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如何進行枯草桿菌細胞固定化

來源:上海士鋒生物科技有限公司   2014年07月03日 08:07  

一、原理:把細胞懸浮在海藻酸鈉溶液中,滴進氯化鈣溶液中,形成海藻酸鈣凝膠小球。細胞保埋在凝膠的小孔中,制成固定化細胞。

二、試劑與材料

1、枯草桿菌細胞:將枯草桿菌在培養液中培養,在對數生長期離心(3000r/min,20min)收集細胞。

2、海藻酸鈉溶液:用蒸餾水配制成1.5%的海藻酸鈉,滅菌后備用。

3、氯化鈣溶液:配制成0.1M,滅菌后備用。

注射器、無菌水、固定化細胞培養液

三、操作方法

1、取枯草桿菌濕細胞2g,懸浮在10ml海藻酸鈉溶液中混合均勻。

2、用注射器吸取上述懸浮液,逐滴滴入到50ml氯化鈣溶液中,浸泡30-120min。

3、濾出凝膠珠用無菌水洗滌,除去凝膠珠表面的細胞,得到固定化細胞。

4、將固定化細胞1g,放進25ml培養液中,于37℃振蕩培養16-24h。觀察細胞生長情況,以及凝膠珠直徑和重量的變化。

注意:磷酸鹽會破壞凝膠結構。故固定化細胞培養液應限制磷酸鹽含量,同時要有一定濃度的鈣離子。

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