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士鋒生物蛋白質(zhì)的等電點測定和沉淀反應2013/09/29

一、蛋白質(zhì)等電點的測定1、目的：了解蛋白質(zhì)的兩性解離性質(zhì);學習測定蛋白質(zhì)等電點的一種方法。2、原理：蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì)，蛋白質(zhì)分子的解離狀態(tài)和解離程度受溶液酸堿度影響。當溶液的PH達到一定的數(shù)值時，蛋白質(zhì)顆粒上正負電荷的數(shù)目相等，在電場中，蛋白質(zhì)既不向陰極移動也不向陽極移動，此時溶液的PH值稱為此種蛋白的等電點。不同的蛋白質(zhì)的等電點各不相同。在等電點時，蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)都有變化，可利用此種性質(zhì)的變化測定各種蛋白質(zhì)的等電點。3、材料與試劑0.4%酪蛋白醋酸鈉溶液200ml（取0.8g酪蛋白，加少量

士鋒生物氨基酸的離子交換柱色譜分離2013/09/27

本實驗采用磺酸型陽子交換樹脂（732型）分離酸性氨基酸（天冬氨酸AsppI=2.97）和鹼性氨基酸（賴氨酸LyspI=9.74）的混合液。在pH5.3條件下，因為低于Lys的pI值，Lys可解離成陽離子掛在樹脂上；高于Asp的pI值，則Asp可解離為陰離子，不能被樹脂吸附而直接流出色譜柱，在pH12條件下，因高于Lys的pI值，Lys又解離為陰離子從樹脂上被交換下來，這樣通過改變洗脫液的pH值可使它們被分別洗脫而達到分離的目的。【操作】1、樹脂的處理關于市售新樹脂的處理見注1，關于樹脂浮洗的方法

實驗室中寡核苷酸探針的類型、優(yōu)點2013/09/26

常用的寡核苷酸探針有3種：①特定序列的單一寡核苷酸探針；②較短的簡并性較高的成套寡核苷酸探針；③較長而簡并性較低的成套寡核苷酸探針。多用32P標記寡核苷酸探針，如：1）通過T4噬菌體多核苷酸激酶催化的磷酸化反應標記合成的寡核苷酸探針，在合成寡核苷酸時期5’端缺少一個磷酸基，因而易用T4噬菌體多核苷酸激酶進行磷酸化反應，而將α-32P從[γ-32P]ATP轉移至其5’端。這種磷酸化反應zui多能使每一寡核苷酸分子中摻入一個32P原子。2）用大腸桿菌dna聚合酶iKlenow片段標記合成的寡核苷酸探

士鋒生物酒精發(fā)酵技術2013/09/25

二、原理玉米粉中可供發(fā)酵的物質(zhì)主要是淀粉，而釀酒酵母由于缺乏相應的酶，所以不能直接利用淀粉進行酒精發(fā)酵，因此必須對原料進行預處理，通常包括蒸煮（液化）、糖化等處理。蒸煮可使淀粉糊化，并破壞細胞，形成均一的醪液，目前多數(shù)廠家開始利用α-淀粉酶的液化作用來替代蒸煮過程，這樣可大大減少能源消耗。液化后的醪液能更好地接受糖化酶的作用，并轉化為可發(fā)酵性糖，以便酵母進行酒精發(fā)酵。本實驗要求依據(jù)前次實驗測出的結果，按照α-淀粉酶反應條件的要求對玉米粉原料進行前處理。α-淀粉酶，又稱為1,4-α-D-葡聚糖葡萄

士鋒生物植物組織培養(yǎng)（plant Tissue Culture）介紹2013/09/23

植物組織培養(yǎng)（plantTissueCulture）是應用無菌培養(yǎng)的方法培養(yǎng)植物的一個離體部分，也即是一種將自然環(huán)境中分離出來的植物細胞或組織放入含有合成培養(yǎng)基的瓶中，在無菌條件下使之生長或發(fā)育的方法。這項工作自動控制50年代后期至今巳取得了很大的進展，如誘導培養(yǎng)胡蘿卜的體細胞分化成完整植株，由曼陀羅的花藥培養(yǎng)形成了單倍體的植株。從而證明了植物每個體細胞都有形成整體植物的潛在能力，如植物細胞具有“性”，在離體培養(yǎng)的一定條件下能誘導其分化器官和再生成植株。70年代以后有關植物原生質(zhì)體培養(yǎng)和體細胞雜

