如何進行BrdU標記法

來源：上海士鋒生物科技有限公司 2014年09月09日 07:31

1．細胞以1.5×105/ml細胞數(shù)接種于直徑35ml培養(yǎng)皿中（內(nèi)放置一蓋玻片），培養(yǎng)1天，用含0.4％ FCS培養(yǎng)液同步化3天，使絕大多數(shù)細胞處于G0期。

2．終止細胞培養(yǎng)前，加入BrdU（終濃度為30μg/L），37℃，孵育40min。

3．棄培養(yǎng)液，玻片用PBS洗滌3次。

4．甲醇/醋酸固定10min。

5．經(jīng)固定的玻片空氣干燥，0.3％H2O2-甲醇30min滅活內(nèi)源性氧化酶。

6．5％正常兔血清封閉。

7．甲酰胺100℃，5min變性核酸。

8．冰浴冷卻后PBS洗滌，加1抗即抗小鼠BrdU單抗（工作濃度1：50），陰性對照加PBS或血清。

9．按ABC法進行檢測，蘇木素或伊紅襯染，在顯微鏡下隨機計數(shù)10個高倍視野中細胞總數(shù)及BrdU陽性細胞數(shù)，計算標記指數(shù)（LI）。

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