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士鋒生物溶血空斑試驗技術2013/11/19

一﹑原理溶血空斑試驗是體外檢測單個抗體形成細胞（b淋巴細胞）的一種方法，即將經綿羊紅細胞（SRBC）免疫過的家兔淋巴結或小鼠脾臟制成細胞懸液，與一定量的SRBC結合，于37℃作用下，免疫活性淋巴細胞能釋放出溶血素，在補體的參與下，使抗體形成細胞周圍的SRBC溶解，從而在每一個抗體形成細胞周圍，形成肉眼可見的溶血空斑。每個空斑表示一個抗體形成細胞，空斑大小表示抗體生成細胞產生抗體的多少。由于溶血空斑試驗具有特異性高，篩選力強，可直接觀察等優點，故可用做判定免疫功能的指標，觀察免疫應答的動力學變化，

士鋒生物牛副結核ELISA實驗材料和步驟2013/11/15

（一）材料與試劑1．副結核分枝桿菌親和層析抗原2．草分枝桿菌吸收抗原3．兔抗牛IgG酶標抗體4．牛副結核病參考陽性血清5．牛副結核病參考陰性血清1～5項均由單位供應。6．器材elisa板,酶聯免疫吸附檢測儀、加樣器、洗瓶、恒溫箱等。7．試劑及溶液配制同第五節豬瘟ELISA。（二）操作方法1．抗原包被以抗原稀釋液將副結核親和層析抗原稀釋至50µg/ml,每孔包被0.1ml。部分對照孔以牛血清白蛋白（50µg/ml）包被。2．血清處理取待檢血清、參考陽性血清、參考陰性血清各0.10ml，加生理鹽水0

士鋒生物如何確定引物（含修飾）的分子量2013/11/14

引物（含修飾）的分子量是如何確定的?非修飾的引物的molecularWeight在隨引物提供的報告單上都有明確的標示。如果需要估計一個引物的分子量按每個堿基的平均分子量為324.5，引物的分子量=堿基數x堿基的平均分子量。或按下列公式計算MW=（NA*WA）+（NC*WC）+（NG*WG）+（NT*WT）+（Nmod*Wmod）+（Nx*）+（Ni*Wi）+16*Ns–62.NA,NG,NC,NT,Ni分別為引物中堿基A或G或C或T或I的數量，WA,WC,WG,W,Wi分別為引物中堿基A或G或C

士鋒生物骨、牙組織模板DNA提取實驗方法優化2013/11/12

1主要配制試劑1）0.5MNa2EDTAPH8.02）ProeinaseK（20μg/ul）3）6MGuSCN10mlGuSCN7.2g加D·W至10ml水浴60℃～65℃溶解4）二氧化硅懸浮液（Silicasusponsion、用前混勻）Silica12g加D、W至100l↓充分混勻置于100ml量筒內室溫沉降24小時↓取上層溶液85ml加D、W至100ml，置于100ml量筒內充分混勻室沉降5小時↓取上層溶液85ml加12μl10MHCL、充分混勻分裝、高壓滅菌（121℃20min）備用。5

士鋒生物酶切體系中不可忽視的13個實驗要素2013/11/11

一、建立一個標準的酶切反應目前大多數研究者遵循一條規則，即10個單位的內切酶可以切割1μg不同來源和純度的DNA。通常，一個50μl的反應體系中，1μl的酶在1XNEBuffer終濃度及相應溫度條件下反應1小時即可降解1μg已純化好的DNA。如果加入更多的酶，則可相應縮短反應時間;如果減少酶的用量，對許多酶來說，相應延長反應時間（不超過16小時）也可*反應。二、選擇正確的酶不言而喻，選擇的酶在底物DNA上必須至少有一個相應的識別位點。識別堿基數目少的酶比堿基數目多的酶更頻繁地切割底物。假設一個G

士鋒生物蛋白質的等電點測定和沉淀反應實驗步驟和注意事項2013/11/08

士鋒生物蛋白質等電點的測定1、目的：了解蛋白質的兩性解離性質;學習測定蛋白質等電點的一種方法。2、原理：蛋白質是兩性電解質，蛋白質分子的解離狀態和解離程度受溶液酸堿度影響。當溶液的PH達到一定的數值時，蛋白質顆粒上正負電荷的數目相等，在電場中，蛋白質既不向陰極移動也不向陽極移動，此時溶液的PH值稱為此種蛋白的等電點。不同的蛋白質的等電點各不相同。在等電點時，蛋白質的理化性質都有變化，可利用此種性質的變化測定各種蛋白質的等電點。3、材料與試劑0.4%酪蛋白醋酸鈉溶液200ml（取0.8g酪蛋白，加

