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士鋒生物細菌總DNA的提取和鑒定實驗介紹2014/02/21

(一)試劑：菌株(E.coli);蛋白酶k(20mg/ml);瓊脂糖;標準DNA水解液1.10%SDS2.酚/氯仿/異戊醇(1/1/1)3.異丙醇;70%乙醇4.LB培養基：蛋白胨10g,酵母粉5g,NaCl10g加蒸餾水至1升，然后滅菌備用。5.TE緩沖液：10mMTris?HCl,0.1mMEDTA(pH8.0)。6.CTAB/NaCl溶液(5%w/v)：5gCTAB溶于100ml0.5MNaCl溶液中，需要加熱到65℃使之溶解，然后室溫保存。7.TAE緩沖液(50×)(pH8.0)：每升溶

士鋒生物基于基因表達譜的基因調控網絡研究模型2014/02/19

基因表達存在組織特異性、細胞周期特異性和外界信號的響應特異性等特性，這些特異性都是由細胞內復雜而有序的調控機制實現的。對基因表達調控機制的研究具有非常重要的理論和應用價值，研究的目的是要回答以下問題：在特定的細胞轉態下，有哪些基因發生了表達?它們是通過何種方式被調控的?它們的表達量是多少?這些基因的產物對細胞的生理活動會產生什么影響?諸如這些問題的答案將揭示生命奧秘和指導臨床實踐，例如，可以通過測量基因的表達調控產物來診斷疾病、指導治療;可以人為干擾細胞的調控路徑來改變細胞的狀態等。基因表達調控

士鋒生物熒光微球分析技術及熒光微球吞噬實驗的操作流程2014/02/18

熒光微球分析技術屬于化學材料發展結果，可用于細胞表面抗原的檢測、退行性神經病變示蹤物、吞噬功能的檢測、血流分析、敏感性診斷試劑等，本文介紹了熒光微球分析技術以及熒光微球吞噬實驗的操作步驟。熒光微球分析技術簡介熒光微球分析技術是近年來化學材料科學活躍發展的產物，各種大小(0.2～10μm)可產生熒光和色彩的人工微球應運而生，目前各種材料人工合成、多種顏色和規格的熒光微球有2大類，一種是表面不帶修飾基團的微球，另一種是攜帶各種化學修飾基團，包括羧基化修飾、氨基修飾、巰基或醛巰基修飾等的微球。下圖是D

士鋒生物聚合酶鏈式反應步驟、體系及問題分析2014/02/17

聚合酶鏈式反應(PCR)是分子生物學常用技術，是體外擴增DNA的方法，設計生物學的各個領域，基本是進了實驗室都必須掌握的技術。對于剛入生物門的我們簡單了解其步驟、反應體系很有必要。聚合酶鏈式反應(polymerasechainreaction,PCR)步驟三步：1變性：模板DNA加熱變性2退火引物與它的靶序列發生退火，引物DNA量多，使引物和模板在局部形成雜交鏈3延伸4種dNTP與Mg2+存在的條件下，DNA合成酶催化以引物為起始點，按5'-3'方向進行延伸。上面三步為一個循環，可使拷貝數到達2

士鋒生物引物退火溫度設計技巧2014/02/14

PCR引物設計中的一個重要參數即是熔解溫度(Tm)。這是當50%的引物和互補序列表現為雙鏈DNA分子時的溫度。Tm對于設定pcr退火溫度是必需的。在理想狀態下，退火溫度足夠低，以保證引物同目的序列有效退火，同時還要足夠高，以減少非特異性結合。合理的退火溫度從55℃到70℃。退火溫度一般設定比引物的Tm低5℃。有幾種公式。表4列出確定引物Tmzui常用的兩種方法。*個公式來源于高鹽溶液中的雜交，適用于小于18堿基的引物。第二個公式根據GC含量估算Tm。確定引物Tmzui可信的方法是近鄰分析法。這種

士鋒生物聚丙烯酰胺凝膠（PAGE膠電泳）電泳的方法與銀染方法2014/02/13

PAGE膠電泳（聚丙烯酰胺凝膠電泳）主要是以PAGE為介質，根據DNA分子大小和電荷分離DNA分子。PAGE膠電泳采用銀染法進行顯色。銀染的原理：一、銀離子（一般是AgNO3)和DNA結合;二、還原劑甲醛把Ag+還原成銀顆粒，zui終DNA呈現為黑褐色。聚丙烯酰胺凝膠電泳是以聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質的電泳方法。在這種支持介質上可根據被分離物質分子大小和分子電荷多少來分離。聚丙烯酰胺凝膠電泳適宜分離鑒定低分子量蛋白質、小于1Kb的DNA段和DNA序列分析，其裝載的樣品量大，回收DNA純度高，長度

