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上海聯(lián)碩生物科技有限公司
中級會員 | 第17年
ICC用細胞抗原的制備2009/06/17
一、材料和試劑1、0.01MPBS（pH7.4）：NaCl8.0g；KCl0.2g；Na2HPO41.44g；KH2PO40.24g；ddH2O至1000ml；高壓滅菌,分裝。2、0.25%胰酶：稱取EDTA0.02gNaCl0.8gKCl0.04g加三蒸水100ml溶解后加0.25g胰酶,輕輕攪動,使胰酶溶解,不要產(chǎn)生泡沫,加酚紅少許,調(diào)PH值到8.2-8.6,過濾除菌,分裝10ml/管,-20℃保存,臨用前預溫到37℃。3、誘導液（TPA）：12-鄰-十四酰-佛波醇-13-乙酸酯（12-O-
雙向瓊脂擴散實驗2009/06/17
雙向瓊脂擴散實驗，是將抗原和相應抗體分別加入同一凝膠板內(nèi)的相鄰小孔中。兩者相互擴散,當擴散到他們的濃度比例合適的部位相遇時,就會形成抗原抗體復合物的沉淀。二、操作步驟1.取一塊干凈的玻璃板，用少量75%乙醇沖洗，晾干后置于水平臺，將1%瓊脂糖融化，56℃水浴中保溫。2.將瓊脂糖鋪于玻璃板上，厚度約為1㎜。3.打孔，孔距為4㎜，4.將抗血清按二倍稀釋法稀釋成1:2,1:4,1:8,1:16,1:32的不同濃度。在周圍孔中加入不同濃度的抗體，中心孔加抗原。將凝膠板置于濕盒內(nèi)，室溫過夜，觀察結(jié)果三、實
HLA分型技術(shù)2009/06/17
HLA分型技術(shù)主要組織相容性復合物（MHC）是脊椎動物體內(nèi)zui復雜且具有高度多態(tài)性的基因群。1984年GeorgeSnell發(fā)現(xiàn)小鼠MHC即H－2，1958年Dausset發(fā)現(xiàn)了人的MHC即HLA基因。MHC的表達產(chǎn)物稱為主要組織相容性抗原，MHC抗原是有核細胞表面膜蛋白分子，對抗原遞呈和免疫信號傳遞起關(guān)鍵作用。HLA基因，位于6號染色體上短臂上，長約4000Kb。HLA是目前所知人體zui復雜的遺傳多態(tài)性系統(tǒng)，有幾十個基因座位，每個基因座位又有幾十個等位基因，且呈共顯性表達。由于MHC基因位
凝膠沉淀反應2009/06/17
一、單相瓊脂擴散試驗原理一種定量試驗，將一定量的抗體混合于瓊脂內(nèi)，傾注于玻片上，凝固后，在瓊脂層上打孔，再將抗原加入孔中，使其向四周擴散。抗原抗體復合物形成的沉淀環(huán)直徑與抗原的濃度成正比。如事先用不同濃度的標準抗原制成標準曲線，則未知標本中的抗原含量即可從標準曲線中求出。本試驗主要用于檢查標本中各種免疫球蛋白和血清IgG含量。材料１．抗體：羊抗人IgG單價抗血清。２．抗原：待檢血清。３．３％生理鹽水瓊脂、生理鹽水、載玻片、直徑３mm打孔器、小三角燒瓶、毛細滴管、濕盒。方法1、制備含抗體的瓊脂板取
間接凝集反應（類風濕因子檢測） 2009/06/17
原理類風濕因子（rheumatoidfactorRF）是抗人或動物IgGFc段的抗體，是以變性IgG為靶抗原的自身抗體。IgM型RF被認為是RF的主要類型，也是臨床免疫檢驗中常規(guī)方法所測定的類型。IgG吸附于聚苯乙烯膠乳顆粒上作為檢測試劑，在反應介質(zhì)中，待檢血清中如含有RF，可與膠乳顆粒出現(xiàn)凝集反應。這是檢測IgM型RF的常用方法，但此方法只能定性或以滴度半定量，其靈敏度和特異性均不高，且只能檢出血清中的IgM型RF。檢測方法：膠乳顆粒凝集試驗即一定稀釋度的待檢血清+Ig-膠乳顆粒1~2滴凝集與
血清學技術(shù)2009/06/17
握體外抗原抗體反應的特點和影響因素；掌握經(jīng)典的體外抗原抗體反應的原理、方法和應用。*節(jié)免疫血清的制備免疫血清的制備是一項常用的免疫學實驗技術(shù)。價、高特異性的免疫血清可作為免疫學診斷的試劑（如用于制備免疫標記抗體等），也可供特異性免疫治療用。免疫血清的效價高低取決于實驗動物的免疫反應性及抗原的免疫原性。如以免疫原性強的抗原刺激高應答性的機體，常可獲得價的免疫血清。而使用免疫原性弱的抗原免疫時，則需同時加用佐劑以增強抗原的免疫原性。免疫血清的特異性主要取決于免疫用抗原的純度。因此，如欲獲得高特異性的
ELISA的操作要點2009/06/17
的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結(jié)果準確可靠的必要條件。ELISA的操作因固相載體的形成不同而有所差異，國內(nèi)醫(yī)學檢驗一般均用板式點。本文將敘述板式ELISA各個操作步驟的注意要點，珠式、管式及磁性球ELSIA，國外試劑均與特殊儀器配合應用，兩者均有詳細的使用說明，嚴格遵照規(guī)定操作，必能得出準確的結(jié)果。4.1標本的采取和保存可用作ELISA測定的標本十分廣泛，體液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、糞便）等均可作標本以測定其中某種抗體或抗原成份。有些標本可直接進行測定（如
