血清、2-巰基乙醇（2-ME）、青霉素、鏈霉素、刀豆蛋白A（ConA）、Hank's液、PBS緩沖液（pH7.2-7.4）、3H-TdR、閃爍液[2，5-二苯基惡唑（PPO）0.5g、1，4-雙-（5-苯基惡唑基）-苯（POP

細(xì)胞技術(shù)專題：四唑鹽（MTT）比色實驗2014/03/12: 標(biāo)簽：四唑鹽MTT比色MTT法建立于20世紀(jì)80年代初，是一種通過測定細(xì)胞能量代謝水平用以間接反映細(xì)胞增殖情況的檢測方法。它基于兩個假設(shè)：1、只有活細(xì)胞能夠?qū)TT還原成為難溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶物，而死細(xì)胞不能達(dá)到；2、其吸光度與活細(xì)胞數(shù)量成直線正相關(guān)。實驗方法MTT法實驗方法原理活細(xì)胞的線粒體中的琥珀脫氫酶能使外源性的MTT還原為難溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶物并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜能溶解細(xì)胞中的紫色結(jié)晶物，用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞

細(xì)胞技術(shù)專題：細(xì)胞傳代實驗2014/03/03: 根據(jù)細(xì)胞生長的恃點，傳代方法有3種：懸浮生長細(xì)胞傳代、半懸浮生長細(xì)胞傳代（Hela細(xì)胞）、貼壁生長細(xì)胞傳代。實驗方法細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)消化法實驗方法原理培養(yǎng)細(xì)胞傳代根據(jù)不同細(xì)胞采取不同的方法。貼壁生長的細(xì)胞用消化法傳代；部分貼壁生長的細(xì)胞用直接吹打可傳代；懸浮生長的細(xì)胞可以采用直接吹打或離心分離后傳代，或用自然沉降法吸除上清后，再吹打傳代。實驗材料細(xì)胞試劑、試劑盒D-Hanks液小牛血清RPMI1640雙抗胰蛋白酶EDTANHClNaHCO3儀器、耗材凈化工作臺離心機(jī)恒溫水浴箱冰箱倒置相差顯微鏡培養(yǎng)箱

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