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用氯化鈣制備新鮮的大腸桿菌感受態細胞方法2017/07/04

下面的簡單方案是Clhen等（1972）所用方法的變通方案，常用于成批制備感受態細菌，這些細菌可使每微克螺旋質粒ＤＮＡ產生5x106-2x107個轉化菌落，這樣的轉化效率足以滿足所有在質粒中進行的常規克隆的需要。該方法*適用于大多數大腸桿菌菌株，并且比方案Ｉ快速，重復性更好。該法制備的感受態細胞可貯存于-70℃，但保存時間過長會使轉化效率在一定程度上受到影響。１）從于37℃培養16-20小時的新鮮平板中挑取一個單菌落（直徑２－３mm），轉到一個含有100mlLB或SOB培養基的1L燒瓶中。于37

RNAi及其在植物遺傳改良中的應用2017/06/29

RNAi即RNA干涉(或RNA干擾)是指雙鏈RNA導入細胞后并被切割成21～23個核苷酸長度的短核苷酸雙鏈，在其它作用因子的參與下能夠特異地與其同源的mRNA結合并導致其降解，從而使得內源基因不能表達，導致內源基因的沉默。自1998年Fire等在線蟲中發現并闡明以來，RNAi已經在其它動物、植物和真菌中被證實。研究表明參與該過程的許多基因具有高度的保守性，這可能是生物調控基因表達及抵御病毒侵染或轉座子誘導DNA突變的一種共有的古老生理機制。RNAi所具有的特異性、穩定性、、快速以及不改變基因組的

RNAi技術專有名詞詳解2017/06/26

1.RNAi：（RNAinterference）RNA干擾一些小的雙鏈RNA可以、特異的阻斷體內特定基因表達，促使mRNA降解，誘使細胞表現出特定基因缺失的表型，稱為RNA干擾（RNAinterference，RNAi，也譯作RNA干預或者干涉）。它也是體內抵御外在感染的一種重要保護機制。2.sirna：(smallinterferingRNAs)小干擾RNA一種短片斷雙鏈RNA分子，能夠以同源互補序列的mRNA為靶目標降解特定的mRNA，這個過程就是RNA干擾途徑（RNAinterferenc

質粒提取2017/06/22

一、導論已經提出過許多方法用于從細菌中提純質粒dna，這些方法都含有以下3個步驟：（一）細菌培養物的生長從瓊脂平板上挑取一個單菌落，接種到培養物中(有含有行當抗生素的液體培養基中生長)，然后從中純化質粒，質粒的提純幾乎總是如此。現在使用的許多質粒載體（如pUC系列）都能復制到很高的拷貝數，惟致只要將培養物放在標準LB培養基中生長到對數晚期，就可以大量提純質粒。此時，不必造反性地擴增質粒DNA。然而，較長一代的載體(如pBR322)由于不能如此自由地復制，所以需要在得到部分生長的細菌培養物中加入氯

士鋒siRNA設計指南2017/06/12

UsingsiRNAforgenesilencingisarapidlyevolvingtoolinmolecularbiology.ThereareseveralmethodsforpreparingsiRNA,suchaschemicalsynthesis,invitrotranscription,siRNAexpressionvectors,ａndPCRexpressioncassettes.Irrespectiveofwhichmethodoneuses,thefirststepinde

用PCR擴增cDNA庫中的特異序列2017/06/07

zui常用的基因分離方法需要建立組織或細胞RNA的cDNA庫，然后用抗體或DNA探針篩選出感興趣的基因。雖然這個方法已成功地克隆了大量基因，但建立和篩選CDNA庫是一項非常耗時．費力的工作，而且用寡聚核苷酸作探針進行篩選需大量蛋白質序列結構的資料。聚合酶鏈的反應（PCR）方法可使一種特異DNA擴增幾百萬倍，并已成為分子克隆和診斷的十分有用的工具。zui近，TAQDNA聚合酶的使用極大地簡化了PCR方法。該酶在75℃左右有很寬的zui適溫度區，在小于95℃以下重復保溫仍能存活，更重要的是，該酶活性

ELISA試劑盒2017/06/04

試劑盒組成及試劑配制1、酶標板：一塊（96孔）2、標準品（凍干品）：2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為8,000pg/ml，將其稀釋為1,600pg/ml后，再做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成1,600pg/ml，800pg/ml，400pg/ml，200pg/ml，100pg/ml，50pg/ml，25pg/ml，樣品稀釋液直接作為空白孔0pg/ml。如配制800pg/ml標準

