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干型透析袋的使用和注意事項2024/03/18

使用方法：①把透析袋剪成適當長度(10cm左右)的小段。②用60℃去離子水中水浴30分鐘-1小時，再用去離子水膜內沖洗3次。③使用時，一端用下沉透析袋夾子夾緊，灌滿水后，用手指適當加壓，檢查不漏，方可裝入樣品。通常要留三分之一至一半的空間，以防透析過程中，袋外的水和緩沖液過量進入袋內將袋漲破。裝完樣品后，用上浮夾子夾緊袋口，可在袋內放一玻璃珠，以使透析袋處于懸浮狀態，即可進行透析。為了加快透析速度，除多次更換透析液外，還可使用磁力攪拌器。透析的容器要大一些，可以使用大燒杯、大量筒和塑料桶。注意事

細胞篩網的使用方法2024/03/11

準備濾器：選擇合適的細胞篩網，并根據需要在濾器上加上濾紙，使其更容易使用。準備細胞懸液或培養基：將細胞懸液或培養基倒入容器中，并加入需要的藥物、酶、抗生素等。過濾細胞：將濾器輕輕地壓在溫和的細胞懸液或培養基中，讓其均勻地經過細胞篩網的孔。收集過濾的細胞：過濾后的細胞可以直接通篩網被收集或者用無菌的器具從容器中進行收集。細胞培養：若需要培養篩選的細胞，則將其收集到未被污染的細胞培養基中，并按照培養基配方進行培養。此外，細胞篩網的使用還需注意以下幾點：1.細胞篩網的類型。細胞篩網通常分為單層和多層兩

蛋白酶K的原理和應用2024/03/05

新型蛋白酶K（ProteinaseK）的基因序列來源于林伯氏白色念球菌（Tritirachiumalbumlimber）的蛋白酶K基因，經過了基因定點突變和酵母細胞分泌表達、色譜純化。經過蛋白質工程化的新型蛋白酶K提高了比活性和純度，不含有細菌內毒素，應用范圍比天然蛋白酶K更廣泛。新型蛋白酶K是現有蛋白酶中活性最高的品種，在pH4到pH12的條件下均有活性，反應溫度介于0～75oC之間。在常用濃度的SDS、尿素或EDTA存在時亦很穩定。酶切割位點在脂肪族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵，可以用于

不同類型透析袋的區別2024/02/26

一、即用型透析袋即用型透析袋的制造過程沒有重金屬污染及硫化物，無需預處理，只需用去離子水清洗即可使用，滿足對截留分子量精確性和膜純度的應用。1.韌性膜材料，不易破損2.雜質含量極少，可無需預處理，只需用去離子水清洗即可使用3.孔徑標準均一4.對溶質的吸附性小5.可選分子量范圍廣100-3000006.多種扁平寬度可選7.生物技術膜，不含硫化物及金屬雜質二、普通干型透析袋1.PH穩定范圍:5-92.污染物水平:硫化物3.化學兼容性:與很多鹽兼容，比如CaCl2,(NH4)2SO4；還可與分子生物學

牛血清白蛋白在實驗中的作用2024/02/18

牛血清白蛋白（BSA）在生化實驗中有廣泛的應用,接下來為大家介紹其中兩種作用。牛血清白蛋白測定蛋白濃度：按50：1配置BCA工作液。10ulC液（蛋白標準）+90ulPBS液稀釋成0.5mg/ml的蛋白標準液。再分別以0、1、2、4、8、12、16、20ul將蛋白標準液加入96孔板的第1~8標準孔中，在其他樣品孔中加入10ul待測樣品。分別加PBS定容至20ul。各孔中加入200ulBCA工作液，室溫放置2小時。用酶標儀測定蛋白濃度：測定A562，依標準曲線算出蛋白濃度。牛血清白蛋白SDS-PA

配置瓊脂糖凝膠的方法2024/01/29

1.用于制備膠液的錐形瓶體積應為膠液體積的2-4倍，緩慢向緩沖液中加入瓊脂糖，邊加邊攪拌，防止瓊脂糖聚集。記錄瓶體和溶液總重量。2.微波爐高火加熱30s，根據配制的溶液體積調整加熱時間。加熱時間與微波爐、瓶體大小和瓊脂糖濃度有關。3.搖勻瓊脂糖溶液。4.再次高火加熱30s，搖勻瓊脂糖溶液。5.將溶液再次放回微波爐，高火加熱至沸騰（大約10-35s）。接觸移動時瓊脂糖膠液可能會劇烈沸騰，小心操作，避免燙傷。從微波爐拿出后，室溫冷卻1-2min，輕輕搖晃使液體里的氣泡溢出。6.重新放回微波爐，高火加