士鋒生物魚類條件反射的建立2013/11/04

魚類條件反射的建立【原理】魚類是低等脊椎動物，腦是建立條件反射的中樞。無關刺激的燈光與非條件刺激的食物先后作用于魚，并重復結合多次后，腦中相應的兩個興奮灶建立起暫時性，無關刺激的燈光成為食物的信號——條件刺激，當此條件出現時，魚類表現出相應的條件反射活動。【器材】金魚或金鯽魚，魚類條件實驗反應箱（70×40×50cm），紅色和綠色燈泡各一（40w或25w）、滑車杠桿，秒表，絲線，食餌。【步驟】⒈魚類條件反射實驗箱，在距側壁25cm處，設一橫隔板（板上有直徑6——7cm圓洞），把此箱分為左右兩部分

士鋒生物神經系統染色技術介紹2013/10/31

神經病理學是組織病理學的一個重要組成部分，神經病理學技術是一門較特殊的病理技術。神經組織的結構和功能較為復雜的特殊，用常規方法處理，常得不到想要的東西，因此，要想獲取想要的東西，必須靠特殊的處理方法，才能將其充分地顯示出來。神經系統方面可顯示的物質較多，如尼氏小體、髓鞘、變性髓鞘、神經纖維和神經膠質細胞等等。這些都要靠特殊的銀浸染技術，才能顯示出來。下面將介紹幾種顯示上述物質的方法。應用：神經系統染色應用于神經系統方面的各種疾病，如創傷、中毒、感染等引起神經系統方面的疾病，應作正常髓鞘和變性髓鞘

士鋒生物質粒DNA的限制性內切酶酶切分析2013/10/30

相關基礎知識限制性核酸內切酶：是一類能識別雙鏈DNA分子特異性核酸序列的DNA水解酶。它是基因工程中用于體外剪切基因片段的重要工具酶。上世紀七十年代，當人們在對噬菌體的宿主特異性的限制-修飾現象進行研究時，發現了限制性內切酶。*被發現的限制性內切酶包括來源于大腸桿菌的EcoRI和EcoRII，以及來源于流感嗜血桿菌（Heamophilusinfluenzae）的HindII和HindIII。這些酶可在特定位點切開DNA，產生可體外連接的基因片段。研究者很快發現內切酶是研究基因組成、功能及表達非常

如何選擇合適的細胞培養基和血清2013/10/28

細胞培養是實驗室里zui常見和zui基本的實驗了，但卻不是zui簡單的。別小看細胞培養，這里可蘊含著大學問。有時候細胞狀態不好，轉染、藥篩這些實驗根本就沒辦法做。影響細胞培養的因素很多，讓我們先從培養基和血清說起。經典的培養基有很多種，Invitrogen（GIBCO）、thermofisher（HyClone）、Sigma等公司都可以提供。其中DMEM、RPMI1640、MEM、DMEM/F12都是應用zui廣泛的培養基。其他如M199、IMDM、L15培養基等也用于某些細胞的培養。◆MEM是

士鋒生物干細胞實驗技術入門講解2013/10/25

1.了解細胞來自加拿大多倫多大學的PeterZandstra實驗室的一項研究項目就是：通過從單層細胞懸浮液中收集人類胚胎干細胞hESCs，提高hESC分化的一致性和產量。人類胚胎干細胞hESCs和人類誘導多功能干細胞hiPSCs的分化需要細胞聚集，但是細胞團中的細胞常常大小和形狀不一，從而導致不同步分化。為了能解決一致性的問題，Zandstra實驗室的博士后MarkUngrin嘗試利用一些公開的實驗指導手冊獲取單細胞懸浮液聚集體，剛開始的時候，他能得到穩定的聚集細胞，但是之后這些細胞就紛紛死了，

如何對動物培養的細胞進行凍存與細胞復蘇2013/10/24

細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術將細胞置于一196~C液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞，可以防止因正在培養的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用。除此之外，還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞。細胞凍存時向培養基中加入保護劑--終濃度5%.15%的甘油或二甲基亞砜（DMSO），可使溶液冰點降低，加之在緩慢凍結條件下，細胞內水分透出，減少了冰晶形成

士鋒生物M199培養基使用方法和步驟2013/10/23

一.【組成成分】無機鹽：氯化鈉、氯化鈣、氯化鉀、無水磷酸二氫鈉、六水合氯化鎂等。氨基酸：L-鹽酸精氨酸、L-鹽酸賴氨酸、L-谷氨酰胺、L-酪氨酸、L-脯氨酸、L-絲氨酸等。維生素：維生素B1、維生素B2、維生素b12、維生素C、D-生物素、鹽酸吡哆醛等。其它：無水葡萄糖、丙酮酸鈉、次黃嘌呤、亞油酸、硫辛酸、苯酚紅等。二.【產品指標】性狀粉紅色固體粉末澄清度澄清①加NaHCO36.90～7.50pH值②不加NaHCO35.60～6.20干燥減量的質量分數（%）≤5.0滲透壓①加NaHCO3295～

