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牛血清白蛋白的用途2025/07/07
牛血清白蛋白顧名思義就是:牛血清中的一種球蛋白。它包含607個氨基酸殘基,分子量為66.446KDa,等電點為4.7。1.用于生化研究、遺傳工程和醫(yī)藥研究2.用作醫(yī)藥保健食品、調(diào)味品3.維持滲透壓、pH緩沖、載體作用4.在PCR體系中有助于Taq酶的穩(wěn)定性及活性,可以提高PCR的效率·生產(chǎn)方法:以牛血為原料分離出血清,用硫酸銨分級沉淀后,經(jīng)辛酸處理精制而得。·貯存方法:每10克加100毫升水進行溶解,或用PBS溶解也可,視用途而決定。然后分裝成小支。若不使用防腐劑可貯存在零下20或30攝氏度的恒
關(guān)于細(xì)胞傳代方法2025/07/02
一:細(xì)胞與試劑方面1、細(xì)胞(單層細(xì)胞,鏡檢合適)2、培養(yǎng)液(MEM-0.2%LH培養(yǎng)液或MEM培養(yǎng)液或199等合適細(xì)胞有要求的培養(yǎng)液)3、滅活小牛血清、慶大霉素溶液(1萬單位)4、7.5%NaHC03溶液5、0.25%胰蛋白酶6、PBS洗液。二:試驗小用具方面1、小方瓶(100m1)2、克氏瓶3、膠塞4、吸管(10ml、1m1)5、細(xì)胞吹打管(20ml)(以上用具需經(jīng)121℃至少15分鐘高壓滅菌)6、C02孵箱7、超凈臺8、倒置顯微鏡9、4℃、-20℃冰箱三:細(xì)胞傳代的操作過程1、挑選細(xì)胞:鏡檢
如何做ELISA試劑盒實驗才能減少實驗誤差2025/07/02
ELISA試劑盒試驗是一種敏感性高,特異性強,重復(fù)性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗的各領(lǐng)域中。ELISA檢測試劑盒是用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎(HEV)病毒IgM抗體ELISA檢測。但是您知道嗎?如果您在實驗過程中犯了以下幾個小錯誤的話也會出現(xiàn)實驗誤差的哦!一、移液器的使用,加樣(抗體)等需要準(zhǔn)確定量的試劑時不使用排槍,經(jīng)驗證明排槍很不準(zhǔn)確,極易跳孔,不要圖便宜買低檔的tips因為ELISA不但會放大被檢測的目
PVDF膜轉(zhuǎn)印膜要如何使用2025/06/26
PVDF膜即聚偏二氟乙/烯膜(polyvinylidenefluoride)是蛋白質(zhì)印跡法中常用的一種固相支持物。PVDF本質(zhì)是一種疏水性的聚合物,在水溶液中不會浸濕,為了在水性緩沖液和系統(tǒng)中使用PVDF膜,首先必須將其浸泡在50%(v/v)或更高濃度的醇溶液中。PVDF膜在使用時需預(yù)處理,用甲醇處理的目的是活化膜上的正電基團,使其更容易與帶負(fù)電的蛋白結(jié)合。甲醇、乙醇和異丙醇都適合浸泡這種膜。隨著膜的外觀從不透明到半透明,浸濕是顯而易見的。之后必須用水反復(fù)沖洗以去除醇類,經(jīng)預(yù)處理的膜可以直接放入
使用細(xì)胞培養(yǎng)皿時,注意事項有哪些?2025/06/26
培養(yǎng)皿是一種用于微生物或細(xì)胞培養(yǎng)的實驗室器皿,由一個平面圓盤狀的底和一個蓋組成,是細(xì)胞實驗中常見的一種耗材。那么使用培養(yǎng)皿有哪些注意事項呢?一起來看看吧!注意事項1、培養(yǎng)皿質(zhì)地脆弱、易碎,故在清洗及拿放時應(yīng)小心謹(jǐn)慎、輕拿輕放。2、使用完畢的培養(yǎng)皿及時清洗干凈,存放在安全、固定的位置,防止損壞、摔壞。3、使用培養(yǎng)皿的時候倒置的原因:1)防止培養(yǎng)基的水分蒸發(fā),特別是培養(yǎng)基倒的時候如果倒的比較少的時候更容易干掉,影響微生物生長。2)防止形成的冷凝水滴落在培養(yǎng)基上造成染菌。3)倒放可以在某種程度上防止菌
不同形狀的細(xì)胞培養(yǎng)板如何選擇2025/06/16
平底的細(xì)胞培養(yǎng)板是什么類型的細(xì)胞都可用的,但當(dāng)細(xì)胞數(shù)目較少,比如做克隆時就用96孔平底板。另外,做MTT等實驗時,無論貼壁和懸浮細(xì)胞一般均用平底板。至于U或V型板,一般在某些特殊要求時才使用。如在免疫學(xué)方面,當(dāng)做兩種不同淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)時,需要二者相互接觸以刺激。因此,一般需要U型板,因細(xì)胞會由于重力的作用而聚集在一個很小的范圍內(nèi);V型板的用途更少,一般用于細(xì)胞殺傷實驗時,為了使效靶細(xì)胞緊密接觸,常使用V型板﹐但這種實驗也可用U型板替代(加入細(xì)胞后﹐低速離心)。如果是養(yǎng)細(xì)胞的話,通常是運用平底的
