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用氯化鈣制備新鮮的大腸桿菌感受態(tài)細胞方法2017/07/04

下面的簡單方案是Clhen等（1972）所用方法的變通方案，常用于成批制備感受態(tài)細菌，這些細菌可使每微克螺旋質(zhì)粒ＤＮＡ產(chǎn)生5x106-2x107個轉(zhuǎn)化菌落，這樣的轉(zhuǎn)化效率足以滿足所有在質(zhì)粒中進行的常規(guī)克隆的需要。該方法*適用于大多數(shù)大腸桿菌菌株，并且比方案Ｉ快速，重復性更好。該法制備的感受態(tài)細胞可貯存于-70℃，但保存時間過長會使轉(zhuǎn)化效率在一定程度上受到影響。１）從于37℃培養(yǎng)16-20小時的新鮮平板中挑取一個單菌落（直徑２－３mm），轉(zhuǎn)到一個含有100mlLB或SOB培養(yǎng)基的1L燒瓶中。于37

RNAi及其在植物遺傳改良中的應用2017/06/29

RNAi即RNA干涉(或RNA干擾)是指雙鏈RNA導入細胞后并被切割成21～23個核苷酸長度的短核苷酸雙鏈，在其它作用因子的參與下能夠特異地與其同源的mRNA結(jié)合并導致其降解，從而使得內(nèi)源基因不能表達，導致內(nèi)源基因的沉默。自1998年Fire等在線蟲中發(fā)現(xiàn)并闡明以來，RNAi已經(jīng)在其它動物、植物和真菌中被證實。研究表明參與該過程的許多基因具有高度的保守性，這可能是生物調(diào)控基因表達及抵御病毒侵染或轉(zhuǎn)座子誘導DNA突變的一種共有的古老生理機制。RNAi所具有的特異性、穩(wěn)定性、、快速以及不改變基因組的

RNAi技術(shù)專有名詞詳解2017/06/26

1.RNAi：（RNAinterference）RNA干擾一些小的雙鏈RNA可以、特異的阻斷體內(nèi)特定基因表達，促使mRNA降解，誘使細胞表現(xiàn)出特定基因缺失的表型，稱為RNA干擾（RNAinterference，RNAi，也譯作RNA干預或者干涉）。它也是體內(nèi)抵御外在感染的一種重要保護機制。2.sirna：(smallinterferingRNAs)小干擾RNA一種短片斷雙鏈RNA分子，能夠以同源互補序列的mRNA為靶目標降解特定的mRNA，這個過程就是RNA干擾途徑（RNAinterferenc

質(zhì)粒提取2017/06/22

一、導論已經(jīng)提出過許多方法用于從細菌中提純質(zhì)粒dna，這些方法都含有以下3個步驟：（一）細菌培養(yǎng)物的生長從瓊脂平板上挑取一個單菌落，接種到培養(yǎng)物中(有含有行當抗生素的液體培養(yǎng)基中生長)，然后從中純化質(zhì)粒，質(zhì)粒的提純幾乎總是如此。現(xiàn)在使用的許多質(zhì)粒載體（如pUC系列）都能復制到很高的拷貝數(shù)，惟致只要將培養(yǎng)物放在標準LB培養(yǎng)基中生長到對數(shù)晚期，就可以大量提純質(zhì)粒。此時，不必造反性地擴增質(zhì)粒DNA。然而，較長一代的載體(如pBR322)由于不能如此自由地復制，所以需要在得到部分生長的細菌培養(yǎng)物中加入氯

士鋒siRNA設計指南2017/06/12

UsingsiRNAforgenesilencingisarapidlyevolvingtoolinmolecularbiology.ThereareseveralmethodsforpreparingsiRNA,suchaschemicalsynthesis,invitrotranscription,siRNAexpressionvectors,ａndPCRexpressioncassettes.Irrespectiveofwhichmethodoneuses,thefirststepinde

用PCR擴增cDNA庫中的特異序列2017/06/07

zui常用的基因分離方法需要建立組織或細胞RNA的cDNA庫，然后用抗體或DNA探針篩選出感興趣的基因。雖然這個方法已成功地克隆了大量基因，但建立和篩選CDNA庫是一項非常耗時．費力的工作，而且用寡聚核苷酸作探針進行篩選需大量蛋白質(zhì)序列結(jié)構(gòu)的資料。聚合酶鏈的反應（PCR）方法可使一種特異DNA擴增幾百萬倍，并已成為分子克隆和診斷的十分有用的工具。zui近，TAQDNA聚合酶的使用極大地簡化了PCR方法。該酶在75℃左右有很寬的zui適溫度區(qū)，在小于95℃以下重復保溫仍能存活，更重要的是，該酶活性

ELISA試劑盒2017/06/04

試劑盒組成及試劑配制1、酶標板：一塊（96孔）2、標準品（凍干品）：2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為8,000pg/ml，將其稀釋為1,600pg/ml后，再做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成1,600pg/ml，800pg/ml，400pg/ml，200pg/ml，100pg/ml，50pg/ml，25pg/ml，樣品稀釋液直接作為空白孔0pg/ml。如配制800pg/ml標準

