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簡單擴增體系中引物設計原則2017/04/14

引物在PCR反應中處于關鍵作用，引物決定著擴增的特異性和擴增的效率。而在目前DNA的化學合成技術非常成熟的情形下，引物設計是否合適是我們應更為關注的層面?，F在有很多的免費的軟件或網絡資源(http://frodo.wi.mit.edu/primer3/)能輔助我們進行引物設計，這使我們總能找到適合我們自己應用的引物設計工具。筆者用得較多的引物設計軟件有oligo6.0，Primerpremier5。需要說明的是經過細致推敲和計算的引物并不能保證擴增一定能夠成功或，但嚴密的設計并系統地考慮一些應該

如何在DNA序列中找到序列標簽位點2017/04/14

NCBI的“electronicPCR(e-PCR)”工具是UniSTS資源庫的一部分，可以用來尋找一段目的dna片段中的STS標記物。UniSTS(http://www.ncbi.nih.gov/genome/sts/)能提供所有有關STS標記物的資料，包括引物序列、產物大小、作圖信息和別名。與之相鏈接的其他NCBI資源如Entrez、LocusLink和MapViewer也同樣提供這些信息。e-PCR通過搜尋具有正確的方向和間距的序列且這個序列能代表用于擴增STSs的PCR引物，來尋找一段D

幾種轉染方法對比2017/04/10

轉染方法原理主要應用特點廠家及產品DEAE－葡聚糖法帶正電的DEAE-葡聚糖與核酸帶負電的磷酸骨架相互作用形成的復合物被細胞內吞瞬時轉染相對簡便、重復比磷酸鈣好,但對細胞有一定的毒副作用,轉染時需除血清且一般只用于BSC-1,CV-1,COS細胞系sigma-aldrich(DEAE-DextranTransfectionKit)磷酸鈣法磷酸鈣DNA復合物吸附細胞膜被細胞內吞穩定轉染,染瞬轉染不適用于原代細胞（所需的DNA濃度較高）,操作簡便但重復性差,有些細胞不適用細胞建議用CSCL梯度離心，

血涂片的制備和細胞大小的測量2017/03/27

目的要求1.掌握血涂片的制備方法；2.認識紅細胞及各種白細胞的典型形態；3.掌握顯微測微尺的使用方法。實驗原理涂片技術是制備血液樣品zui常用的技術。將血液樣品制成單層細胞的涂片標本，染色后可對血液中各種細胞形態進行形態觀察、細胞計數、細胞大小測量等工作。實驗用品1.器材:醫用一次性采血針、酒精棉球、鑷子、經脫脂洗凈的載玻片、雙凹片（推片）。2.試劑:Wright’s染液：Wright’s色素粉末0.1g，溶于60ml甲醇。方法與步驟一.血涂片的制備與血細胞的觀察二.顯微測微尺的使用采血前用70

植物多倍體鑒定技術2017/03/20

多倍體廣泛分布于植物界，如普通小麥是異源六倍體，棉花是四倍體，栽培草莓是八倍體等，多倍體產生途徑除自然發生外，化學藥劑誘導是很有效的途徑。不管以何種方式產生，檢測、鑒定多倍體就顯得很重要和迫切。鑒定多倍體，可采用間接和直接的方法。間接方法包括形態學和細胞學的觀察，直接法是直接對試材檢測染色體的數目。一般來講，多倍體植物在形態學和細胞學上的特征表現為:氣孔、花器、花粉粒、種子、果實甚至葉片等明顯變大，單位面積葉片上的氣孔數目減少而密度降低等。考慮到染色體觀察、記數較為煩瑣，首先對試材從形態學和細胞

細胞熒光化學實驗2017/03/08

熒光法較一般光學方法具有靈敏度高、特異性強、方法簡便等優點，因此近年來熒光組織化學特別是免疫熒光技術有了很大的發展。利用熒光技術可研究細胞內化學成分的分布與定位，研究細胞與組織中物質的吸收與轉運，進行病理鑒別以及細胞免疫等方面的研究。當用一種波長的光(如紫外光)照射某種物質時，這種物質會在極短的時問內發射出較照射波長為長的光(可見的光)，這種光就稱為熒光。有些生物材料受到紫外線照射后能直接發出熒光稱自發熒光(或直接熒光)；有的生物材料受紫外線照射后并不發光，但當它吸收熒光染料后，也同樣產生熒光，

細胞凍存、解凍方法以及細胞計數2017/02/22

一、細胞冷凍保存1、材料：生長良好之培養細胞、新鮮培養基、DMSO（SigmaD-2650）、無菌塑料冷凍保存管（Nalgene5000-0020）、0.4％（w/v）trypanblue（GibcoBRL15250-061）、血球計數盤與蓋玻片、等速降溫機（KRYO10SeriesII）。2、冷凍保存方法：（1）傳統方法：冷存管置于4℃10分鐘→-20℃30分鐘→-80℃16～18小時（或隔夜）→液氮槽vaporphase長期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量亡，亦可跳