ELISA試劑盒說明書2017/06/04

ELISA試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中豬纖維蛋白原（Fbg）水平。用純化的豬纖維蛋白原（Fbg）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入纖維蛋白原（Fbg），再與HRP標記的纖維蛋白原（Fbg）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的纖維蛋白原（Fbg）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中豬纖維蛋白原（Fbg）

試劑盒制備方法2017/06/01

elisa試劑盒制備方法ELISA試劑盒不是容易的事情。主要的限制是你所用抗體的質量。另外你需要配制出特定成分的稀釋液，保證結果的真實可靠以及良好的重復性。這兩方面過關了，生產工藝并不復雜，你只要有生產抗體的平臺，再加上酶標儀基本就可以搞定了。ELISA試劑盒包括以下步驟：1)抗原表位的計算機篩選；2)抗原的制備；3)血清的采集；4)間接ELISA方法的建立；5)間接ELISA方法的敏感性和特異性驗證；6)試劑盒的穩定性驗證；ELISA試劑盒對屠宰場進行臨床檢測。該方法簡單、快速、靈敏度高、特異

士鋒DNA雙鏈缺口修復的新發現2017/05/31

DNA雙鏈出現缺口被認為是發生癌癥的一個重要原因。zui近，美國密蘇里州斯托瓦斯醫學研究所的研究人員在研究DNA雙鏈缺口修復中又有了新發現，他們提出盡管有機體內存在天然的檢測和修復缺口的機制，但是與DNA損傷修復有關的因子必須首先繞過組蛋白。組蛋白既能保護DNA不受傷害但同時也阻礙了DNA的修復。這或促進科學家早日找到癌癥治療的新策略。這些發現公布在2004年12月17日的《科學》雜志上。研究DNA修復也是探索生命的一個重要方面，而且與軍事醫學、腫瘤學等密切相關。對不同的DNA損傷，細胞可以有不

cdc25和chk1與細胞凋亡2017/05/24

cdc25和chk1在DNA破壞中的作用Cdc25isaproteinphosphataseresponsiblefordephosphorylatingａndactivatingcdc2,acrucialstepinregulatingtheentryofalleukaryoticCellsintotheM-phaseofthecellcycle.Cdc25isphosphorylatedthroughoutinterphasebutnotinmitosis.Theprimarysitefor

PI3K/Akt通路的負性調節因子-PTEN2017/05/22

10號染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源物((Phosphataseａndtensinhomologdeletedonchromosometen,PTEN)為1997年新發現的抑癌基因，位于10q23.3，其轉錄產物是一種膜結合型脂質磷酸酶，作為腫瘤抑制因子在多種系統中下調PIP3的表達，在胚胎發育、細胞生長、分化、凋亡和遷移的調控中發揮重要的作用。PTEN具有PI3K活性，能拮抗PI3K的作用，通過催化PIP3的3位脫磷酸下調PIP3的水平。

植物細胞色素P450（CYP450）2017/05/12

實驗原理：本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中植物細胞色素P450（CYP450）水平。用純化的植物細胞色素P450（CYP450）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入細胞色素P450（CYP450），再與HRP標記的細胞色素P450（CYP450）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的細胞色素P450（CYP450）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下

聯會復合體的染色與觀察2017/05/09

實驗目的1.學習光學顯微鏡下顯示聯會復合體的實驗技術2.觀察光鏡下聯會復合體的形態結構實驗原理聯會復合體是減數分裂前期同源染色體配對形成的非*性核內特殊結構，典型的聯會復合體由三股平行的線狀結構組成，即兩條平行側線和一條纖細的中央軸組成。一般開始于偶線期，成熟于粗線期，消失于雙線期。它與減數分裂三個重要環節同源染色體聯會、交換以及分離有著密切關系。大量工作表明，聯會復合體在真核生物的減數分裂過程中是普遍存在的。實驗用品一、材料雄性小白鼠二、器材離心機、顯微鏡、水浴、培養皿、鑷子、剪刀、吸管、燒杯