ELISA試劑盒說明書2017/06/04

ELISA試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中豬纖維蛋白原（Fbg）水平。用純化的豬纖維蛋白原（Fbg）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入纖維蛋白原（Fbg），再與HRP標記的纖維蛋白原（Fbg）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的纖維蛋白原（Fbg）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中豬纖維蛋白原（Fbg）

試劑盒制備方法2017/06/01

elisa試劑盒制備方法ELISA試劑盒不是容易的事情。主要的限制是你所用抗體的質(zhì)量。另外你需要配制出特定成分的稀釋液，保證結(jié)果的真實可靠以及良好的重復性。這兩方面過關了，生產(chǎn)工藝并不復雜，你只要有生產(chǎn)抗體的平臺，再加上酶標儀基本就可以搞定了。ELISA試劑盒包括以下步驟：1)抗原表位的計算機篩選；2)抗原的制備；3)血清的采集；4)間接ELISA方法的建立；5)間接ELISA方法的敏感性和特異性驗證；6)試劑盒的穩(wěn)定性驗證；ELISA試劑盒對屠宰場進行臨床檢測。該方法簡單、快速、靈敏度高、特異

士鋒DNA雙鏈缺口修復的新發(fā)現(xiàn)2017/05/31

DNA雙鏈出現(xiàn)缺口被認為是發(fā)生癌癥的一個重要原因。zui近，美國密蘇里州斯托瓦斯醫(yī)學研究所的研究人員在研究DNA雙鏈缺口修復中又有了新發(fā)現(xiàn)，他們提出盡管有機體內(nèi)存在天然的檢測和修復缺口的機制，但是與DNA損傷修復有關的因子必須首先繞過組蛋白。組蛋白既能保護DNA不受傷害但同時也阻礙了DNA的修復。這或促進科學家早日找到癌癥治療的新策略。這些發(fā)現(xiàn)公布在2004年12月17日的《科學》雜志上。研究DNA修復也是探索生命的一個重要方面，而且與軍事醫(yī)學、腫瘤學等密切相關。對不同的DNA損傷，細胞可以有不

cdc25和chk1與細胞凋亡2017/05/24

cdc25和chk1在DNA破壞中的作用Cdc25isaproteinphosphataseresponsiblefordephosphorylatingａndactivatingcdc2,acrucialstepinregulatingtheentryofalleukaryoticCellsintotheM-phaseofthecellcycle.Cdc25isphosphorylatedthroughoutinterphasebutnotinmitosis.Theprimarysitefor

PI3K/Akt通路的負性調(diào)節(jié)因子-PTEN2017/05/22

10號染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源物((Phosphataseａndtensinhomologdeletedonchromosometen,PTEN)為1997年新發(fā)現(xiàn)的抑癌基因，位于10q23.3，其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物是一種膜結(jié)合型脂質(zhì)磷酸酶，作為腫瘤抑制因子在多種系統(tǒng)中下調(diào)PIP3的表達，在胚胎發(fā)育、細胞生長、分化、凋亡和遷移的調(diào)控中發(fā)揮重要的作用。PTEN具有PI3K活性，能拮抗PI3K的作用，通過催化PIP3的3位脫磷酸下調(diào)PIP3的水平。

植物細胞色素P450（CYP450）2017/05/12

實驗原理：本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中植物細胞色素P450（CYP450）水平。用純化的植物細胞色素P450（CYP450）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入細胞色素P450（CYP450），再與HRP標記的細胞色素P450（CYP450）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的細胞色素P450（CYP450）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下

聯(lián)會復合體的染色與觀察2017/05/09

實驗目的1.學習光學顯微鏡下顯示聯(lián)會復合體的實驗技術(shù)2.觀察光鏡下聯(lián)會復合體的形態(tài)結(jié)構(gòu)實驗原理聯(lián)會復合體是減數(shù)分裂前期同源染色體配對形成的非*性核內(nèi)特殊結(jié)構(gòu)，典型的聯(lián)會復合體由三股平行的線狀結(jié)構(gòu)組成，即兩條平行側(cè)線和一條纖細的中央軸組成。一般開始于偶線期，成熟于粗線期，消失于雙線期。它與減數(shù)分裂三個重要環(huán)節(jié)同源染色體聯(lián)會、交換以及分離有著密切關系。大量工作表明，聯(lián)會復合體在真核生物的減數(shù)分裂過程中是普遍存在的。實驗用品一、材料雄性小白鼠二、器材離心機、顯微鏡、水浴、培養(yǎng)皿、鑷子、剪刀、吸管、燒杯

核糖核酸酶P主要功能2017/05/06

核糖核酸酶P是一種核糖核酸酶。核糖核酸酶P也是一種核酶，即由一個RNA分子發(fā)揮催化活性，它是*個被發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)以外具有催化活性的生物大分子。它的功能是剪切tRNA分子中RNA上多余的或前體的多余序列。[1]它的發(fā)現(xiàn)者悉尼·奧爾特曼在1970年代在研究前體tRNA中發(fā)現(xiàn)它可以剪切RNA的5'端，悉尼·奧爾特曼也因此獲得了1989年度的諾貝爾化學獎。[2]近期的研究發(fā)現(xiàn)核糖核酸酶P也具有一些新的功能，[3]例如人類細胞核中的核糖核酸酶P對于正常并有效地轉(zhuǎn)錄多種非編碼rna(包括tRNA、5SrRNA