胎牛血清的常用配比和血清使用注意事項2025/06/10
一、配制培養(yǎng)基:50mL的培養(yǎng)基,可以用450mIDMEM(89%)+50ml胎牛血清(10%)+5ml雙抗(1%)配制。二、配制細(xì)胞凍存液:現(xiàn)配現(xiàn)用,根據(jù)細(xì)胞類型調(diào)整培養(yǎng)基、血清和DMSO的比例,通常為6:3:1或7:2:1。例如,對于存活率高的細(xì)胞系,可以用培養(yǎng)基:血清:DMSO=7:2:1的比例配制,對于存活率低的細(xì)胞系或需要長時間保存的細(xì)胞系,可以增加血清濃度。血清使用注意事項一、避免反復(fù)凍融。血清解凍后,可在2-8℃條件下儲存6周。如解凍后的血清儲存時間需要大于6周,建議分裝成合適的體
透析的原理和過程2025/06/05
一、透析的原理透析只需要使用專用的半透膜即可完成。通常是將半透膜制成袋狀,將生物大分子樣品溶液置入袋內(nèi),將此透析袋浸入水或緩沖液中,樣品溶液中大分子量的生物分子被截留在袋內(nèi),而鹽和小分子物質(zhì)不斷擴散透析到袋外,直到袋內(nèi)外兩邊的濃度達到平衡為止。保留在透析袋內(nèi)未透析出的樣品溶液稱為“保留液”,袋(膜)外的溶液稱為“滲出液”或“透析液”。透析的動力是擴散壓,擴散壓是由橫跨膜兩邊的濃度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度,正比于欲透析的小分子溶質(zhì)在膜內(nèi)外兩邊的濃度梯度,還正比于膜的面積和溫度,通常是4
免疫熒光實驗中細(xì)胞爬片的操作步驟2025/05/28
首先是玻片的處理,普通的蓋玻片用砂輪劃成自己要的大小的小方塊,先用洗衣粉洗干凈,用水沖靜烤干,然后泡酸過夜,撈酸后流水洗凈,烤干,置于器皿中高壓滅菌,然后再烤箱中大約8小時烤干備用。爬片可以在培養(yǎng)皿六孔板或24孔板中都可,我選擇在培養(yǎng)皿中爬。一為節(jié)約經(jīng)費(培養(yǎng)皿可以重復(fù)利用)二來覺得培養(yǎng)皿口大,操作比較方便。培養(yǎng)皿消毒同上,消毒時記得消兩把鑷子具體操作是:用胰酶消化好細(xì)胞,充分吹打,使之成單細(xì)胞懸液(注意:這一點很重要,關(guān)系到將來爬出來片子的質(zhì)量)取出消毒的培養(yǎng)皿,可以先加少量培養(yǎng)基(以使玻片與
標(biāo)準(zhǔn)溶液與溶液的區(qū)別是什么2025/05/23
什么是溶液,什么是標(biāo)準(zhǔn)溶液?事實上有很多人經(jīng)常將兩者混淆,常規(guī)來說,溶液指的是多種或最少兩種物質(zhì)組成的混合物,而標(biāo)準(zhǔn)溶液則是具有準(zhǔn)確已知濃度的試劑溶液,但標(biāo)準(zhǔn)溶液是屬溶液,雖然兩者有著明顯的區(qū)別。下面小編來給大家詳細(xì)介紹一下標(biāo)準(zhǔn)溶液與溶液的區(qū)別。標(biāo)準(zhǔn)溶液與溶液的區(qū)別:溶液是由至少兩種物質(zhì)組成的均一、穩(wěn)定的混合物,被分散的物質(zhì)(溶質(zhì))以分子或更小的質(zhì)點分散于另一物質(zhì)(溶劑)中。物質(zhì)在常溫時有固體、液體和氣體三種狀態(tài)。溶液的均一性包含密度,組成,性質(zhì)都一樣,除此外,溶液還分為飽和溶液和不飽和溶液。標(biāo)
姬姆染色液的操作步驟2025/05/23
操作步驟:1、滴加姬姆染色液A液(0.5-0.8ml)于涂片上,并讓染液覆蓋整個標(biāo)本涂色片染色1分鐘。2、將姬姆薩染色液B液滴加于A液上面(滴加之量為A液的2-3倍)以洗耳球吹出微風(fēng)使液面產(chǎn)生漣漪狀,使兩液充分混合,染色3-10分鐘。3、水洗(沖洗時不能先倒掉染液,應(yīng)以流水沖去,以防有沉渣沉淀在標(biāo)本上)。4、干燥,鏡檢。注意事項:1、染色時間要視何種標(biāo)本,涂片薄厚,有核細(xì)胞多少,何種細(xì)胞及溫室等而定;通常染血液涂片時滴加B液后染1-3分鐘即可,染骨髓片則應(yīng)不少于5分鐘。2、做骨髓涂片時因為骨髓纖
