（1）接種單菌落于2ml LB培養液中， 37℃過。

（2）取0.25ml過菌入25ml LB培養液中，37℃振搖4～6h至A590=0.4～0.6。

（3）倒入50ml管內，水浴10min，以2500～3000rpm離心5min，棄上清。

（4）緩慢加入75mmol/L預冷CaCl25ml懸浮菌體，冰浴20min，同上離心棄上清。

（5）緩慢加入75mmol/L預冷CaCl21.0ml輕輕混勻后分裝在1.5ml eppendorf管中，每管200μl，冰浴1～2h。

2.重組DNA的轉化

（1）將3只Eppendorf管按下列轉化項目作好標記：

（2）冰浴30min至1h。中間搖動3次，以防受體菌沉底。

（3）42℃90s。

（4）37℃水浴5min。

（5）加入無相應抗生素的Lb 200μl，混勻后，37℃水浴30～60min。

（6）分別取3組反應物各50μl在含相應抗生素的固體lb培養基平皿上涂布，室溫下干燥，然后倒置于37℃溫箱中培養過。