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上海聯碩生物科技有限公司
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脂質體轉染的特征有哪些?2023/11/01
定義:最初,人們只是運用脂質體模擬生物膜,研究膜的構造及功能,從而發現了膜的融合及內吞作用,因而可用作外源物質進入細胞的載體。特性:陽離子脂質體表面帶正電荷,能與核酸的磷酸根通過靜電作用將DNA分子包裹入內,形成DNA一脂復合體,也能被表面帶負電荷的細胞膜吸附,再通過膜的融合或細胞的內吞作用,偶爾也通過直接滲透作用,DNA傳遞進入細胞,形成包涵體或進入溶酶體其中一小部分DNA能從包涵體內釋放,并進入細胞質中,再進一步進入核內轉錄、表達。已有眾多的文獻報道,脂質體本身會參與細胞生理活動,引起基因表
選擇透析袋截留分子量(MWCO)標準2023/10/27
透析袋分子量透析是小分子可通過半透膜從高濃度一側擴散到低濃度一側直至膜兩側濃度達到平衡的簡單擴散過程。由于多孔膜有選擇性地允許小分子通過,而保留大分子,所以透析可以根據溶質大小起到分離作用。可通過調控透析條件使透析應用得到理想的結果。最佳截留分子量(MWCO)取決于具體的應用。由于透析膜由海綿狀交聯聚合物組成,代表膜孔徑的截留分子量(MWCO)是一個間接衡量膜分離性能的參數。更準確的說,膜的截留分子量可定義為截留率至為少90%的溶質的分子量。由于溶質的滲透特性取決于分子形狀、水合化程度、離子電荷
細胞培養級DMSO的用途有哪些?2023/10/25
二甲基亞砜簡稱DMSO。是一種含硫的有機物,能溶于乙醇、丙醇、苯和l仿等有機物。常溫下為無色無臭的透明液體。細胞培養試驗中,DMSO一般用作藥物溶劑,要求染毒時其濃度不超過0.1%。也配制成高濃度的母液,稀釋時取少量到培養基中,而細胞凍存時DMSO的濃度一般為10%。另外DMASO也是一種一種滲透性保護劑,能夠降低細胞冰點,減少冰晶的形成,減輕自由基對細胞損害,改變生物膜對電解質、藥物、毒物和代謝產物的通透性。二甲基亞砜DMSO的用途:1、DMSO廣泛應用在人、動物細胞株及細菌噬菌體λ的低溫防護
細胞培養板和酶標板的區別2023/10/20
什么是酶標板,它是一種配合在酶標儀上,用來做酶聯免疫實驗的器材。雖然它看上去只是一塊普通的有孔的塑料板,但是在酶免疫測定中卻是一個部分。酶聯免疫吸附實驗,簡稱ELISA,是酶免疫測定技術中應用技術。其基本方法是將已知的抗原或者抗體吸附在固相載體表面,并保持其免疫活性。然后抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體,這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在測定時,把受檢標本(測定其中的抗體或抗原)和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的
如何鑒別胎牛血清、新生牛血清和小牛血清2023/10/17
牛血清、新牛血清跟小牛血清都是屬于牛血清,但應用與應用上依然存在差別。因此,區別適合自己血清蛋白是很重要的,那么除了觀查形象化的顏色別的物理特性,我們也能怎么區分呢?通過分析,美國看到了區別再生牛血清和胎牛血清的象征。科研人員搜集了39個胎牛血清和32個再生牛血清樣版。他們來源于五家國際性血清蛋白工業生產委員會(ISIA)經銷商,分別為美國、墨西哥、澳大利亞、新西蘭和哥斯達黎加。在各種樣本中,55個樣版交到第三方外包裝,單盲檢驗,16個樣版直接使用非盲檢驗。檢驗指標是血清蛋白生化指標。請見《血清
ELISA實驗操作要點:降低ELISA背景的四點tips2023/10/16
在ELISA試劑盒操作中,我們都認為ELISA實驗的原理似乎很簡單,不外乎固定抗原,添加一抗、二抗和底物,間中夾雜著洗滌和封閉。然而,即使是平淡無奇的洗滌和封閉,如果做得不太好,也有可能毀了整個實驗。在實驗結束時,我們是否能獲得有意義的信息,這在很大程度上取決于結果的信噪比。背景噪音會影響您對結果的判斷。如何降低ELISA的背景,下面有一些tips。一、洗滌很重要洗滌步驟看似很無聊,其實很重要,因為如果未結合的材料(如非特異結合的抗體或檢測試劑)殘留在微孔板中,那么它會增加背景噪音。如有必要,可
移液吸頭可分為哪幾類?2023/10/09
吸頭作為與移液器配合使用的耗材,一般根據應用的不同可分為:標準吸頭、濾芯吸頭、低吸附吸頭、自動工作站吸頭、寬口吸頭。1.標準吸頭是應用最為廣泛的吸頭,幾乎所有移液操作可使用普通吸頭,這是吸頭中實惠的一類。2.濾芯吸頭是為了避免交叉污染而設計的一種耗材,濾芯吸頭移取的樣品,不能進入移液器的內部,從而起到保護移液器的部件不被污染和腐蝕,更重要的是也可以保證樣品間不會有交叉污染,常用于分子生物學、細胞學、病毒學等實驗中。3.對于靈敏度要求高的實驗,或者易殘留的珍貴樣品或試劑,可以選擇低吸附吸頭來提高回