細(xì)胞培養(yǎng)板和酶標(biāo)板的不同之處2025/05/20
細(xì)胞培養(yǎng)板1.細(xì)胞培養(yǎng)板不僅有96孔板,規(guī)格多樣,更有平底、U型底、V型底之分,適配不同功能。2.細(xì)胞培養(yǎng)板每個孔的底部透光性能不一致,易對相關(guān)實驗數(shù)據(jù)造成影響。3.細(xì)胞培養(yǎng)板經(jīng)過滅菌處理,可直接用于培養(yǎng)細(xì)胞。板底經(jīng)TC處理,有利于細(xì)胞貼壁培養(yǎng)。4.細(xì)胞培養(yǎng)板的要求較低,只需要符合細(xì)胞培養(yǎng)的條件即可,價格相對較低。酶標(biāo)板1.酶標(biāo)板為96孔,分為可拆卸與不可拆卸,靈活適應(yīng)不同的操作。2.酶標(biāo)板分為透明、白色、黑色三種類型,分別用于酶聯(lián)免疫實驗與化學(xué)發(fā)光實驗。3.酶標(biāo)板每個孔底部厚度相近,吸光度也相
細(xì)胞增殖實驗的方法2025/05/20
1.MTT法:是一種檢測細(xì)胞存活和生長的方法。該方法已廣泛用于生物活性因子的活性檢測、抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經(jīng)濟、快捷。原理:活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結(jié)晶甲瓚(Formazan)并沉積在細(xì)胞中,而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細(xì)胞中的甲瓚,用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其吸光度值,可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi),MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。2.CCK-8法:可用于簡
脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法的原理和操作步驟2025/05/09
一般來說細(xì)胞轉(zhuǎn)染的方法主要包括:電穿孔法、顯微注射、基因槍、磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法、多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)、病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染等。01脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染方法原理脂質(zhì)體作為體內(nèi)和體外輸送載體的工具,已經(jīng)研究的十分廣泛,用合成的陽離子脂類包裹DNA,同樣可以通過融合而進入細(xì)胞。使用脂質(zhì)體將DNA帶入不同類型的真核細(xì)胞,與其它方法相比,有較高的效率和較好的重復(fù)性。中性脂質(zhì)體是利用脂質(zhì)膜包裹DNA,借助脂質(zhì)膜將DNA導(dǎo)入細(xì)胞膜內(nèi)。帶正電的陽離子脂質(zhì)體,DNA并沒有預(yù)先包埋在脂質(zhì)體中,而是帶負(fù)電的DNA自動結(jié)合到
無血清培養(yǎng)基的使用2025/05/06
目前在大規(guī)模動物細(xì)胞的培養(yǎng)中已經(jīng)普遍適用于無血清培養(yǎng)基。在疫苗生長、單抗和各種生物活性蛋白等生物制品的應(yīng)用領(lǐng)域中,優(yōu)化無血清培養(yǎng)基的成分可使不同的細(xì)胞在最有利于細(xì)胞生長和表達目的產(chǎn)物的環(huán)境中維持高密度培養(yǎng),降低生產(chǎn)成本。在人類細(xì)胞培養(yǎng)中,應(yīng)用無血清培養(yǎng)基還能有選擇性地控制及避免成纖維細(xì)胞的過度生長。在無血清培養(yǎng)條件下,某些細(xì)胞的生長量和抗體的產(chǎn)量甚至較有血清時高出數(shù)倍。除生產(chǎn)生物制品外,無血清培養(yǎng)基也被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)、藥理學(xué)、腫瘤學(xué)領(lǐng)域:(1)研究細(xì)胞的分化條件:無血清培養(yǎng)基其組成可以是確
