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T淋巴細胞轉化實驗的基本原理2014/11/25

T淋巴細胞轉化實驗的基本原理T細胞在體外培養時,受到非特異性有絲分裂原（如PHA、ConA）刺激后,可出現細胞體積增大,代謝旺盛,蛋白和核酸合成增加,即向淋巴母細胞轉化.淋巴細胞轉化率的高低可以反映機體的細胞免疫水平,因此可作為測定機體免疫功能的指標之一.T細胞在體外培養時,受到非特異性有絲分裂原（如PHA、ConA）刺激后,可出現細胞體積增大,代謝旺盛,蛋白和核酸合成增加,即向淋巴母細胞轉化.淋巴細胞轉化率的高低可以反映機體的細胞免疫水平,因此可作為測定機體免疫功能的指標之一.淋巴細胞轉化試驗

細胞的復蘇及凍存方法2014/11/25

細胞的復蘇及凍存方法一.細胞復蘇與培養將液氮或-80℃保存的腫瘤細胞于37℃水浴，快速溶化，用8.0ml培養基混勻已融化的腫瘤細胞懸液，于1500轉/分，離心3分鐘。棄上清，再吸取8.0ml培養基質混勻細胞沉淀，再1500轉/分，離心3分鐘，棄上清，細胞沉淀用1.0ml培養基混勻，備用。另取一個75cm2方瓶，加入14.0ml培養基質，將上述制備的含腫瘤細胞懸液(1.0ml)加入此方瓶中，于37℃，5%CO2孵育箱中培養。若此腫瘤細胞懸浮生長，大約3－4天細胞基質會變黃，5.0ml細胞懸液可傳代

影響細胞生長的幾點因素2014/11/25

影響細胞生長的幾點因素，摘要：細胞在體外進行培養,失去了機體的調節和控制,因此,除滿足營養的要求外,還必須使細胞生存環境晝接近活體的環境.外環境的培養條件如溫度、滲透壓、酸堿度等均能影響細胞的生長.一、溫度：一般哺乳類及禽類細胞體外培養的適宜溫度是37~38℃.溫度過高或過低都會影響到細胞的生長.細胞耐受低溫的能力比抗熱的能力強,在低溫下,細胞的代謝活力及核分裂降低.溫度低于0℃時,雖影響細胞代謝,但并無傷害作用.把細胞置于23~25℃時,細胞仍能生存和生長,但速度減緩,不過,魚類細胞的適宜培養

細胞培養常見問題解答2014/11/25

1冷凍管應如何解凍?取出冷凍管后，須立即放入37°C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預防冷凍管之爆裂。2細胞冷凍管解凍培養時，是否應馬上去除DMSO?除少數特別注明對DMSO敏感之細胞外，絕大部分細胞株(包括懸浮性細胞)，在解凍之后，應直接放入含有10-15ml新鮮培養基之培養角瓶中，待隔天再置換新鮮培養基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附之問題。3可否使用與

果蠅數量性狀實驗2014/11/14

【實驗目的】1、以果蠅（Drosophilamelanogaster）腹片著生的小剛毛為對象，研究數量性狀遺傳的特點。2、學習估算遺傳（heritability）【實驗原理】在生物中凡是可數、可度、可衡等并可用數字形式描述的性狀，稱數量性狀（quantitativecharacter）。數量性狀大都由多基因控制。一般，控制同一性狀的基因數目很多，而每個基因的作用很小，并且很容易受環境影響。群體的表型變量通常呈連續分布。【實驗儀器、材料和試劑】本實驗采用18#和22#品系果蠅的雜交后代為材料，用恒

生物信息學技術：基因芯片實驗原理與方法2014/11/14

本實驗的目的是學會cDNA芯片的使用方法。了解各種基因芯片的基本原理和優缺點。基因芯片這一技術方法在1991年的Science雜志上被提出，其高通量、并行檢測的特點適應了分析人類基因組計劃所提供的海量的基因序列信息的需要，可以說，人類基因組計劃是基因芯片技術發展的原因，而對深人研究基因突變和基因表達的有效方法的需求又是促進基因芯片技術發展的動力。由于基因芯片高速度、高通量、集約化和低成本的特點，基誕生以來就受到科學界的廣泛關注，正如晶體管電路向集成電路發展的經歷一樣，分子生物學技術的集成化正在使

植物學技術：細胞傷口愈合實驗2014/11/06

原理：細胞傷口愈合實驗被研究者廣泛應用和改進，用來研究各種實驗條件比如基因敲除和化療在細胞遷移和增殖中的作用。該實驗操作簡單，費用廉價，實驗條件容易根據不同的目的改進。該方法的基本原理是，在單層培養細胞間制作劃痕以產生愈傷區域，然后監控該傷口周圍細胞的向劃痕遷移的現象，即傷口愈合。改變細胞遷移和/或生長的因素可以增加或降低傷口愈合率。該方法可以定量，適用于自動化系統高通量篩選。材料和儀器：1.人MDA-MB-231cell(ATCC#HTB-26)2.DMEM培養基(Invitrogen#103