士鋒生物植物體內(nèi)脫落酸、赤霉素的分離和測定2013/09/22

在研究植物生命活動過程中，常常需要準確了解某一激素的含量以及各激素間的比例。因此，植物內(nèi)源激素的提取分離和測定是植物生理學實驗技術中極其重要的內(nèi)容。本實驗以ABA和GA為例，介紹激素的提取、分離及測定的基本原理和方法。一、原理利用脫落酸（abscisicacid，ABA）和赤霉素（gibberellicacid，GA）能溶解于有機溶劑（如丙酮、甲醇）的特性進行提取，將粗提物經(jīng)過一系列的分離技術（如萃取、薄層層析或紙層析等），使ABA、GA與其它成分分離。再對純化的ABA和GA進行生物學鑒定或物理

類似生長素對種子影響實驗分析2013/09/18

一、原理生長素及人工合成的類似物質(zhì)如萘乙酸等對植物生長有很大的調(diào)節(jié)作用，在不同濃度下對植物生長的效應也不同。一般來說，低濃度的生長素促進生長，高濃度時則抑制生長。不同的植物器官對生長素的反應也不同，通常根比芽、莖對生長素更敏感。本實驗據(jù)此觀察不同濃度的萘乙酸在種子萌發(fā)過程中對植物不同器官生長的影響。二、材料、儀器設備及試劑（一）材料：小麥種子。（二）儀器設備：溫箱，培養(yǎng)皿，移液管，鑷子，濾紙，尺子。（三）試劑：10mg/L萘乙酸，0.1%升汞。三、實驗步驟1.取小麥種子，用0.1%升汞消毒15m

士鋒生物雙向電泳操作步驟2013/09/16

（一）*向等電聚焦1.從冰箱中取-20℃冷凍保存的水化上樣緩沖液（I）（不含DTT，不含Bio-Lyte）一小管（1ml/管），置室溫溶解。2.在小管中加入0.01gDTT，Bio-Lyte4-6、5-7各2.5ml，充分混勻。3.從小管中取出400ml水化上樣緩沖液，加入100ml樣品，充分混勻。4.從冰箱中取-20℃冷凍保存的IPG預制膠條（17cmpH4-7），室溫中放置10分鐘。5.沿著聚焦盤或水化盤中槽的邊緣至左而右線性加入樣品。在槽兩端各1cm左右不要加樣，中間的樣品液一定要連貫。注

士鋒生物封閉劑小知識總結之封閉劑的種類及選擇2013/09/13

封閉的原理：固相載體表面（如ELISA板，NC膜或者PVDF膜上等）有很多洞洞，通過電轉或包被，膠上的蛋白被轉移到了膜上，或抗原/抗體固定在板上，蛋白以機械填補（堆積）和吸附的方式結合于表面。蛋白塞進了表面的很多洞洞里面，但蛋白并不是連續(xù)的，有很多空隙，而且比如說樣品孔之間也有空隙，這些洞洞并沒有填進東西，而抗體也是蛋白，也會被吸附在空的洞里，這樣，就會有很多非特異性的信號。封閉液中的蛋白可以與表面上的空白位置結合，同樣以機械填補（堆積）和吸附覆蓋的方式結合在膜上，因為有“填補”和“覆蓋”蛋白結