瓊脂糖的特點及其應(yīng)用領(lǐng)域2025/04/29
瓊脂糖是一種有機物,化學(xué)式C24H38O19,是一種白色或黃色珠狀凝膠顆粒或粉末,為線性的多聚物,基本結(jié)構(gòu)是1,3連結(jié)的β-D-半乳糖和1,4連結(jié)的3,6-內(nèi)醚-L-半乳糖交替連接起來的長鏈。瓊脂果膠是由許多更小的分子組成的異質(zhì)混合物。瓊脂糖在水中一般加熱到90℃以上溶解,溫度下降到35-40℃時形成良好的半固體狀的凝膠,這是它具有多種用途的主要特征和基礎(chǔ)。瓊脂糖凝膠性能通常用凝膠強度表示。強度越高,凝膠性能越好。性能:瓊脂糖在水中一般加熱到90℃以上溶解,溫度下降到35-40℃時形成良好的半固
離心管在細(xì)胞復(fù)蘇與轉(zhuǎn)移過程中的功能2025/04/29
細(xì)胞復(fù)蘇和凍存講究“慢凍快溶”,復(fù)蘇時一定要將凍存在液氮或-80℃中凝固的細(xì)胞凍存液快速融化至37℃,使胞外凍存時的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時進入細(xì)胞形成再結(jié)晶,對細(xì)胞造成損害。●打開水浴鍋加熱至37℃。●超凈臺上放好離心管(離心管規(guī)格選用15ml的),細(xì)胞培養(yǎng)瓶,移液管,紫外滅菌至少20至30分鐘,吹風(fēng)5至10分鐘除去臭氧。●37℃預(yù)熱好要復(fù)蘇細(xì)胞的培養(yǎng)液,也可以不用預(yù)熱培養(yǎng)液,根據(jù)細(xì)胞情況選擇。●向離心管中加約5至10ml培養(yǎng)液,從液氮罐或-80℃中取出凍存細(xì)胞,立即將凍存管放入37℃
IMDM培養(yǎng)基的實際用途2025/04/24
1、細(xì)胞株的培養(yǎng):所述細(xì)胞株為中國倉鼠卵巢細(xì)胞,且以下簡稱為細(xì)胞;將細(xì)胞以2*105—6*105cells/ml的數(shù)量接種于血清培養(yǎng)基,培養(yǎng)條件為37℃,5%二氧化碳的培養(yǎng)箱,得到細(xì)胞A;測定細(xì)胞A的生長曲線以及加入微量的促生長因子后得到細(xì)胞A的生長曲線;所述促生長因子為促生長劑G-CSF-RCHP,且按0.2—0.4μl/ml添加至血清培養(yǎng)基。2、細(xì)胞的收集:將生長于血清培養(yǎng)基中的細(xì)胞A使用胰酶處理1—5分鐘后,收集細(xì)胞A于15ml的離心管中,1000rpm離心3分鐘,吸入37℃預(yù)熱的10ml
ECL化學(xué)發(fā)光底物(高靈敏度)的操作流程2025/04/24
ECL化學(xué)化學(xué)發(fā)光底物(超敏)可為使用辣根過氧化物酶(HRP)偶聯(lián)物的免疫印跡實驗提供明亮的信號和低皮克級檢測靈敏度。該ECL底物能夠兼容各種膜、封閉液和寬范圍抗體稀釋液,以出色性能、通用性和高性價比,滿足用戶的免疫印跡應(yīng)用需求。操作步驟:1、執(zhí)行常規(guī)SDS-PAGE、轉(zhuǎn)模和WesternBlot步驟。注意用HRP標(biāo)記lgG或用一抗-鏈親和素-生物素-HRP夾法。2、WesternBlot最后一次洗模的同時配置發(fā)光工作液:分別取等體積的A液和B液,放入干凈容器中混合(注意吸取A液和B液的吸頭一定
酵母蛋白胨的特點及其在蛋白胨應(yīng)用中的優(yōu)勢2025/04/15
酵母蛋白胨的優(yōu)勢:動植物源蛋白胨是市場中主要的蛋白胨,對于比較粗放的發(fā)酵,該類產(chǎn)品具有一定的優(yōu)勢。但隨著酵母要求逐漸精細(xì)化、標(biāo)準(zhǔn)化后,這類蛋白胨的弊端逐漸暴露出來。動植物生長的環(huán)境及一些外在因素,可能造成動植物生長狀態(tài)的波動,進而造成其體內(nèi)蛋白含量波動,并且蛋白的儲存、提取和加工體系基本是開放的,可能會造成原料品質(zhì)的變化(如變色、腐敗等)和營養(yǎng)成分的差異,最終導(dǎo)致蛋白胨產(chǎn)品質(zhì)量的不穩(wěn)定,以此為原料,勢必會影響發(fā)酵生產(chǎn)的穩(wěn)定性;動物源蛋白凍可能存在致病性和風(fēng)俗禁忌問題,植物性的蛋白胨主要存在過敏性
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