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免疫熒光染色原理及步驟

來源:上海聯碩生物科技有限公司   2023年08月18日 15:43  

免疫熒光又稱免疫熒光抗體。免疫熒光實驗原理是將熒光素標記在相應的抗體上,直接與相應抗原反應。其優點是方法簡便、特異性高,非特異性熒光染色少,相對使用標記抗體用量偏大。利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位。

 

  下面詳細介紹免疫熒光染色步驟:

  1. 滴加 0.01mol/L,pH7.4 的PBS于待檢標本片上,10min后棄去,使標本保持一定濕度。

  2. 滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內,保溫一定時間(參考:30min)。

  3. 取出玻片,置玻片架上,先用 0.01mol/L,pH7.4 的 PBS 沖洗后,再按順序過 0.01mol/L,pH7.4 的 PBS 三缸浸泡,每缸 3-5 min,不時振蕩。

  4. 取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。

  5. 立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度,一般可用“+”表示:(-)無熒光;(±)極弱的可疑熒光;(+)熒光較弱,但清楚可見;(++)熒光明亮;(+++--++++)熒光閃亮。待檢標本特異性熒光染色強度達“++”以上,而各種對照顯示為(±)或(-),即可判定為陽性。


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