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士鋒生物染色體分帶技術

來源:上海士鋒生物科技有限公司   2014年08月07日 07:58  

染色體顯帶技術是在顯示染色體基礎上發展起來的技術,其優點是能顯現染色體本身更細微的結構,有助于更準確地識別每條染色體及染色體異常疾病。染色體分帶技術能適用于各種細胞染色體標本。 
染色體顯帶是沿著整條染色體的長軸,能顯現出著色深淺不同、橫向走的帶型。目前認為染色體顯帶現象是染色體結構所致。但用特殊方法處理后,再用染料染色,則帶型更加清晰,隨顯帶方法不同,顯現出的帶型的特點也不一樣,這說明帶的出現與染料的特異結合相關。人類染色體能顯現出近2000個G帶,這些帶再融合成一般顯微鏡下可見的850條左右的高分辯染色體帶型或350條帶左右的常規帶型。 
常見的幾咱顯帶方法: 
(一)、G帶 
也稱為G顯帶,是zui常用的顯帶方法,具有操作簡便、經濟及標本能長期保存等優點。 
1、Giemsa原液的配制: 
(1)稱3.75gGiemsa粉置研磨器中,加少許丙三醇研磨,研磨越細越好; 
(2)將研細的Giemsa加丙三醇移入500ml棕色瓶內,丙三醇的總量為250ml,用一定量甲醇洗干凈研磨器。 
(3)搖勻,置60℃水浴鍋24小時或37℃溫箱72小時,經常搖動。 
(4)取出冷卻后,加甲醇總量至250ml混勻,密封棕色瓶備用。貯藏時間越長,染色效果越好。 
2、實驗材料: 
中期染色體標本; 
0.9%氯化鈉注射水; 
3%tris液體; 
0.25%胰蛋白酶; 
Gremsa染色液; 
蒸餾水; 
水浴鍋; 
立式染缸; 
定時器或時針; 
溫度計; 
鑷子及紗布; 
刻字筆; 
3、操作程序: 
(1)消化液配制:取0.9%氯化鈉注射水100ml,加0.25%胰蛋白酶1ml,制成0.025%胰蛋白酶鹽水消化液,加4-5滴tris液調PH6.8左右,移消化液于立式染色缸并置37℃水浴鍋中備用; 
(2)染液配制:取立式染缸,加蒸餾水500ml,加3滴tris液調PH并加入Giemea染液1ml左右,用吸管調勻備用; 
(3)漂洗液:取立式染缸一個,內加蒸餾水備用; 
(4)試消化:待消化液溫度在37℃左右時,取同批標本較多者標本1張,分二節或三節進行消化,每節相差十五秒左右,從45秒或60秒開始增減。取出后先在紗布或吸水紙上直立除去帶出胰蛋白酶,后置蒸餾水染缸內漂洗,取出后,標本斜面朝上,刮去染色缸內染液上浮膜,沿槽插入,每分鐘移動1次,染色3-5分鐘。

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