ELISA實驗質(zhì)量控制問題2009/06/17
從1949年美國CollegeofAmericanPathologists（簡稱CAP）首先開始研究臨床實驗室室內(nèi)質(zhì)量控制（簡稱質(zhì)控）問題，美國學者Levery和Jenning于1950年發(fā)表*篇關(guān)于使用質(zhì)控圖的實驗室室內(nèi)質(zhì)控，臨床檢驗實驗室的室內(nèi)質(zhì)控工作正式拉序幕。到70年代，實驗室質(zhì)量控制進入一個新的階段--全面質(zhì)量管理，推行GoodLaboratoryParctice（簡稱GLP）。進入80年代末期，GLP的統(tǒng)一標準產(chǎn)生了，發(fā)展到"認證實驗室"管理階段。全面質(zhì)量管理的宗旨在于預防差錯的產(chǎn)生
ELISA試劑的臨床質(zhì)量評價2009/06/17
ELISA試劑的評價（evaluation）分兩個方面：一是試劑本身的質(zhì)量評價，符合一定要求后才能生產(chǎn)供應；一是在臨床應用中效果的評價。以肝炎ELISA診斷試劑為例，首先必須通過中國藥品生物制品檢定，以得到生產(chǎn)的許可。檢定內(nèi)容除包裝、標簽、說明書等外，對試劑的性能，如特異性、靈敏度、精密度和線性等均需逐項檢定，通過對一系列參比品的檢測，結(jié)果符合要求者才為合格。ELISA試劑的臨床質(zhì)量評價是用該試劑對臨床樣本進行檢測，以觀察其實際應用價值。部臨檢中心對乙肝ELISA診斷試劑在這方面進行了工作，通過
ELISA的概念、原理、操作步驟2009/06/17
ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定（Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay）的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。此項技術(shù)自70年代初問世以來，發(fā)展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學和醫(yī)學科學的許多領(lǐng)域。（一）原理ELISA是以免疫學反應為基礎(chǔ)，將抗原、牽9體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。由于抗原、抗體的反應在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應物
影響ELISA試驗效果常見問題原因分析及解決辦法2009/06/17
ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應用，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結(jié)果。我將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給同行帶來一些啟發(fā)，提高試驗質(zhì)量。操作步驟可能原因解決辦法選擇試劑選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。加樣1.血清或血漿標本分離不好即進行加樣；2.手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長（特別是室內(nèi)溫度較高時）；3
酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）基本原理2009/06/16
基本原理1971年Engvall和Perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）用于IgG定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標抗體技術(shù)發(fā)展成液體標本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基本原理是：①使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測定時，把受檢標本（測定其中的抗體或抗原）和酶標抗原或抗體按不同的步
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