瘤組織

Hanks液

平皿 培養(yǎng)瓶 恒溫箱

一、將取得的瘤組織去除脂肪、結(jié)締組織及壞死部分。

二、在平皿中用Hanks液洗3次，剪碎組織，切成1-2 mm³ 小塊。

三、接種于培養(yǎng)瓶（或皿）中，37℃、5%CO₂ 或加蓋并塞在普通恒溫箱中培養(yǎng)。

一、對腫瘤細(xì)胞系或細(xì)胞株的評價
 

已建成的各種腫瘤細(xì)胞系或細(xì)胞株，無疑都是可用的實驗對象。近年我國已建成的腫瘤細(xì)胞系已非常多，并獲得越來越廣泛的應(yīng)用。但根據(jù)研究者的經(jīng)驗，在使用這些細(xì)胞系時，應(yīng)持特別審慎態(tài)度，主要是應(yīng)考慮到這些細(xì)胞在長期傳代中有否發(fā)生遺傳性改變的可能。*，長期傳代細(xì)胞系染色體核型常是不穩(wěn)定的。另外也可能發(fā)生如基因突變、基因易位或缺失等變化。其結(jié)果可能導(dǎo)致細(xì)胞產(chǎn)生生物學(xué)性狀上的變動。
 

以近年建成的各種腫瘤細(xì)胞系為例，都已傳代少則幾十，多則百代以上后，才確認(rèn)建成了細(xì)胞系。這種情況下很難保證細(xì)胞從初代到建成時的性狀仍是一致的。已如前述，癌細(xì)胞在培養(yǎng)中并非能很順利地傳下去，凡已長期傳代的細(xì)胞系，都已獲得不死性。當(dāng)前尚未*確證所有癌細(xì)胞都具有不死性；因此尚難肯定在長期培養(yǎng)中的癌細(xì)胞的生物學(xué)性狀與體內(nèi)時仍*相同（包括不死性）。據(jù)上述對用癌細(xì)胞系所獲實驗結(jié)果應(yīng)盡量做分析性的結(jié)論，避免做概括性的與體內(nèi)等同的結(jié)論，外推與體內(nèi)等同更是不妥的。廣泛來說，應(yīng)用各種較長時間培養(yǎng)細(xì)胞做實驗時，都應(yīng)如此。

二、提高腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)存活率和生長率措施
 

根據(jù)人們的經(jīng)驗，腫瘤細(xì)胞在體外不易培養(yǎng)，建立能傳代的腫瘤細(xì)胞系更為困難。當(dāng)腫瘤組織或細(xì)胞初代接種培養(yǎng)后，常出現(xiàn)以下幾種情況：
 

1.  *無細(xì)胞游出或移動；
 

2.  有細(xì)胞移動和游出，但無細(xì)胞增殖，細(xì)胞長時間處于停滯狀態(tài)以致難以傳代；
 

3.  有細(xì)胞增殖，傳若干代后停止生長或衰退死亡；
 

4.  傳數(shù)代后細(xì)胞增殖緩慢，經(jīng)過一段停滯期后，才又呈旺盛生長狀態(tài)，形成穩(wěn)定生長的腫瘤傳代細(xì)胞系。
 

以上現(xiàn)象說明腫瘤細(xì)胞對體外生存條件有較高的要求，并需經(jīng)過對新環(huán)境的適應(yīng)才能生長，因此欲獲得好的培養(yǎng)效果，不能局限于一般培養(yǎng)法，必須采用一些特殊的措施。
 

1.  適宜底物
 

把經(jīng)過純化的細(xì)胞接種在不同的底物上，如鼠尾膠原底層、飼細(xì)胞層等。
 

2.  生長因子
 

應(yīng)用促細(xì)胞生長因子，向培養(yǎng)液中增加一種或幾種促細(xì)胞生長因子。根據(jù)細(xì)胞種類不同選用不同的促生長物，常用有胰島素、、雌激素以及其它生長因子。
 

為提高腫瘤細(xì)胞對體外培養(yǎng)環(huán)境的適應(yīng)力和增加有活力癌細(xì)胞（干細(xì)胞）的數(shù)量，可采用動物體轉(zhuǎn)嫁接種成瘤后，再從動物體內(nèi)取出進(jìn)行培養(yǎng)，能提高體外培養(yǎng)的成功率。受體動物以裸鼠。
 

3、動物體媒介培養(yǎng)方法
 

（1）瘤塊接種：取新鮮瘤組織，用 Hanks液洗凈血污，切成 1～3毫米小塊，用穿刺針頭吸一小瘤塊，用酒精棉球擦拭動物腹部后，直接刺入皮下，注入瘤塊。
 

（2）飼養(yǎng)觀察，待腫瘤生長達(dá)較大體積后，剝?nèi)〕隽鼋M織。
 

（3）進(jìn)行體外培養(yǎng)。
 

（4）為防止失敗，仍取部分瘤組織繼續(xù)在裸鼠體內(nèi)傳代。通過裸鼠媒介接種，有活力的腫瘤細(xì)胞數(shù)量增多，細(xì)胞培養(yǎng)易于成功。