士鋒生物alpha-MEM培養基和MEM培養基的成分介紹2013/10/21

MEM培養基常常用于培養哺乳動物貼壁細胞的培養，增加或者減少MEM培養基中的某些成分即可用于其它類型的細胞培養。alpha-MEM培養基中的成分也比MEM要多很多，常被用來培養比較難培養的細胞。一、alpha-mem的成分列表如下:COMPONENTSmolecularWeightConcentration（mg/L）Molarity（mM）1、AminoAcidsGlycine75500.667L-Alanine89250.281L-Arginine2111050.498L-Asparagin

士鋒生物2-D電泳的關鍵步驟和溶液配制2013/10/18

雙向電泳技術應用過程中的關鍵步驟a.樣品制備（蛋白提取）（1）細胞培養、處理和收集;（2）將細胞在IEF裂解緩沖液中溶解;（3）將樣品離心以去除不溶的細胞碎片和DNA，提取上清，-80℃保存。b.蛋白質定量和上樣（1）固相PH梯度干膠條（Immobi-linePHGradient，IPG）水化、等電聚焦;（2）IPG的平衡;（3）SDS-PAGE;（4）蛋白質檢測：考馬斯亮蘭染色或銀染色。c.圖像分析及數據處理將染色后的凝膠放在GS-710光密度掃描儀上，掃描后的圖像用PDQUEST2D軟件分析

士鋒生物DMEM培養基配制步驟2013/10/18

DMEM是現今細胞培養中比較常見的培養基之一，dmem培養基是建立在MEM培養基的基礎上研究出來的，它與MEM培養基相比較，DMEM培養基中加大了MEM培養基中各種成分的用量，以下配制DMEM的方法。1.Measrueout5%lessdistilledwaterthandesiredtotalvolumeofmediumusingamixingcontainerthatisasclosetothefinalvolumeaspossible.2.Addpowderedmediumto15to30

如何對轉染細胞不表達進行補救2013/10/17

問：zui近做細胞轉染，預篩選穩定克隆，載體為pEgfp-N1，pIERS現在是平行做幾個基因，轉然后，只有空載體和一個基因可以看到綠色熒光，其余均沒有，這會是什么原因呢?怎么補救啊?答：需要考慮的問題有：1.你的細胞和轉染的方法，是不是你的細胞本身就很難轉染，有些細胞用脂質體轉染率很低的。在求助時告知細胞和具體的轉染方法和試劑。2.質粒的純度和質量：看你使用那種試劑盒提取的，我們的經驗是使用Qiagen比國產的一些試劑盒差別很大。3.pEGFP-N1可用來表達融合蛋白，如果你插入的目的基因帶終

士鋒生物DNA的連接策略2013/10/13

4.1.1DNA的連接策略質粒具有穩定可靠和操作簡便的優點。如果要克隆較小的dna段（且結構簡單，質粒要比其它任何載體都要好。在質粒載體上進行克隆，從原理上說是很簡單的，先用限制性內切酶切割質粒DNA和目的DNA段，然后體外使兩者相連接，再用所得到重組質粒轉化細菌，即可完成。外源DNA段和質粒載體的連接反應策略有以下幾種：（1）互補性粘性末端的連接單一限制性內切酶或兩種限制性內切酶（為同尾酶，如BamHI和BglII）分別處理載體和外源DNA，得到的粘性末端為互補性突出末端，在連接反應中外源片段

上海士鋒生物大腸桿菌感受態的制備過程2013/10/11

（1）接種單菌落于2mlLB培養液中，37℃過。（2）取0.25ml過菌入25mlLB培養液中，37℃振搖4～6h至A590=0.4～0.6。（3）倒入50ml管內，水浴10min，以2500～3000rpm離心5min，棄上清。（4）緩慢加入75mmol/L預冷CaCl25ml懸浮菌體，冰浴20min，同上離心棄上清。（5）緩慢加入75mmol/L預冷CaCl21.0ml輕輕混勻后分裝在1.5mleppendorf管中，每管200μl，冰浴1～2h。2.重組DNA的轉化（1）將3只Eppend

士鋒生物毛細管電泳的基本原理2013/10/09

毛細管電泳（highperformancecapillaryelectrophoresis，HPCE）是近年來發展起來的一種分離、分析技術，它是凝膠電泳技術的發展，是液相色譜分析的補充。該技術可分析的成分小至有機離子、大至生物大分子如蛋白質、核酸等。可用于分析多種體液樣本如血清或血漿、尿、腦脊液及唾液等，HPLC分析、快速、微量。電泳遷移不同分子所帶電荷性質、多少不同，形狀、大小各異。一定電解質及PH的緩沖液或其它溶液內，受電場作用，樣本中各組分按一定速度遷移，從而形成電泳。電泳遷移速度（v）可