動物細胞培養(yǎng)技術(shù)介紹2017/05/06

動物細胞培養(yǎng)已成為生物制藥領域zui重要的關鍵技術(shù)之一，并以其研究的深入和進展推動生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)的迅速發(fā)展。專家預言：蛋白治療藥物如糖蛋白、抗體和多肽藥物僅僅只是剛剛開始進入市場，預計在下一個10年或20年會有更為快速的發(fā)展。屆時，蛋白治療藥物的迅速增長和市場需求將遠遠超過*的生產(chǎn)能力。動物細胞培養(yǎng)規(guī)模化生產(chǎn)重組蛋白和抗體的工藝選擇可考慮使用當前較成熟的工業(yè)化支持技術(shù)平臺，以縮短產(chǎn)品工藝研發(fā)的時間，加快工業(yè)化進程。當前已獲FDA批準的生物技術(shù)產(chǎn)品以及公開發(fā)表的生產(chǎn)工藝中，占有主流優(yōu)勢的是攪拌式生物

細胞融合（Cell fusion）實驗2017/05/06

實驗原理誘導細胞融合的主要方法有：病毒誘導融合，化學融合劑誘導融合和電融合。1.病毒誘導融合：有許多種類的病毒能介導細胞融合，zui常用的是滅活的仙臺病毒（HVJ），為RNA病毒。病毒誘導細胞融合的過程有：首先是細胞表面吸附許多病毒粒子，接著細胞發(fā)生凝集，幾分鐘至幾十分鐘后，病毒粒子從細胞表面消失，而就在這個部位鄰接的細胞的細胞膜融合，胞漿相互交流，zui后形成融合細胞。2.化學融合劑誘導融合：化學融合劑主要有脂肪酸衍生物、脂質(zhì)體、鈣離子、水溶性高分子化合物、水溶性蛋白質(zhì)和多肽，其中zui常用的

細胞培養(yǎng)室管理規(guī)定2017/05/06

1、細胞培養(yǎng)室操方法。2．實驗人員進入該實驗室進行實驗工作時，必須更換、穿戴好工作服、鞋、帽、口罩。有關細胞培養(yǎng)的操作均在超凈臺上進行，嚴格按無菌程序操作。3．實驗人員在進行實驗前必須熟悉實驗內(nèi)容、操作步驟及各類儀器的性能和操作方法，嚴格執(zhí)行操作規(guī)程，并做好必要的安全防護。4．嚴禁將與實驗無關的易燃、易爆及其他有毒有害物品帶入實驗室；在本實驗室內(nèi)不得進行微生物等其它易污染物的培養(yǎng)。5．細胞培養(yǎng)室中的昂貴設備，未經(jīng)許可，不得擅自開關。精密儀器必須經(jīng)過專門培訓方能上機操作，并嚴格遵守操作規(guī)程。6．實

染色體G-帶的分帶技術(shù)2017/04/24

實驗原理關于G-帶形成的機理，到目前為止還沒有*定論，但有人提出了以蛋白質(zhì)構(gòu)象改變?yōu)榛A的顯帶機理。此機理認為，帶紋所反映的是蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的差異，這種差異與DNA的功能活動相適應。G-帶的形成與Giemsa染料的組成及染色特性分不開。Giemsa染料是由亞甲藍(美藍)、天藍和曙紅組成的復合染料，除曙紅外，均為噻臻類染料，它只與DNA中的PO43-基結(jié)合而不與蛋白質(zhì)結(jié)合，所以染色體著色首先是兩個噻臻分子與DNA的結(jié)合，在此基礎上結(jié)合一個曙紅分子;形成2:1噻臻-曙紅沉淀物。其次要有一個有助于染料沉淀

管式離心機工作原理2017/04/14

管式離心機物料由底部進液口射入高速旋轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)鼓，全鋼制結(jié)構(gòu)，雙層鋼板防護,轉(zhuǎn)鼓上部是撓性主軸調(diào)整旋轉(zhuǎn)后形成強大的離心力場，使料液沿轉(zhuǎn)鼓內(nèi)壁向上流動，管式離心機的實際生產(chǎn)能力視分離介質(zhì)和分離效果而定。樣品在與空氣高速旋轉(zhuǎn)摩擦產(chǎn)生的溫度上升的幅度是很小的,離心力場的作用下密度較大的固體微粒逐漸沉積在轉(zhuǎn)鼓內(nèi)壁形成沉渣層。電動機通過傳送帶：比重大的液相形成外環(huán)，高速管式離心機流動到轉(zhuǎn)鼓上部從各自的排液口排出，微量固體沉積在轉(zhuǎn)鼓壁上，速度模式可選RPM或者g（RCF）。介質(zhì)腐蝕性強等物料的提取、濃縮、澄清較