士鋒生物酵母菌的培養和觀察實驗方法與步驟2014/02/11

步驟1.觀察酵母菌(1)用滴管從甜酒釀的汁液中吸取一滴汁液，滴在載玻片上，用針攤開，蓋上蓋玻片，在低倍鏡下就能清楚地看到甜酒釀的汁液中懸浮著無數酵母菌。再換高倍鏡仔細觀察一個酵母菌，可以看到酵母菌是橢圓形的單個細胞，細胞中有許多小顆粒，也有幾個大的液泡(圖示)。有的酵母菌的一端長出大小不同的突起，這是酵母菌的芽體。芽體成長脫落，就成為新的個體，有的芽體在從母體脫落前又長出突起。這種繁殖方法叫出芽繁殖。(2)在蓋玻片一邊加一滴碘液，從另一邊用吸水紙把染液引入蓋玻片下。不久就能看到被染成棕褐色的細胞

士鋒生物慢病毒載體相關知識介紹2014/02/10

Q:什么是慢病毒?A:慢病毒載體(Lentivector)是用于感染細胞以實現穩定導入基因或siRNA的病毒載體系統，其感染效率可以達到100%。慢病毒和細胞結合后通過包裝蛋白將含有目的基因或者干擾序列釋放到細胞內。慢病毒RNA通過逆轉錄酶轉錄為DNA。DNA整合前復合體進入細胞核并整合到靶細胞的染色體DNA。由于靶基因或基因干擾序列整合到染色體上并且伴隨著細胞分裂時dna的復制一起復制，基因的導入能夠獲得穩定的表達。慢病毒的顯著優勢在于其可以整合到非分裂細胞，而其他載體(如非病毒載體、腺病毒載

人基質金屬蛋白酶-8（MMP-8）elisa KIT使用說明書2014/02/09

人基質金屬蛋白酶-8（MMP-8）酶聯免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關液體樣本中基質金屬蛋白酶-8（MMP-8）含量。本公司專業供應Elisa試劑盒，*，*，可免費提供代測服務，咨詢：，:實驗原理：本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人基質金屬蛋白酶8（MMP-8）水平。用純化的人基質金屬蛋白酶8（MMP-8）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入基質金屬蛋白酶8（MMP-8），再與HRP標記的基質金屬蛋白酶8（MM

士鋒生物猴子干細胞可刺激腦細胞生長2014/02/08

牙髓干細胞是存在于牙髓組織中的一種成體干細胞，可分化形成多種細胞類型。醫學研究認為，牙髓干細胞具有重要的治療潛力。此前，牙髓干細胞已應用于牙齒和顱面細胞的再生。研究小組說，他們的新研究結果表明，牙髓干細胞將來有望應用于細胞療法和再生醫療領域，尤其是治療與中樞神經系統相關的一些疾病。研究小組還指出，牙髓干細胞提取方便，醫生可以十分方便地從患者牙齒中分離出牙髓干細胞。因此，他們認為可嘗試設立牙髓干細胞“銀行”，人們一旦患病，就可以提取自己事先保存的牙髓干細胞用于治療。自體干細胞治療可大大降低目前移植

士鋒生物抗胞外細菌感染免疫介紹2014/02/07

致病性胞外細菌主要有革蘭陽性的葡萄球菌、鏈球菌、志賀菌、霍亂弧菌、致病性大腸桿菌和革蘭陰性的腦膜炎球菌和淋球菌、白喉桿菌、破傷風梭菌等。胞外菌致病機制主要通過分泌外毒素和細菌死亡時釋放的胞壁內毒素致病。細菌代謝中分泌至菌體外的毒性蛋白為外毒素，其毒性*，可致死。白喉毒素抑制宿主細胞蛋白質合成;破傷風梭菌外毒素可阻斷神經元間正常抑制性神經沖動傳遞;霍亂弧菌腸毒素可激活腸黏膜腺苷環化酶，增高細胞內cAMP水平導致腸道功能紊亂。革蘭陰性菌胞壁中的LPS是內毒素，其主要毒性組分是脂質A，導致發熱、激活補

技術：新加坡科學家發現“清潔”胚胎干細胞的方2014/02/05

據《印度時報》報道，近日新加坡一醫學研究小組在“清潔”人體胚胎干細胞技術上獲得重大突破，該小組研究人員稱，他們發現了一種可以起到“清潔”人體胚胎干細胞的技術，如若該技術能zui終應用在臨床上，那么這將為抵抗癌癥、修復受損人體組織起到相當重要的作用。新加坡研究人員介紹說，人體胚胎干細胞能夠生長分化成為各種器官及組織，并zui終形成整個人體。但是，有研究表明，未能分化的殘余干細胞zui終可能形成致癌細胞，從而帶來危害。zui近在《干細胞雜志》（stemCells）上，發表了他們的研究成果，該研究小組

JCB 一種蛋白在細胞核中的調控作用2014/02/04

Wnt信號轉導途徑是一類在生物體進化過程中高度保守的信號轉導途徑，調控早期胚胎發育；同時在成體中Wnt信號途徑異常活化會導致人類一系列高發性腫瘤的發生。在Wnt信號途徑激活的過程中，Dishevelled蛋白在細胞質中接受上游信號通過抑制APC、Axin以及GSK3β等蛋白形成的復合物的功能，從而穩定了細胞質中游離的β-catenin蛋白；細胞質中積累的β-catenin蛋白進入細胞核與TCF/LEF家族的轉錄因子結合從而開啟了下游靶基因的轉錄。科研人員發現，Wnt信號可以誘導Dishevell

