號(hào)通路，只有一個(gè)目的：將細(xì)胞的外部信號(hào)轉(zhuǎn)換成細(xì)胞的內(nèi)部變化。不管是胰島素，還是異亮氨酸，抗原還是腎上腺素，它們的*目的總是如出一則：對(duì)轉(zhuǎn)錄活性的改變。

這些對(duì)于轉(zhuǎn)錄活性的影響來自于轉(zhuǎn)錄因子與基因的調(diào)控區(qū)域：如啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、沉默子等結(jié)合達(dá)到的。經(jīng)典的凝膠遷移滯后試驗(yàn)（theelectrophoreticmobilityshiftassay）已經(jīng)成為證明某種蛋白能與特定的短基因序列結(jié)合的有力方法手段。但是凝膠遷移滯后試驗(yàn)具有速度慢，通量低，不定量和具有放射性的特點(diǎn)。即使完了你還不知道究竟是何種蛋白或者是蛋白的何種基團(tuán)負(fù)責(zé)指導(dǎo)體內(nèi)轉(zhuǎn)錄的變化。

為了弄清楚蛋白與基因序列結(jié)合的位點(diǎn)，需要利用基于抗體的實(shí)驗(yàn)。目前已經(jīng)有了一些方便快捷的分析試劑，可以有力的幫助進(jìn)行轉(zhuǎn)錄研究分析，其中有一些適用于發(fā)現(xiàn)型（篩選多種因子），有一些用于證實(shí)猜想的。當(dāng)然這些總是從初期的工作，進(jìn)入精細(xì)進(jìn)一步的研究工作。

PROTEINARRAYS（蛋白芯片）

Whattheyare：固定的轉(zhuǎn)錄因子陣列，利用標(biāo)記的基因序列或者蛋白質(zhì)進(jìn)行探索。

Whattousethemfor：用于發(fā)現(xiàn)和證實(shí)轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合位點(diǎn)或者蛋白－蛋白相互作用。

Pros（優(yōu)點(diǎn)）：能提供一種在廣泛的因子中檢測(cè)與特定序列結(jié)合的因子。

Cons（缺點(diǎn)）：可能會(huì)錯(cuò)失一些同源因子和一些轉(zhuǎn)錄后的變化。

Thingstokeepinmind：蛋白分析提供了一種在DNA片段中篩選潛在的結(jié)合位點(diǎn)的方法。但這種方法缺乏柔韌性，因此只局限于廣泛的已研究的因子。

Availablekits：

Panomics的TFProteinArrayIforDNA-ProteinInteractions(48proteins,CatalogNo.MA3505,$863),

ActiveMotif的TransArray(38proteins,twomembranes,CatalogNo.31400,$580)。

MICROSPHEREASSAYS（液相芯片）

Whattheyare：一些微磁珠的集合在一起，每一個(gè)能與*的因子結(jié)合位點(diǎn)偶聯(lián)。

Whattousethemfor：篩選轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)

Pros（優(yōu)點(diǎn)）：提供一種廣泛相對(duì)無偏見的*次篩選手段，理論上，一次能檢測(cè)100種不同轉(zhuǎn)錄因子。

Cons（缺點(diǎn)）：需要特定的硬件設(shè)施（如Luminexreader），不能*的解釋哪一種蛋白與哪一種蛋白結(jié)合。

Thingstokeepinmind：像RNAse保護(hù)試驗(yàn)一樣，磁珠系統(tǒng)能定量轉(zhuǎn)錄因子保護(hù)寡核苷酸不被消化的能力。來自匹茲堡大學(xué)醫(yī)學(xué)中心Luminexcorefacility主任AnnaLokshin就表示：“這種微粒方法能得到意想不到的結(jié)果，因?yàn)樗粫?huì)受到假說和初步數(shù)據(jù)的影響”，“通常你會(huì)在自己的知識(shí)領(lǐng)域里尋找，但是各自的知識(shí)領(lǐng)域是受到限制的?！?/em>

Availablekits：

Invitrogen的BioSource3-plexTranscriptionFactorAssays(100tests,CatalogNo.LHF2041,$845),

MarligenBiosciences的MultiplexTranscriptionFactorProfilingKit(20-plex)(96reactions,Catalog1954-096,Price$2,899).

CHROMATINIMMUNOPRECIPITATION（染色質(zhì)免疫沉淀分析）

Whattheyare：來自天然染色質(zhì)的蛋白質(zhì)-DNA交聯(lián)復(fù)合物的免疫沉淀，通過PCR或者微陣列來分析。

Whattousethemfor：證實(shí)細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)-DNA天然結(jié)合的細(xì)節(jié)。

Pros（優(yōu)點(diǎn)）：是能在體內(nèi)進(jìn)行的*分析方法，能詳細(xì)解釋蛋白容量的變化。

Cons（缺點(diǎn)）：需要一種目的轉(zhuǎn)錄因子的抗體。同時(shí)ChIP相對(duì)于凝膠遷移滯后試驗(yàn)來說，更為復(fù)雜和困難。

Thingstokeepinmind：ChIP不能說明白一種特定結(jié)合是否是功能性的。因此，我們需要利用轉(zhuǎn)錄活化分析方法。ChIP很有用，但是需要與其他技術(shù)合用來解決整個(gè)難題。

Availablekits：

ActiveMotif的ChIP-IT(25reactions,CatalogNo.53001,$395),

Upstate的EZChIP(22reactions,Catalog7-371,Price$329)。

OLIGONUCLEOTIDEARRAYS（寡核苷酸芯片）

Whattheyare：固定的寡核苷酸結(jié)合位點(diǎn)陣列，一般用于探測(cè)核提取物和研發(fā)某種蛋白的抗體。

Whattousethemfor：篩選轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)物。

Pros（優(yōu)點(diǎn)）：提供一種相對(duì)廣泛，無偏見的*次篩選手段。

Cons（缺點(diǎn)）：定性分析，需要進(jìn)行研究的轉(zhuǎn)錄因子對(duì)象的抗體。

Thingstokeepinmind：不同的實(shí)驗(yàn)中存在著差異

Availablekits：

Panomics的Protein/DNAComboArray(345sites,CatalogNo.MA1215,$1,415),

ArrayItTranscriptionFactorMicroarrays(expectedFall2006,estimatedprice$600-$900)。

ELISA-BASEDASSAYS（ELISA分析）

Whattheyare：基于酶聯(lián)免疫反應(yīng)的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合分析。

Whattousethemfor：定量轉(zhuǎn)錄因子的濃度。

Pros（優(yōu)點(diǎn)）：具有快速，定量和高通量的特點(diǎn)。

Cons（缺點(diǎn)）：需要目的轉(zhuǎn)錄因子的一種抗體才能進(jìn)行試驗(yàn)。

Thingstokeepinmind：ELISA-basedassays可以比傳統(tǒng)的凝膠遷移分析容納更多的蛋白，并且能將信號(hào)放大。具有半定量的特點(diǎn)。

Availablekits：

Clontech的TransFactorSTAT3ColorimetricKit(1x96assays,CatalogNo.631953,$583),

Panomics的HIFELISAKit(1x96assays,CatalogNo.EK1020,$518),

ActiveMotif的TransAMCREBKit(1x96assays,CatalogNo.42096,$585)。