細胞培養的方法介紹2017/02/20

1、復蘇細胞1）液氮中取出所要的細胞，37℃水浴鍋中快搖，勿讓水入蓋，同時將培養液放入37℃水浴鍋中溫育；2）將細胞離心，同時進入超凈臺，無菌操作，將培養液瓶用衛生紙擦干，除菌后放入超凈臺，將蓋子打開，瓶子放在架子上，瓶口朝火焰，將吹打吸管滅菌后吸部分培養液進入培養皿；3）離心完畢，將細胞凍存液傾倒掉，吸入約1ml培養液到凍存管中，反復吹打，懸起細胞，吸入皿中，吹打，標好；4)顯微鏡下觀察，呈圓形，不結塊，不聚在一起，濃度適宜并且均勻，放入培養箱中培養。2、傳代：1）倒掉培養液，加含5%胰酶的培

植物細胞骨架的觀察2017/02/16

細胞骨架(cytoskeleton)，是細胞內以蛋白質纖維為主要成分的網絡結構，根據蛋白質纖維的直徑、組成成分和組裝結構的不同可分為微絲、微管和中等纖維。細胞骨架對于維持細胞的形態結構及細胞運動、物質運輸、能量轉換、信號傳導和細胞分裂等有重要的作用。本試驗采用去垢劑TritonX-100的緩沖液處理植物材料時，可將細胞的膜結構和大部分蛋白質抽提掉，但細胞骨架系統的蛋白卻被保存下來，后者用考馬斯亮藍R250染色，在光學顯微鏡下可見一種網狀結構。三、實驗用品(一)材料洋蔥（二）器材顯微鏡、載玻片、滴

玉米減數分裂觀察2017/02/13

減數分裂(meiosis)是生物在形成性細胞過程中的一種特殊的細胞分裂方式。在此過程中，二倍體(2n)的性母細胞，連續進行2次細胞分裂，而染色體僅分裂1次。結果，在1個性母細胞所形成的4個子細胞中，染色體數目減少-半。也就是說每個子細胞中只具有單倍的染色體(n)。減數分裂在遺傳上具有重要的意義。性母細胞(2n)經過減數分裂，形成染色體數目減半的配子(n)。經受精作用，雌、雄配子融合為合子，染色體數目恢復為2n。這樣，在物種延續的過程中，確保了染色體數目的恒定，從而使物種在遺傳上具有相對的穩定性。

細胞生理活動的實驗觀察2017/02/06

【實驗目的】通過制片與觀察加深理解細胞的運動、吞噬等生理活動。【實驗用品】一、材料和標本雄性蟾蜍、小白鼠、l％雞血懸液、6％淀粉肉湯、草履蟲。二、器材和儀器光鏡、2ml注射器、載玻片、蓋玻片、解剖器材、滴管、移液管、試管、玻璃片、黑紙。三、試劑0.3％臺盼蘭、1％剛果紅?！緦嶒瀮热荨恳弧⒓毎耐淌苫顒?一)原理白細胞是機體防御系統中能游走的單位。它分為粒細胞系、單核細胞系、淋巴系三類。它們有許多生理功能，如游走性、變形運動、趨化性、吞噬異物等。在白細胞中，以粒細胞、單核細胞的吞噬活動較強，故稱此

動物細胞培養及外源基因的導入實驗2016/12/05

細胞培養是現代生物學研究中應用的技術之一。它的突出優點，一是研究對象是活的細胞，可長時期地監控、檢測甚至定量評估其形態、結構和生命活動等；二是可以人為地嚴格控制研究條件，便于研究各種物理、化學、生物等外界因素對細胞生長、發育和分化等的影響，有利于單因子分析；三是研究的樣本可以達到比較均一性。常用的細胞系均是性質均一的細胞，需要時還可采用克隆化等方法使細胞進一步純化；四是研究的內容便于觀察、檢測和記錄。體外培養的細胞可采用顯微鏡，電鏡等直接觀察記錄，充分滿足實驗的要求。另外還具有研究范圍比較廣泛，

細胞和細胞內含物的觀察2016/11/21

細胞質內含有多種細胞器。有些細胞器如線粒體、高爾基體、內質網、溶酶體等普遍存在于各種細胞中，而另有些細胞器如葉綠體，只存在于植物細胞中。細胞質內的這些結構，除葉綠體外，一般在光學顯微鏡下不易看見，必須經過一定的固定染色方法處理后，才能看到大多數細胞器，或直接用相差顯微鏡觀察。線粒體線粒體是一種動態的易變結構。經過處理在光學顯微鏡下呈現為顆粒狀、棒狀或彎曲細線。線粒體的形態和數量隨不同生物、不同組織及不同生理狀態而發生變化，例如肝細胞、胰細胞的線粒體通常呈線狀，成熟的卵細胞內線粒體呈顆粒狀，腎細胞