士鋒生物SDS-PAGE檢測外源蛋白的表達實驗步驟2013/09/11

SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS—PAGE）是蛋白分析中zui經(jīng)常使用的一種方法。它是將蛋白樣品同離子型去垢劑十二烷基硫酸鈉（SDS）以及巰基乙醇一起加熱，使蛋白變性，多肽鏈內(nèi)部的和肽鏈之間的二硫鍵被還原，肽鏈被打開。打開的肽鏈靠疏水作用與SDS結合而帶負電荷，電泳時在電場作用下，肽鏈在凝膠中向正極遷移。不同的大小的肽鏈由于在遷移時受到的阻力不同，在遷移過程中逐漸分開，其相對遷移率與分子量的對數(shù)間成線形關系。pGLO是將綠色熒光蛋白（GFP）的基因克隆在阿拉伯糖啟動子之后的一種表達載體。攜帶有

士鋒生物總蛋白和膜蛋白提取方法2013/09/10

膜蛋白具有多種功能，在細胞識別、細胞信號轉導、運輸?shù)扔兄兄匾慕巧虼艘彩堑乃幬锇悬c。抽提膜蛋白主要是進行蛋白組分析：常用的實驗是非變性膠電泳、酶活分析、SDS-PAGE、westernblot等。本文敘述了總蛋白的抽提方法、和膜蛋白的提取方法。一、從新鮮樣品中提取總蛋白（簡易法）1、自配裂解液（pH8.5-9.0）：50mMTris-HCl，2mMEDTA,100mMNaCl，0.5%TritonX-100，調(diào)pH值至8.5-9.0備用;用前加入100μg/ml溶菌酶，1μl/ml的蛋白

士鋒生物Western blot實驗和檢測大量蛋白方法2013/09/09

這種稱為“micro-westernarrays”（微印跡分析，譯）的方法能將蛋白檢測常用實驗：Westernblot的特異識別能力，和DNA芯片檢測的高通量能力結合起來，幫助科學家們一次實驗就可以觀測到細胞中各種蛋白之間的網(wǎng)絡系統(tǒng)，節(jié)省了每次反復實驗的人力和物力。領導這一研究的芝加哥大學癌癥生物研究所資深研究員RichardB.Jones表示，“蛋白才是細胞中真正的行使功能的‘儀器’，但是由于這一系統(tǒng)太復雜，所以還沒有科學家能深度剖析它們，現(xiàn)在我們終于能利用這一技術分析蛋白了。”自上個世紀70

士鋒生物雙向電泳溶液配制大全2013/09/04

A.裂解液（lysissolution）（8MUrea,4%CHAPS,2%Pharmalyte3-10,40ml）FinalconcentrationAmountUrea（Fw60.06）8M19.2gCHAPS4%（w/v）1.6gPharmalyte3-102%800μlDoubledistilledH2OTo40ml新鮮配制或者分裝貯存于-20℃①如果需要，尿素的濃度可以調(diào)高到9或者9.8M，也可用7MUrea，2MThoiurea。②其他的去垢劑（如TritonX-100，NP-40，

士鋒生物原核表達實驗前分析設計2013/09/02

在下面將列出幾個影響表達的因素，大家可以在表達前根據(jù)這幾個因素自己分析一下：1.翻譯起始位點現(xiàn)在大部分的表達載體都提供起始位點，所以它已經(jīng)把起始密碼子與核糖體結合位點的距離進行優(yōu)化了，一般情況下不需要自己再加，不過還是要留意載體圖譜上是否注明有起始密碼子和終止密碼子2.GC含量表達序列中的GC含量超過70%的時候可能會降低蛋白在大腸桿菌中的表達水平。GC含量可以利用DNASTAR、VectorNTISuite等軟件進行預測。3.二級結構在起始密碼子附近的mRNA二級結構可能會抑制翻譯的起始或者造

大鼠血小板衍生生長因子β（PDGF-β）elisa試劑盒說明書2013/09/01

大鼠血小板衍生生長因子β（PDGF-β）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書實驗原理：本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠血小板衍生生長因子β（PDGF-β）水平。用純化的大鼠血小板衍生生長因子β（PDGF-β）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入血小板衍生生長因子β（PDGF-β），再與HRP標記的PDGF-β抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的豬血小板

士鋒生物GST融合蛋白的表達與純化介紹2013/08/30

GST融合蛋白的表達與純化原理GST純化系統(tǒng)是利用GST（glutathione-S-transferase）融合蛋白與固定的谷胱甘肽（GSH）通過硫鍵共價親和，通過GSH交換洗脫的原理來進行純化。1ml樹脂大約可結合5-8mg融合蛋白，并可反復使用數(shù)次。試劑uIPTG（異丙基硫代-β-D-半乳糖苷）2gIPTG溶解入10ml水，過濾除菌，分裝，-20℃保存。uLysisbuffer（50ml）1）2.5ml1MTris，pH8.02）0.1ml0.5mlEDTA3）0.292gNaCl4）0.