核糖核酸酶P主要功能2017/05/06

核糖核酸酶P是一種核糖核酸酶。核糖核酸酶P也是一種核酶，即由一個RNA分子發揮催化活性，它是*個被發現的蛋白質以外具有催化活性的生物大分子。它的功能是剪切tRNA分子中RNA上多余的或前體的多余序列。[1]它的發現者悉尼·奧爾特曼在1970年代在研究前體tRNA中發現它可以剪切RNA的5'端，悉尼·奧爾特曼也因此獲得了1989年度的諾貝爾化學獎。[2]近期的研究發現核糖核酸酶P也具有一些新的功能，[3]例如人類細胞核中的核糖核酸酶P對于正常并有效地轉錄多種非編碼rna(包括tRNA、5SrRNA

動物細胞培養技術介紹2017/05/06

動物細胞培養已成為生物制藥領域zui重要的關鍵技術之一，并以其研究的深入和進展推動生物技術產業的迅速發展。專家預言：蛋白治療藥物如糖蛋白、抗體和多肽藥物僅僅只是剛剛開始進入市場，預計在下一個10年或20年會有更為快速的發展。屆時，蛋白治療藥物的迅速增長和市場需求將遠遠超過*的生產能力。動物細胞培養規模化生產重組蛋白和抗體的工藝選擇可考慮使用當前較成熟的工業化支持技術平臺，以縮短產品工藝研發的時間，加快工業化進程。當前已獲FDA批準的生物技術產品以及公開發表的生產工藝中，占有主流優勢的是攪拌式生物

細胞融合（Cell fusion）實驗2017/05/06

實驗原理誘導細胞融合的主要方法有：病毒誘導融合，化學融合劑誘導融合和電融合。1.病毒誘導融合：有許多種類的病毒能介導細胞融合，zui常用的是滅活的仙臺病毒（HVJ），為RNA病毒。病毒誘導細胞融合的過程有：首先是細胞表面吸附許多病毒粒子，接著細胞發生凝集，幾分鐘至幾十分鐘后，病毒粒子從細胞表面消失，而就在這個部位鄰接的細胞的細胞膜融合，胞漿相互交流，zui后形成融合細胞。2.化學融合劑誘導融合：化學融合劑主要有脂肪酸衍生物、脂質體、鈣離子、水溶性高分子化合物、水溶性蛋白質和多肽，其中zui常用的

細胞培養室管理規定2017/05/06

1、細胞培養室操方法。2．實驗人員進入該實驗室進行實驗工作時，必須更換、穿戴好工作服、鞋、帽、口罩。有關細胞培養的操作均在超凈臺上進行，嚴格按無菌程序操作。3．實驗人員在進行實驗前必須熟悉實驗內容、操作步驟及各類儀器的性能和操作方法，嚴格執行操作規程，并做好必要的安全防護。4．嚴禁將與實驗無關的易燃、易爆及其他有毒有害物品帶入實驗室；在本實驗室內不得進行微生物等其它易污染物的培養。5．細胞培養室中的昂貴設備，未經許可，不得擅自開關。精密儀器必須經過專門培訓方能上機操作，并嚴格遵守操作規程。6．實

染色體G-帶的分帶技術2017/04/24

實驗原理關于G-帶形成的機理，到目前為止還沒有*定論，但有人提出了以蛋白質構象改變為基礎的顯帶機理。此機理認為，帶紋所反映的是蛋白質結構的差異，這種差異與DNA的功能活動相適應。G-帶的形成與Giemsa染料的組成及染色特性分不開。Giemsa染料是由亞甲藍(美藍)、天藍和曙紅組成的復合染料，除曙紅外，均為噻臻類染料，它只與DNA中的PO43-基結合而不與蛋白質結合，所以染色體著色首先是兩個噻臻分子與DNA的結合，在此基礎上結合一個曙紅分子;形成2:1噻臻-曙紅沉淀物。其次要有一個有助于染料沉淀

管式離心機工作原理2017/04/14

管式離心機物料由底部進液口射入高速旋轉的轉鼓，全鋼制結構，雙層鋼板防護,轉鼓上部是撓性主軸調整旋轉后形成強大的離心力場，使料液沿轉鼓內壁向上流動，管式離心機的實際生產能力視分離介質和分離效果而定。樣品在與空氣高速旋轉摩擦產生的溫度上升的幅度是很小的,離心力場的作用下密度較大的固體微粒逐漸沉積在轉鼓內壁形成沉渣層。電動機通過傳送帶：比重大的液相形成外環，高速管式離心機流動到轉鼓上部從各自的排液口排出，微量固體沉積在轉鼓壁上，速度模式可選RPM或者g（RCF）。介質腐蝕性強等物料的提取、濃縮、澄清較