配置培養基過程中常見的問題2024/01/22

一、培養基顏色不正確（1）含有酸堿指示劑的培養基，若顏色不正確，通常是由于pH不正確導致的，加熱過度、錯誤的滅菌方式等都會導致此項問題。（2）加熱過度導致某些成分分解或糖焦化，如SC培養基(SC增菌液)加熱過度會變紅，含糖量高的培養基，加熱過度通常會出現顏色加深，呈焦糖色或棕褐色。（3）某些成分變質，如血液久置易變黑，制成的平板顏色偏棕黑色。二、培養基產生沉淀（1）某些培養基原本就含有不溶性沉淀，如TTB，MC培養基等，配方中含有大量不溶性碳酸鈣。（2）滅菌前未充分溶解，如Fraser培養基中含

冰凍切片免疫熒光實驗2024/01/15

1、冰凍切片固定冰凍切片37℃烘烤10至20分鐘，控干水分，置于4%多聚甲醛固定30min。于PBS緩沖液中晃動洗滌3次，每次5分鐘。2、抗原修復將切片浸沒在升滿EDTA抗原修復緩沖液（PH8.0）的修復盆中，置于微波爐內進行抗原修復，修復條件：中火8min至沸——停火8min保溫——中低火7min（整個過程需防止修復液過度蒸發，切勿干片。自然冷卻后，將切片置于PBS緩沖液中。然后在搖床上，晃動洗滌3次，每次5min。3、畫圈血清封閉切片稍甩干后，用組化筆在組織周圍畫圈，滴加組織自發熒光淬滅劑A

RNA提取原理與詳細步驟2024/01/08

原理用Trizol的溶液提取，將總RNA與DNA和蛋白質分離。Trizol是一種酸性溶液，含有硫氰酸胍(GITC)、苯酚和氯仿。GITC不可逆地使蛋白質和RNase變性。隨后進行離心。在酸性條件下，總RNA保留在上層水相中，而大部分DNA和蛋白質保留在中間相或下層有機相中。然后通過用異丙醇沉淀回收總RNA。RNase酶可以通過加入吡咯碳酸二乙酯(DEPC)來滅活。步驟組織：每100毫克新鮮組織加入1毫升TRIzol試劑，使用無菌手術刀在冰上切碎，并用無菌勻漿器或其他設備勻漿。細胞：如果是細胞培養

蛋白酶K的作用及保存方法2024/01/02

作用：蛋白酶K在原位雜交技術中通常用于雜交前的處理，它具有消化包圍靶DNA蛋白質的作用，以增強探針與靶核酸結合的機會，提高雜交信號。但蛋白酶K濃度過高、消化時間過長或孵育溫度過高時，都會對細胞結構有一定的破壞，導致組織切片脫落，細胞核的消失，從而影響雜交結果。EDTA緩沖液可以代替蛋白酶K的作用，解決上述出現的問題，并能達到理想的染色效果。保存方法：保存在-20℃的冰箱里，避免反復凍融，有效保證12個月。孵育溫度為55-65℃，理想孵育溫度為58℃，孵育時間為15分鐘至48小時，理想孵育時間為2

免疫熒光實驗中細胞爬片如何使用2023/12/25

首先是玻片的處理，普通的蓋玻片用砂輪劃成自己要的大小的小方塊，先用洗衣粉洗干凈，用水沖靜烤干，然后泡酸過夜，撈酸后流水洗凈，烤干，置于器皿中高壓滅菌，然后再烤箱中大約8小時烤干備用。爬片可以在培養皿六孔板或24孔板中都可，我選擇在培養皿中爬。一為節約經費（培養皿可以重復利用）二來覺得培養皿口大，操作比較方便。培養皿消毒同上，消毒時記得消兩把鑷子具體操作是：用胰酶消化好細胞，充分吹打，使之成單細胞懸液（注意：這一點很重要，關系到將來爬出來片子的質量）取出消毒的培養皿，可以先加少量培養基（以使玻片與

胎牛血清的功能有哪些？2023/12/20

胎牛血清應取自剖腹產的胎牛;新牛血清取自出生24小時之內的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。胎牛血清是高的，因為胎牛還未接觸外界，血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分最少。胎牛血清的功能：胎牛血清是細胞培養中用量最大的天然培養基，含有豐富的細胞生長必需的營養成份，常用于動物細胞的體外培養，具有極為重要的功能。1.提供對維持細胞指數生長的激素，基礎培養基中沒有或量很少的營養物，以及主要的低分子營養物。2.提供結合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結合或調變它們所結合的物質

胰蛋白酶如何在細胞培養中發揮作用2023/12/15

胰蛋白酶是一種消化酶，可分解許多脊椎動物消化系統中的蛋白質。它存在于胰液中。如何在細胞培養中發揮作用質膜上的蛋白質負責多種功能，這些功能對于維持細胞的正常生理活動至關重要。一些質膜蛋白（如鈣粘蛋白家族）是粘附蛋白，可作為錨，將細胞骨架蛋白連接到細胞外基質。這有助于細胞粘附和細胞遷移。在細胞培養物中，可以將胰蛋白酶添加到培養基中，通過消化粘附蛋白從培養皿表面釋放貼壁細胞。胰蛋白酶還通過消化粘附蛋白從聚集體中釋放細胞。EDTA也與胰蛋白酶一起添加到細胞培養物中，以螯合培養基中的二價離子。鈣和鎂離子可