細胞培養相關知識2023/09/22
何為細胞培養?細胞常規培養是在細胞房中進行,在超凈工作臺或生物安全柜中,把細胞處理好,根據需要加入細胞培養基,放入細胞培養瓶/皿或細胞培養板中,再放到帶有5%CO2的37℃恒溫培養箱中培養。細胞就像花花草草,尤其是細胞株基本每天都要觀察、打理的哦!培養的細胞從哪里來?1.細胞株簡單說就是買的或送的。2.原代細胞組織或血液中提取的。一般細胞株可以連續傳代,而原代細胞養著養著就掛了。培養細胞的生長方式有哪些?1.貼壁生長必須貼附于支持物表面才能生長。見于各種腫瘤細胞等。(你把培養皿或培養瓶底朝上,細
膠原酶如何配置及使用方法2023/09/19
膠原酶的化學名為膠原蛋白水解酶,它能在生理PH和溫度條件下特異性地水解天然膠原蛋白的三維螺旋結構,而不損傷其他蛋白質和組織。膠原酶的化學本質是一種蛋白質,因此它對溫度、PH和導致蛋白質變性的各種因素均非常敏感,極易受到外界條件的影響而改變其本身的構象和性質。配置:膠原酶溶液同胰蛋白酶一樣配置、消毒滅菌和儲藏。注意:因為I型膠原酶分子顆粒比胰酶大,不容易過濾,因此可以用蔡式濾器過濾除菌。鈣、鎂離子和血清成分不會影響膠原酶的消化作用,因而可用BSS(如D-hanks或者PBS)或含血清的培養液配置。
PBS磷酸鹽緩沖液的配置方法及作用2023/09/14
PBS緩沖液,是生物化學研究中使用最為廣泛的一種緩沖液,主要成分為Na2HPO4、KH2PO4、NaC和KCI,一般作為溶劑,起溶解保護試劑的作用。由于Na2HPO和KH2PO4有二級解離,緩沖的PH值范圍很廣,而NaCI和KCI主要作用為增加鹽離子濃度。如有需要PBS還可以補加1mmoI/LCaCI2和0.5mmoI/LMgCI2,以提供二價陽離子。配置方法:稱取8.0gNaCI、0.2gKCI、1.44gNa2HPO4、0.24gKH2PO4溶于800ml蒸餾水中,用HCI調節溶液至7.4,
ELISA試劑盒的應用和類型2023/09/13
一、ELISA是什么?ELISA是酶聯免疫吸附測定法(Enzyme-LinkedImmunoSorbentAssay,ELISA)的簡稱。它是在免疫酶技術的基礎上發展起來的一種新型的免疫測定技術。ELISA是一種廣泛應用在測定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫分析技術。酶聯免疫吸附試驗的標準程序,通常是把蛋白、抗體、或激素等(即抗原)直接或是以捕捉抗體(captureAb)固定在固相載體上,再加入一級檢測抗體(primarydetectionAb),形成一個抗原抗體的復合物。如果該抗體已經用酶
如何正確使用細胞過濾器?2023/09/11
使用方法:1.準備濾器:選擇一個合適的細胞篩網,并根據需要在濾器上加上濾紙,使其更容易使用。2.準備細胞懸液或培養基:將細胞懸液或培養基倒入容器中,并加入需要的藥物、酶、抗生素等。3.過濾細胞:將濾器輕輕地壓在溫和的細胞懸液或培養基中,讓其均勻地經過細胞篩網的孔。4.收集過濾的細胞:過濾后的細胞可以直接通篩網被收集或者用無菌的器具從容器中進行收集。5.細胞培養:若需要培養篩選的細胞,則將其收集到未被污染的細胞培養基中,并按照培養基配方進行培養。注意事項:對于貼壁細胞的篩選,可以將篩網翻過來再用含
細胞培養一般包括哪些操作?2023/09/07
一、復蘇1.把凍存管從液氮中取出來,立即投入37℃水浴鍋中,輕微搖動。液體都融化后(大概1-1.5分鐘),拿出來噴點酒精放到超凈工作臺里。2.把上述細胞懸液吸到裝10ml培養基的15ml的離心管中(用培養基把凍存管洗一遍,把粘在壁上的細胞都洗下來),1000轉離心5分鐘。3.把上清液倒掉,加1ml培養基把細胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養基的10cm培養皿中后左右輕輕搖動,使培養皿中的細胞均勻分布。4.標好細胞種類和日期、培養人名字等,放到CO2培養箱中培養,細胞貼壁后換培養基。5.3天換一次培
影響PCR結果的因素有哪些?2023/09/04
(1)引物及濃度:①長度:15~30bp。②堿基:G+C含量以40%~60%為宜,ATGC最好隨機分布,避免5個以上的堿基成串排列。③避免引物內部出現二級結構、兩條引物間互補,特別是3′端的互補。④引物3′端的堿基,特別是最末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對。⑤與其它序列無明顯同源性。⑥濃度為0.1~1μmol或10~100pmol。(2)酶及其濃度:催化一典型的PCR反應約需酶量2.5U(指總反應體積為100μl時),濃度過高可引起非特異性擴增,濃度過低則合成產物量減少。(3)dNTP的質量與
