細(xì)胞質(zhì)膜是由蛋白質(zhì)不同程度鑲嵌在脂雙層中所形成的動態(tài)流動結(jié)構(gòu),蛋白質(zhì)和脂類分子又與寡糖鏈結(jié)合為糖蛋白和糖脂分子,糖蛋白和糖脂分子伸至細(xì)胞表面的分枝狀寡糖鏈在質(zhì)膜表面形成細(xì)胞外被(又稱為糖萼)。許多研究結(jié)果表明:細(xì)胞間的分子識別、細(xì)胞的生長和分化、免疫反應(yīng)和腫瘤發(fā)生等均與細(xì)胞外被(分枝狀寡糖鏈)有關(guān)。凝集素能與細(xì)胞外被的糖分子相連接、在細(xì)胞間形成“橋”,從而達(dá)到細(xì)胞凝集的效果。
1.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?nbsp;
1.1 觀察血細(xì)胞的凝集現(xiàn)象;
1.2 掌握凝集素促使細(xì)胞凝集的原理。
2.實(shí)驗(yàn)原理
凝集素(1ectin)是一類含糖的(少數(shù)凝集素例外)并能與糖進(jìn)行專一性結(jié)合的蛋白質(zhì),它具有凝集細(xì)胞和刺激細(xì)胞分裂的作用。凝集素促使細(xì)胞凝集主要是由于它能與細(xì)胞外被的糖分子相連接、在細(xì)胞間形成“橋”的結(jié)果,且加入與凝集素互補(bǔ)的糖分子可以抑制細(xì)胞間的凝集反應(yīng)。
3.實(shí)驗(yàn)用品
3.1 器材
顯微鏡、托盤天平、載玻片若干、滴管2支、離心管2支。
3.2 試劑
pbs緩沖液:稱取NaCl 7.2g、NazHP04 1.48g、KH2P04 0.43g、加蒸餾水,定容至l000 mL,調(diào)pH值到7.2。
3.3實(shí)驗(yàn)材料
3.3.1. 土豆塊莖。
3.3.2. 2% 紅細(xì)胞懸液
以無菌方法抽取兔子靜脈血液(加抗凝劑),用生理鹽水洗5次,每次2000 r/min,離心5 min,zui后按沉淀壓積的紅細(xì)胞體積用生理鹽水配成2%紅細(xì)胞懸液
4.實(shí)驗(yàn)方法
稱取土豆去皮塊莖2g
↓
加10 mL PBS緩沖液,浸泡2h(浸出的粗提液中含有可溶性土豆凝集素)
↓
載玻片上滴一滴土豆凝集素
↓
再滴一滴2%紅細(xì)胞液
↓充分混勻
靜置20 min
↓
低倍顯微鏡下觀察血球凝集現(xiàn)象
↓
以PBS液加2%血細(xì)胞懸液作為對照實(shí)驗(yàn)
5.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
6.實(shí)驗(yàn)報(bào)告
(1).繪制簡圖,表示血細(xì)胞的凝集過程;
(2).圖示血細(xì)胞凝集的原理。
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