植物學技術：植物原生質體的制備2014/11/06

原生質體是指植物細胞去掉細胞壁的裸露部分。它在培養條件下，①具有再生細胞壁，進行連續的細胞分裂并再生成完整植株的能力；②具有攝取外源大分子、細胞器，以及細菌，病毒的能力，因此是進行遺傳操作，基因轉移的好材料；③通過同種和異種植物的原生質體融合，可產生異核體，實現體細胞雜交，培育出新品種。實驗原理去掉植物細胞壁的方法可以是機械的人工操作，也可以利用酶解法。較早利用機械法制備原生質體的*Klercker（1892），直到1960年英國科學家Cocking才*次用酶法大量制備原生質體。本實驗以植物的葉

實驗動物技術：大鼠胰腺移植模型制作2014/10/21

胰腺移植是目前臨床上有效治療I型糖尿病，挽救II型糖尿病晚期伴腎功能不全的外科手段，因此，胰腺移植一直受到廣泛的關注，至今圍繞著胰腺移植，仍有許多問題需要解決，這些問題的基礎研究都需要在合適的動物模型上進行，其中大鼠因為其成本低，來源易，免疫系統與人類相似等優點，是目前器官移植領域流行的實驗動物之一。但是大鼠胰腺移植模型的建立是一個難度很大的實驗外科技術，操作復雜，成功率低。因此，需要建立一種比較規范，操作簡便，模型穩定且成功率高的胰腺移植模型的方法，以利于進行胰腺移植的基礎研究。一、手術器械顯

實驗動物技術:激光掃描共聚焦顯微鏡操作步驟及注意事項2014/10/21

激光掃描共聚焦顯微鏡可測定的樣品種類很多．包括生物材料、組織(切片)、細胞(亞細胞)結構等。樣品中熒光的來源主要有如下幾種：自發熒光(autofluorescence)、熒光染色、免疫熒光、熒光蛋白、誘發熒光(inducedfluorescence)及酶致熒光(enzymaticallyproducedfluorescence)等等。其中大部分熒光素的激發和發射波長均可在儀器自帶軟件的染料信息庫中找到。1．觀察步驟及儀器操作根據實驗要求制備樣品完畢后。即可進行觀察。基本步驟如下：(1)開啟儀器電

動物實驗技術：轉基因小鼠制備實驗2014/10/21

1、選取7~8周齡雌性小鼠，陰道口封閉，作為供體，下午3:00左右，每只小鼠腹腔注射PMSG（10IU）。2、47~48小時后，每只小鼠腹腔注射HCG（0.8IU），并與正常公鼠合籠；另取數只適齡母鼠（2月齡以上）作為受體，陰道口潮紅，與結扎公鼠合籠。3、第二天上午9:00前觀察供體、受體，有精栓者拿出備用。受體籠拿出作好隔離措施。4、10:30左右，斷頸處死供體，手術取出整個輸卵管，放入透明質酸酶~0.3mg/M2液中。顯微鏡下，用鑷子撕開輸卵管壺腹部，受精卵隨同顆粒細胞即一同流出。5、仔細觀

微生物學技術：噬菌體的檢查及效價測定2014/08/14

一、目的：1.了解噬菌體效價的含義及其測定原理。2.學會檢查噬菌體的方法。3.掌握用雙層瓊脂平板法測定噬菌體效價的操作技能。二、原理：噬菌體是一類專性寄生于細菌和放線菌等微生物的病毒，其個體形態極其微小，用常規微生物計數法無法測得其數量。當烈性噬菌體侵染細菌后會迅速引起敏感細菌裂解，釋放出大量子代噬菌體，然后它們再擴散和侵染周圍細胞，zui終使含有敏感菌的懸液由混濁逐漸變清，或在含有敏感細菌的平板上出現肉眼可見的空斑──噬菌斑。了解噬菌體的特性，快速檢查、分離，并進行效價測定，對在生產和科研工作

微生物學技術：紫外線滅菌實驗2014/08/14

標簽：紫外線滅菌紫外線滅菌是用紫外線燈進行的，波長為200~300nm的紫外線都有殺菌能力，其中以260nm的殺菌力zui強。在波長一定的條件下，紫外線的殺菌效率與強度和時間的乘積成正比。紫外線殺菌機制主要是因為它誘導了胸腺嘧啶二聚體的形成，從而抑制了DNA的復制。實驗方法紫外線滅菌實驗方法原理由于輻射能使空氣中的氧電離成［O］，再使O2氧化生成臭氧（O3）或使水（H2O）氧化生成過氧化氫（H2O2），O3和H2O2均有殺菌作用。紫外線穿透力不大，所以，只適用于無菌室、接種箱、手術室內的空氣及物