士鋒生物APAAP免疫組化實驗操作過程2014/01/22

(一)基本原理APAAP(Alkalinephosphatase-anti-alkalinephosphatasetechnique)技術的基本原理為:抗鼠IgG抗體作為橋梁，將鼠源性識別細胞抗原的*抗體與鼠源性的抗堿性磷酸酶單克隆抗體-堿性磷酸酶復合物相連接，使之成為Ag，-Ab１－Ab２-antiAP-AP的復合物。還可通過二抗將APAAP復合物重復疊加起來，從而使多個堿性磷酸酶標記于組織細胞上*抗體所識別的抗原部位，提高了敏感性。(二)方法分離外周血單個核細胞(PBMC)，洗滌后用含10％

人難辨梭狀芽孢桿菌毒素A型抗原elisa試劑盒組成和使用說明書2014/01/21

人難辨梭狀芽孢桿菌毒素A型抗原酶聯免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書實驗原理：本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人難辨梭狀芽孢桿菌毒素A型抗原水平。用純化的人難辨梭狀芽孢桿菌毒素A型抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入難辨梭狀芽孢桿菌毒素A型抗原，再與HRP標記的難辨梭狀芽孢桿菌毒素A型抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的難辨梭狀芽孢桿菌毒素A型

士鋒生物ELISA實驗中的需要的試劑2014/01/19

在臨床檢驗中一般采用商品試劑盒進行測定。前文(2.2)已述，ELISA中有三個必要的試劑：免疫吸附劑、結合物和酶的底物等。完整的elisa試劑盒包含以下各組分：(1)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);(2)酶標記的抗原或抗體(結合物);(3)酶的底物;(4)陰性對照品和陽性對照品(定性測定中)，參考標準品和控制血清(定量測定中);(5)酶聯物(結合物)及標本的稀釋液;(6)洗滌液;(7)酶反應終止液。1.1免疫吸附劑已包被抗原或抗體的固相載體在低溫(2~8℃)干燥的條件下一般可保存6個月

士鋒生物免疫共沉淀原理及試劑配制方法2014/01/16

一原理：IP是利用抗原蛋白質和抗體的特異性結合以及細菌蛋白質的“proreinA"特異性地結合到免疫球蛋白的FC片段的現象活用開發出來的方法。目前多用精制的proreinA預先結合固化在argarose的beads上，使之與含有抗原的溶液及抗體反應后，beads上的proreinA就能吸附抗原達到精制的目的。實驗zui需要注意點就是抗體的性質。抗體不同和抗原結合能力也不同，免染能結合未必能用在IP反應。建議仔細檢查抗體的說明書。特別是多抗的特異性是問題。其次，要注意溶解抗原的緩沖液的性質。多數的

士鋒生物免疫組化問題及解決辦法2014/01/14

1、染色過強原因解決辦法抗體的濃度過高或抗體孵育時間過長降低抗體滴度（一般指濃縮性抗體）抗體孵育時間：室溫1小時或4℃孵育溫度過高，孵育溫度超過37℃一般室溫20-28℃DAB顯色時間過長或DAB濃度過高顯色時間不能超過5-10分鐘，以顯微鏡下觀察為準2、非特異性背景染色原因解決辦法操作過程中沖洗不充分每步沖洗3×5組織中含過氧化物酶未阻斷可再配置新鮮3%H2O2封閉，孵育時間延長組織中含內源性生物素正常非免疫動物血清再封閉血清蛋白封閉不充分延長血清蛋白封閉時間3、染色弱原因解決辦法抗體濃度過低

士鋒生物非標記抗體免疫電鏡實驗技術2014/01/10

(一)原理標記抗體法雖然具有許多優點，但也存在一些難以克服的問題，如標記抗體的分子增大，對細胞膜和組織的穿透力減弱;化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響;結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合，影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的不利影響因素，通過一系統的非標記抗體的免疫學反應，對組織中的抗原進行定位檢測。不標記抗體法又可分為用標記物顯示和不同標記物顯示兩種方法。前者利用基因工程方法制備雙特異性抗體的F(ab′)2，一個Fab片段與標本中的抗原結合，一個Fab是抗體蛋白的結合片段。在

士鋒生物雜交瘤細胞的制備2014/01/09

1）瘤細胞培養（無特殊要求）骨髓瘤細胞呈懸浮或輕微附著形式生長，如附著性生長的細胞多時，用吸管輕輕吹打或輕輕叩擊培養容器即可分離下來。通常要維持細胞于指數生長期（細胞培養時間為15~20小時），每3~5天取細胞0.2~1ml移入到10ml新培養液中，其zui大細胞密度不能超過5×105~106/ml。一般使用含有高糖的Dmem培養液，并補加有pH的穩定劑HEPES。2）免疫小鼠和脾細胞的制備免疫：取6~8周齡Balb/C雌鼠，基礎免疫2周，靜脈再加強免疫一次，3~5天后用于融合。脾細胞制備：1．