染色體銀染色法2016/11/03

一、實驗目的通過實驗，掌握染色體銀染方法。二、實驗原理銀染核仁成形區的方法，zui早是Goodpasture和Bloom(1975)提出的Ag-As技術。應用這種技術使人類、哺乳動物、兩棲類、植物等的核仁形成區(NOR)特異性染為黑色。這種銀染色陽性的NOR稱為Ag-NOR。銀染方法的原理可能是由于轉錄的rDNA部分有豐富的酸性蛋白，它們具有S－H鍵和S－S鍵，容易將Ag+還原為Ag的顆粒，從而在活性的核仁形成區鍍上銀，呈現為黑色的區域。本實驗將介紹染色體核仁形成區的銀染顯示法（Ag-NOR），

孚爾根[Feulgen]核反應染色法2016/10/27

一、實驗目的學習和掌握孚爾根反應染色法，鑒定植物細胞核內染色體上DNA的存在。二、實驗原理DNA是主要的遺傳物質，集中于染色體上。1924年孚爾根首先用席夫試劑(Schiff)作試驗，鑒定了染色體上DNA的存在，故稱為孚爾根染色法。孚爾根染色法的反應原理主要與席夫試劑的化學性質有關，此試劑的基本成分是堿性品紅，偏亞硫酸氫鈉(NaHSO3)和鹽酸.堿性品紅的主要成分是三氨基三苯甲烷氯化物。堿性品紅原為桃紅色，當與亞硫酸作用時還原，使醌型變為苯型，由桃紅色變為無色透明的N-亞磺酸亞硫酸副品紅堿，當它

細胞培養環境2016/10/18

1實驗室設計細胞培養是一種無菌操作技術,要求工作環境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響.細胞培養室和設計原則是防止微生物污染和有害因素影響,要求工作環境清潔,空氣清新,干燥和無煙塵.細胞培養室的設計原則一般是無菌操作區設在室內較少走動的內側,常規操作和封閉培養于一室,而洗刷消毒在另一室.2常用設施及設備(1)超凈工作臺:也稱凈化工作臺,分為側流式,直流式和外流式三大類.(2)無菌操作間:一般由更衣間,緩沖間和操作間三部分組成.操作間放置凈化工作臺及二氧化碳培養箱,離心機,倒置顯微

神經膠質細胞培養2016/10/12

神經細胞（神經元）不易培養，只有在適宜情況下，如接種在膠原底層上，或加入神經生長因子和膠質細胞因子時，可出現一定程度的分化，長出突起等現象，但很難使之增值。而神經膠質細胞是神經組織中比較容易培養的成分。人、鼠等腦組織即可用于神經膠質細胞培養，不僅能獲得生長的膠質細胞，也可形成能傳代的二倍體細胞系。一般說來，膠質細胞在培養中生長不穩定，不易自發轉化，但對外界因素仍保持很好的敏感性，可用ROUS病毒和SV4等誘發轉化。養方法如下：1、從手術室無菌取腦髓灰質或白質后，仔細剝除腦膜、血管和纖維成分，置h

巨噬細胞原代培養2016/09/26

1．實驗前三天，向每只小鼠腹腔內注入無菌硫羥乙酸肉湯1ml（勿注入腸內）。2．引頸殺死動物，手提鼠尾將全鼠浸入70％酒精中3～5秒。3．置動物于解剖臺上，用針頭固定四肢，雙手持鑷撕開皮膚拉向兩側，暴露出腹膜，但勿傷及腹膜壁。4．再用70％酒精擦洗腹膜壁后，用注射器吸10mlEagle液注入腹腔中，同時從兩側用手指揉壓腹膜壁，令液體在腹腔內充分流動。5．用針頭輕輕挑起腹壁，使動物體微傾向一側，使腹腔中液體集于針頭下吸取入針管內。6．小心拔出針頭，把液體注入離心管中，250g4℃離心10分鐘，去上清

定位候選克隆2016/09/13

當前，人類基因組研究的重心正在由“結構”向“功能”轉移，一個以基因組功能研究為主要內容的所謂“后基因組時代”(post-genomics)，也即功能基因組(functionalgenomics)時代，即將到來。如何獲取基因的功能信息，即與人類重大疾病和重要生理功能相關的基因信息，就擺在了我們面前。定位候選克隆策略(positionalcandidatecloning)是傳統定位克隆(positionalcloning)的改進和發展，并以其在克隆疾病相關基因中的有效性而日益受到重視。人類基因組計劃

cDNA合成的隨機引物法2016/08/30

cDNA合成時，合成*鏈目前主要有三種方法。而且每一種方法之間存在著差異性，這些相對的特異性使得所得到的cDNA的數量和種類有所不同。這篇文章為大家介紹隨機引物法的優劣勢和特性。隨機引物法是三種方法中特異性zui低的。引物在整個轉錄本的多個位點退火，產生短的，部分長度的cDNA。這種方法經常用于獲取5"末端序列及從帶有二級結構區域或帶有逆轉錄酶不能復制的終止位點的RNA模板獲得cDNA。為了獲得zui長的cDNA，需要按經驗確定每個RNA樣品中引物與RNA的比例。隨機引物的起始濃度范圍為50到2