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植物細胞骨架的觀察

來源:上海士鋒生物科技有限公司   2017年02月16日 07:49  

細胞骨架(cytoskeleton),是細胞內以蛋白質纖維為主要成分的網絡結構,根據蛋白質纖維的直徑、組成成分和組裝結構的不同可分為微絲、微管和中等纖維。細胞骨架對于維持細胞的形態結構及細胞運動、物質運輸、能量轉換、信號傳導和細胞分裂等有重要的作用。本試驗采用去垢劑TritonX-100 的緩沖液處理植物材料時,可將細胞的膜結構和大部分蛋白質抽提掉,但細胞骨架系統的蛋白卻被保存下來,后者用考馬斯亮藍R250 染色,在光學顯微鏡下可見一種網狀結構。 

三、實驗用品 
(一)材料 洋蔥 
(二)器材 顯微鏡、載玻片、滴管、擦鏡紙、PH 計 
(三)試劑 
1. 0.01mol/L 磷酸鹽緩沖生理鹽水(PBS) 
0.2mol/L Na2HPO4- NaH2PO4緩沖液(PB,PH7.3) 50ml 
0.15mol/L NaCl 
雙蒸餾水加至1000ml 
2. PB 
0.2mol/L Na2HPO4 77ml 
0.2mol/L NaH2PO4 23ml 
3. M-緩沖液 
咪唑(PH 6.7) 50mmol/L 
KCl 50mmol/L 
MgC12 0.5mmol/L 
EGTA 1mmol/L 
EDTA 0.1mmol/L 
巰基乙醇 1mmol/L 
甘油 4mmol/L 
用1mol/L HCl 調pH 至7.2。 
4. 1%的Triton X-100/M-緩沖液 
5. 0.2%考馬斯亮藍R250 染液 
甲醇 46.5ml 
冰醋酸 7ml 
蒸餾水 46.5ml 
6. 3%戊二醛- PB 溶液(PH7.3) 

四、實驗操作見圖4-4

五、實驗建議
1. 用去垢劑TritonX-100 的緩沖液處理材料時,應控制在30min 左右。
2. 每一次加液或染色后,應用PBS 洗2 次,并用濾紙吸干

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