如何使用細胞分離液2023/12/11

細胞分離液的配置與使用：1、不同濃度分離液的制備:先用9份分離液與1份8.5％NaCl或1.5MPBS混合達到生理性滲透壓，然后用生理溶液稀釋到所需濃度。2、不連續密度梯度層的制備:先將試管壁用牛血清濕潤，除去多余血清，這種預處理可使逐層疊加的液平穩沿管壁流下，使形成滿意的界面。在制備過程中一般用長針頭注射器從高密度向低密度逐層放置，有時相鄰兩層比重相差不大時，可將液放入注射器中，小針頭斜面緊貼管壁，任其自然慢慢流下。3、裝樣：樣品體積和細胞濃度根據不同細胞而異，一般加樣體積不宜過大，細胞濃度也

緩沖液配制操作流程2023/12/04

定義：緩沖溶液指的是由弱酸及其鹽、弱堿及其鹽組成的混合溶液，能在一定程度上抵消、減輕外加強酸或強堿對溶液酸堿度的影響，從而保持溶液的pH值相對穩定。以常用的PBS磷酸緩沖溶液(不含鈣、鎂離子)為例，簡述配制流程實驗材料：NaClNa2HPO4KClKH2PO4Mili-Q水HCl電子天平高溫高壓蒸汽滅菌鍋巴氏吸管方形試劑瓶試劑配方：NaCl8.00g+Na2HPO41.15g+KH2PO40.20g+KCl0.20g+1LMili-Q水=1×PBS實驗流程：根據配制需求計算需要使用的試劑量，用電

ELISA（酶聯免疫吸附）原理及步驟詳解2023/11/29

酶聯免疫吸附實驗1.原理：免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發生的高選擇性高特異性識別和結合原理，對待測抗體或者抗原進行分析測定的方法，酶聯免疫吸附分析（下稱ELISA）是免疫分析的一種，分三個部分組成：免疫識別，信號輸出和數據處理。2.步驟：免疫識別是在聚苯乙烯制成的96孔板上包被抗體，而后利用抗體識別待測的抗原（通常是疾病的蛋白質生物標記物，病毒，細菌等等，從復雜待測液中將抗原吸附到96孔板表面。接著用帶有辣根過氧化酶（HorseradishPeroxidase,HRP）、熒光或放射性

免疫熒光染色步驟和原理2023/11/22

免疫熒光染色是一種常用的細胞和組織學研究技術，它利用特異性抗體與標記熒光染料結合，來檢測和定位細胞中的特定蛋白質或其他分子。以下是免疫熒光染色的步驟和原理：步驟：1.細胞或組織樣品的固定：通常使用甲醛或乙醛來固定細胞或組織，以保持其形態和蛋白質結構的完整性。2.抗體的孵育：將特異性抗體加入到樣品中，與目標蛋白質結合。3.洗滌：用緩沖液洗去未結合的抗體。4.二抗的孵育：加入熒光標記的二抗，與原抗體結合。5.洗滌：用緩沖液洗去未結合的二抗。6.熒光顯微鏡觀察：使用熒光顯微鏡觀察樣品，熒光信號可顯示目

什么是離心管，需要注意哪些事項？2023/11/15

離心管(CentrifugeTube)是實驗室中常用的一種實驗耗材，主要用于離心實驗。離心管按大小可分為微量離心管和普通離心管，可以承受高速旋轉產生的離心力，通常微量離心管離心力測試最高可達21000g；而普通離心管離心力測試最高可達12000g；將樣品中的不同成分按照密度和質量進行分離。按照材質，離心管有塑料離心管，玻璃離心管幾種，有不同的體積和形狀，如0.6ml，1.5ml、2ml，15ml、50ml等。注意事項：1.使用離心管時，請確保離心管質量良好，無破損或裂紋。2.離心管應與離心機匹配

在試驗中ELISA試劑盒的條件挑選2023/11/10

在ELISA試劑盒中，進行各項試驗條件的挑選是很重要的，其間包括:（1）固相載體的挑選：許多物質可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。現在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不論何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一試驗條件下進行反響，調查其顯色反響是否均一性，據此判明其吸附功能是否良好。（2）包被抗體（或抗原）的挑選：將抗體（或抗原）吸附在固相載體外表時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時刻及其蛋

電泳緩沖液的特點是什么？有何作用？2023/11/03

電泳緩沖液是核酸、蛋白質凝膠電泳系統的一個重要組成，是電泳場中的導體，也是維持電泳系統恒定pH值的必要條件。常見的核酸電泳緩沖液有:TAE、TBE、TPE和MOPS等。電泳緩沖液的特點：1.TAE是使用緩沖系統。其特點是超螺旋在其中電泳時更符合實際相對分子質量(TBE中電泳時測出的相對分子質量會大于實際分子質量)，且雙鏈線狀DNA在其中的遷移率較其他兩種緩沖液快約10%，電泳大于13kb的片段時用TAE緩沖液將取得更好的分離效果，此外，回收DNA片段時也易用TAE緩沖系統進行電泳。TAE的缺點是