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細胞技術專題:光學顯微鏡檢測腫瘤細胞形態實驗

來源:上海北諾生物科技有限公司   2014年02月20日 12:58  

標簽: 光學顯微鏡 檢測 腫瘤 細胞形態

光學顯微鏡檢測腫瘤細胞形態可以:(1)輔助判斷腫瘤細胞是否凋亡;(2)用于病理檢查;(3)提取腫瘤細胞微細結構信息。

詳細

實驗方法

  • 瑞氏-吉姆薩混染法
  • HE染色法
實驗方法原理

吉姆薩染液由天青,伊紅組成。染色原理和結果與瑞特染色法基本相同。

 

1)嗜酸性顆粒為堿性蛋白質,與酸性染料伊紅結果,染粉紅色,稱為嗜酸性物質;

2)細胞核蛋白和淋巴細胞 胞漿為酸性,與堿性染料美藍或天青結合,染紫藍色,稱為嗜堿性物質;

3)中性顆粒呈等電狀態與伊紅和美藍均可結合,染淡紫色,稱為中性物質。

 

PH對細胞染色有影響。細胞各種成分均分布蛋白質,由于蛋白質系兩性電解質,所帶電荷隨溶液PH而定,在偏酸性環境中下在電荷增多,易與伊紅結合,染色偏紅;在偏堿性環境中負電荷增多,易與美藍或天青結合,染色 偏藍。因此細胞染色對氫離子濃度十分敏感,染色用玻片必須清潔,無酸堿污染。配制必須用甲醇,稀釋染色必須用緩沖液,沖洗用水應近中性,否則可導致各種細胞染色反應異常,以致識別困難,甚至造成錯誤。

 

用途:適合大多數細胞組織的染色,包括血涂片、各種組織石蠟切片、冰凍切片、以及各種培養細胞。染色體顯帶、多種微生物的鑒別染色和細胞凋亡的檢測等。

實驗材料

腫瘤細胞

試劑、試劑盒

甲醛 二甲苯 Gimsa染液 Sorensen磷酸緩沖液 香柏油 蒸餾水

儀器、耗材

光學顯微鏡 樹膠 載玻片 蓋玻片 洗瓶 離心機 離心管

實驗步驟

一、試劑配制

 

1.  瑞氏染液配制

 

稱瑞氏染料0.1 g于研缽,少量多次加入AR級甲醇至*溶解,后補充至60 ml棕色瓶密封保存,可加3 ml甘油防止揮發。

 

2.  吉姆薩染液配制

 

0.1 g吉姆薩染料放入有6.6 ml甘油的圓錐燒瓶內,56度,水浴90-120 min,當染料與甘油充分混合后加入6.6 ml甲醇,充分搖勻后過濾,棕色瓶室溫可保存一周。

 

二、染色

1.  收集細胞制成懸液后涂片、晾干。懸浮培養細胞離心收集。貼壁細胞可直接培養在載玻片上。組織取材需機械零散。


2.  固定:以甲醇固定10 min.
 

3.  液化精液2 000/ rmin 離心10 min,等滲鹽水洗3遍,涂片后自然干燥。

 

4.  臨用前,瑞、吉染液按10:1混合,染色30-60 s。

 

5.  加等量PBS(pH6.9),再染10 min。

 

6.  自來水沖洗,自然干燥后,即可鏡檢,也可直接香柏油兼做透明與封片。

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