移液管如何使用2023/08/31
1、檢查移液管的管口和尖嘴有無破損,若有破損則不能使用。2、洗凈儀器,先用自來水淋洗后,用鉻酸洗滌液浸泡。操作方法如下:用右手拿移液管或吸量管上端合適位置,食指靠近管上口,中指和無名指張開握住移液管外側,拇指在中指和無名指中間位置握在移液管內側,小指自然放松;左手拿洗耳球,持握拳式,將吸耳球握在掌中,尖口向下,握緊吸耳球,排出球內空氣,將吸耳球尖口插入或緊接在移液管上口,注意不能漏氣。慢慢松開左手手指,將洗滌液慢慢吸入管內,直至刻度線以上部分,移開吸耳球,迅速用右手食指堵住移液管上口,等待片刻后
關于細胞因子ELISA試劑盒的試驗條件2023/08/30
細胞因子ELISA試劑盒液體類標本:包含血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。血清:室溫血液自然凝結10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。細心搜集上清。保存過程中如有沉積形成,應再次離心。血漿:應根據標本的要求挑選EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。細心搜集上清。保存過程中如有沉積形成,應再次離心。尿液:用無菌管搜集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。細心搜集上清。保存過程中如有
瓊脂糖凝膠電泳的制備過程2023/08/29
瓊脂糖是實驗室常用的試劑之一,但是瓊脂糖凝膠電泳的制備過程也不簡單,接下來就為大家詳細介紹一下制備過程。一、用稱量紙片電子天平取0.3g的瓊脂粉;二、配30ML的1*10的TBST緩沖液與100ml的三角燒瓶里;三、倒入瓊脂粉搖勻,并轉到微波爐中加熱溶解;四、用手套取出到涼水稍稍晾涼至溫熱后(約60℃),加入核酸酶(Eb替代物)2ul;要邊加邊搖勻,使之充分搖勻;五、取電泳槽內的有機玻璃內槽(制膠槽)洗干凈,晾干,放入制膠玻璃板.取透明膠帶將玻璃板與內槽兩端邊緣封好,形成模子。將內槽置于水平位置
ELISA試劑盒樣本稀釋原則2023/08/21
標本的稀釋原則:首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量,確定適當的稀釋倍數。只有稀釋至標準曲線的范圍內,檢測的結果才是準確的。稀釋的過程中,應做好詳細的記錄。zui后計算濃度時,稀釋了“N”倍,標本的濃度應再乘以“N”。標準品的稀釋原則:2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為300pg/ml,做系列倍比稀釋后,分別稀釋300pg/ml,150pg/ml,75pg/ml,37.5pg/ml,18.5pg/ml,9pg/ml,4.
免疫熒光染色原理及步驟2023/08/18
免疫熒光又稱免疫熒光抗體。免疫熒光實驗原理是將熒光素標記在相應的抗體上,直接與相應抗原反應。其優點是方法簡便、特異性高,非特異性熒光染色少,相對使用標記抗體用量偏大。利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位。下面詳細介紹免疫熒光染色步驟:1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,10min后棄去,使標本保持一定濕度。2.滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內,保溫一定時間(參考:30min)。3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,p
塑料離心管的特點2023/08/14
實驗室常用的離心管有塑料的和玻璃的,一般塑料的用的較多,因為玻璃的離心管不能用在高速或者超速離心機上。塑料的離心管有PP(聚丙烯)、PC(聚碳酸酯),PE(聚乙烯)等材質。PP的管子性能相對來說比較好。塑料離心管為透明或者半透明,可以直觀的看到樣品離心情況。接下來就介紹一下各種材質塑料離心管的特點:PP(聚丙烯):半透明,化學及溫度穩定性較好,但是在低溫下會變脆,所以在離心時不要在4℃以下。PC(聚碳酸酯):透明度較好,硬度大,可以高溫消毒,但不耐強酸強堿以及一些有機溶劑如酒精之類。主要用于5萬
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