士鋒生物WEALTEC垂直電泳儀的使用方法2013/08/29

本實驗的目的是學習WEALTEC垂直電泳儀基本操作流程，確保垂直電泳儀正常運行。主要內(nèi)容如下：灌膠、染色與脫色注意事項，詳細方法如下：一、灌膠1.把制膠器放在平穩(wěn)的臺面上。2.保持制膠器干燥，抬起兩側的羽狀開關放開卡門，平放，放進橡膠墊圈并緊扣。先把厚玻璃平板放入，再放兩側的墊片，后放入帶凹型的玻璃平板。3.緊緊合上卡門，同時按壓兩側的羽狀開關聽到“咔嚓”聲音。4.倒分離膠：將配好的分離膠溶液用加樣槍緩慢加入制膠玻板之間,直至液面達到卡門邊框下緣線處。小心用加樣槍將去離子水沿水平方向加入制膠板中

士鋒生物鐵蛋白的蛋白儲存功能2013/08/27

鐵蛋白是一種常見的球狀蛋白，由24個蛋白亞基構成，它能在所有類型的細胞中表達，是原核生物與真核生物zui用于儲存鐵離子的主要蛋白質(zhì)。鐵蛋白的主要功能是使鐵離子的儲存維持在溶解狀態(tài)并且對細胞無害的;對于人類來說，它是一個鐵缺乏和鐵過載的緩沖區(qū)。沒有與鐵離子的儲鐵蛋白稱為原儲鐵蛋白（或“去鐵鐵蛋白”）。鐵蛋白是動植物體內(nèi)廣泛存在的一類貯存鐵的蛋白。在哺乳類動物的肝和脾中含量zui多。其外徑約12～14nm，空囊腔徑長約6nm，外殼（即脫鐵鐵蛋白）由24個亞基組成，每個亞基約含163個氨基酸殘基，每個

膠原蛋白原理、功能介紹2013/08/22

膠原蛋白（collagen）是一種生物性高分子物質(zhì)，是一種白色、不透明、無支鏈的纖維性蛋白質(zhì)。它可以補充皮膚各層所需的營養(yǎng)，使皮膚中膠原活性增強，有滋潤皮膚，延緩衰老、美容、消皺、養(yǎng)發(fā)等功效。根據(jù)《肽營養(yǎng)學》（北京大學公共衛(wèi)生學院營養(yǎng)與食品衛(wèi)生學系教材）提出，分子量在1000道爾頓以下的膠原蛋白無需分解可被人體直接吸收，在口服吸收及外用護膚方面效果明顯。膠原蛋白是人體延緩衰老必須補足的營養(yǎng)物質(zhì)，占人體全身總蛋白質(zhì)的30%以上，一個成年人的身體內(nèi)約有3公斤膠原蛋白。它廣泛地存在于人體的皮膚、骨骼、

士鋒生物蛋白的裂解與提取方法步驟2013/08/21

這是偶整理的蛋白裂解和提取的protocol，希望對大家有所幫助。10ml三去污裂解液配方如下：50mmol/LTris-cl（pH8.0）：0.07882g150mmol/LNaCl：0.08775g0.2g/L疊氮鈉：0.002g1g/LSDS0.01g100mg/LAprotin0.001g10g/LNP-400.1g5g/L去氧膽酸鈉0.05g100mg/L苯甲基磺酰氟（PMSF）0.001g總蛋白抽提程序：1.PBS洗細胞3次2.加入裂解緩沖液（1.5x106個細胞大約加入100µL裂