微生物學技術：用比濁法測定大腸桿菌的生長曲線2014/08/14

(一)實驗目的了解細菌生長曲線的持點及測定原理，學會用比濁法測定細菌的生長曲線。(二)實驗原理將一定數量的細菌，接種于適宜的液體培養基中，在適溫下培養，定時取樣測數，以菌數的對數為縱坐標，生長時間為橫坐標，作出的曲線稱為生長曲線。該曲線表明細菌在一定的環境條件下群體生長與繁殖的規律。一般分為延緩期、對數期、穩定期及衰亡期四個時期，各時期的長短同菌種本身特征、培養基成分和培養條件不同而異。比濁法是根據細菌懸液細胞數與混濁度成正比，與透光度成反比關系，利用光電比色計測定細胞懸液的光密度(即OD值)，

微生物學技術:PCR法檢測支原體2014/08/14

PCR法是20世紀80年代中期建立起來的一種體外DNA擴增技術，其基本原理是酶促DNA合成反應，即在DNA模板、引物和脫氧核糖核酸存在下，經DNA聚合酶的作用，使DNA鏈擴增延伸。該方法具有靈敏度高、特異性強、快速的特點，但其對實驗環境的要求嚴格，實驗成本較高，有時還有假陽性的現象出現。1、儀器設備超凈工作臺、PCR儀、電泳儀、凝膠成像分析系統、臺式離心機、旋渦混懸器等。2、實驗試劑選用美國Stratagene公司生產的支原體檢測試劑盒（內有引物、陽性對照、內對照、StrataCleanresi

微生物學技術：高壓蒸汽滅菌實驗2014/08/14

標簽：高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌是將待滅菌的物品放在一個密閉的加壓滅菌鍋內，通過加熱，使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產生蒸汽。待水蒸汽急劇地將鍋內的冷空氣從排氣閥中驅盡，然后關閉排氣閥，繼續加熱，此時由于蒸汽不能溢出，而增加了滅菌器內的壓力，從而使沸點增高，得到高于100℃的溫度。導致菌體蛋白質凝固變性而達到滅菌的目的。實驗方法高壓蒸汽滅菌實驗實驗方法原理在使用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌時，滅菌鍋內冷空氣的排除是否*極為重要，因為空氣的膨脹壓大于水蒸汽的膨脹壓，所以，當水蒸汽中含有空氣時，在同一壓力下，含空氣蒸

微生物學技術：微生物的接種、分離和培養2014/08/12

一、目的要求1、掌握各種分離、接種方法。2、掌握無菌操作基本環節。二、實驗說明微生物在自然界中呈混雜狀態存在，要獲得所需菌種，必需從中把它們分離出來。在保存菌種時不慎受到到污染也需予以分純。微生物分離和純化的方法很多，但基本原理卻是相似的，即將待分離的樣品進行一定的稀釋，并使微生物的細胞（或孢子）盡量以分散狀態存在，然后使其長成一個個純種單菌落。然而上述工作又離不開接種，即將一種微生物移到另一滅過菌的培養基上的過程。三、實驗材料1、恒溫培養箱。2、接種環、玻璃棒、吸管、酒精燈。3、培養基（上次實

微生物學技術：微生物鑒定中常用的生化反應2014/08/12

實驗原理有些細菌具有合成淀粉酶的能力，可以分泌胞外淀粉酶。淀粉酶可以使淀粉水解為麥芽糖和葡萄糖，淀粉水解后遇碘不再變藍色。細菌產生的脂肪酶能分解培養基中的脂肪生成甘油及脂肪酸。脂肪酸可以使培養基pH下降，可通過在油脂培養基中加入中性紅做指示劑進行測試。中性紅指示范圍為pH6.8（紅）～8.0（黃）。當細菌分解脂肪產生脂肪酸時，則菌落周圍培養基中出現紅色斑點。某些細菌分泌蛋白酶分解明膠，產生小分子物質。如果細菌具有分解明膠的能力，則培養基可由原來固體狀態變成液體狀態。牛乳中主要含有乳糖、酪蛋白等成

微生物學技術:微生物的分離純化及稀釋平板菌落計數2014/08/12

實驗原理稀釋平板測數是根據微生物在高度稀釋條件下固體培養基上所形成的單個菌落是由一個單細胞繁殖而成這一培養特征設計的計數方法，即一個菌落代表一個單細胞。計數時，首先將待測樣品制成均勻的繁殖稀釋液，盡量使樣品中的微生物細胞分散開，使其成單個細胞存在，否則一個菌落就不只是代表一個細胞，再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布于平板中的培養基內。經培養后，由單個細胞生長繁殖形成菌落，統計菌落數目，即可計算出樣品中的含菌數。此記數方法所計算的菌數是培養基上長出來的菌落數，故又稱活菌計數。

免疫學技術專題：非標記抗體免疫電鏡技術2014/06/18

一、原理標記抗體法雖然具有許多優點，但也存在一些難以克服的問題，如標記抗體的分子增大，對細胞膜和組織的穿透力減弱；化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響；結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合，影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的不利影響因素，通過一系統的非標記抗體的免疫學反應，對組織中的抗原進行定位檢測。不標記抗體法又可分為用標記物顯示和不同標記物顯示兩種方法。前者利用基因工程方法制備雙特異性抗體的F(ab′)2，一個Fab片段與標本中的抗原結合，一個Fab是抗體蛋白的結合片段。在抗