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瑋馳課堂丨Lonza通過X-VIVO培養基改善患者T細胞的擴增2022/06/16

隨著越來越多的CAR-T療法批準，CAR-T生產工藝仍然面臨很多挑戰。起始材料復雜性就是其中很大的一點，接受CAR-T治療的患者之前可能接受過放療或化療，而這會導致他們的細胞處在功能低下、不健康的狀態。如何從復雜的原材料起始又能穩定收獲高質量的細胞，我們認為在培養基的選擇上是至關重要的。這項實驗比較了市面上的4種培養基，在IL-2和CD3/28刺激下培養PBMC。CFSE熒光染料檢測淋巴細胞增殖圖1：在X-VIVO、A、T、O培養基中培養4天的T細胞增殖比較。細胞增殖表現為細胞+培養基對照組的C

實驗室解憂神器——Stirling SU780XLE大容量超低溫冰箱2022/06/15

傳統超低溫冰箱貯存低溫樣品的重重困擾：溫度波動幅度較大，易引發低溫樣品失效，無法保障樣品安全性單位占地面積內低溫樣品存儲量少，無法滿足貯存需求噪音大、制冷故障率高耗電量大、綜合運行成本高（左）Stirling無活塞式制冷系統；（右）傳統壓縮機制冷系統您的實驗室解憂神器——高精度、大容量、低功耗的斯特林StirlingSU780XLE大容量超低溫冰箱，依托全局優化的斯特林Stirling無活塞式制冷機，為您的樣品保駕護航。斯特林Stirling超低溫冰箱從客戶的需求點出發，改變產品的底層邏輯，從根

Lonza 4D-Nucleofector X 模塊電轉條件優化指南2022/06/14

本期我們將為您提供優化4D-Nucleofector™X單元的Nucleofection™條件的指南，及有關該主題的常見問題。Nucleofector™I或II條件與4D-Nucleofector™X單元兼容度4D-Nucleofector™系統基于升級后的Nucleofector™技術，主要改進如下：兩種Nucleofection™體系(20ul和100ul)，且實驗條件可以互相轉移Nucleocuvette™由導電聚合物而非鋁組成，提高了細胞活力簡化的4D-Nucleofector™試劑更廣

LabChip AAV衣殼蛋白分析助力基因治療藥物研究2022/05/31

重組腺相關病毒有組織特異性高、安全性好、免疫原性低等等優點，目前被作為基因治療中常用的病毒載體。行業內常采用三質粒或二質粒系統進行細胞轉染，進而獲得不同血清型的重組AAV載體。其中Cap基因編碼VP1、VP2和VP3三種衣殼蛋白和組裝激活蛋白。VP1與病毒從體內逃逸有關，對感染性至關重要；VP2對于組裝或者感染不可少；VP3核心保守序列β-桶結構決定了不同血清型AAV與宿主細胞作用受體的差異，三者組裝成直徑約25nm的二十面體病毒顆粒，形成病毒衣殼，充當病毒基因傳遞載體。圖1：AAV病毒及組成示

如何輕松獲得酶標檢測數據，從選擇EnSight多功能酶標儀開始2022/05/23

工欲善其事必先利其器，生物制藥從前期藥物靶點確認，高通量篩選，藥物優化，活性功能分析，工藝開發，直至質量控制都離不開酶標儀這一檢測工具。一款的酶標儀，在靈敏度，穩定性，功能多樣性幾個維度如何平衡和把握呢？酶標儀常規的功能包含光吸收，熒光和化學發光，這三種應用能夠滿足比較基礎的檢測需求。但它們在原理上有著迥異的差別：光吸收是基于光通過物質時被吸收的定律進行定性和定量分析；熒光是熒光分子中處于激發態的原子核外電子由高能級回到低能級所產生的輻射；化學發光的檢測信號是酶促反應過程中釋放的光子，不需要激發

抗體工藝持續優化，待測樣品數量巨大？LabChip有辦法2022/05/20

來聊一聊LabChip®毛細管電泳系統在單克隆抗體研發和工藝中的應用，以及其靈敏、快速和高通量優勢。單克隆抗體工藝研究中，大家非常熟悉這些縮寫：QbD，CPP，CQA，DOE，PAT等。其終目的，即自始而終以高質量標準為出發點，基于科學和風險評估，保持持續優化過程，高效靈活地生產出高質量的產品，形成一個開放和穩健的良性循環。在這個循環中，持續優化發揮著引擎作用。如何做到快速分析、高效的反饋、知其然也知其所以然則是這個引擎運轉的動力來源。抗體蛋白工藝開發中，需要了解工藝參數與產品質量屬性之間的關系

IsoPlexis展現T細胞免疫“十八般武藝”，解析32種細胞因子2022/05/16

免疫系統的反應主要可分為兩個主要組成部分：先天性和適應性免疫。圖示先天免疫和適應性免疫細胞。（來自NatRevRheumatol.2021Aug2.）T細胞作為免疫細胞的一種，是適應性免疫的中堅力量，在抗感染、抗腫瘤等免疫應答中發揮重要作用。細胞因子可以幫助T細胞有效對抗“敵人”，清除自身損傷細胞。不同細胞因子表現出廣泛的多效性，以協調先天性和適應性免疫系統，通過分析免疫細胞產生的細胞因子，可以幫助分析和評估細胞的免疫功能，如CD4細胞，根據其分泌的細胞因子可分為不同的亞群（如下圖所示），在機體

5mins分離32個樣品，核酸電泳的利器——FlashGel閃膠系統2022/05/13

聽說你做核酸電泳和DNA片段回收如此繁瑣？配電泳液→配瓊脂糖→加EB染料→等膠凝固→加樣→等跑膠→凝膠成像儀照膠→紫外燈下切膠→DNA片段回收試劑盒一頓操作猛如虎，一看濃度零點五，費時費力又傷身，還要重頭再來過。你身心疲憊的說沒有其他好辦法。什么？！比“閃電俠”還快的FlashGel閃膠系統你竟然不知道！閃速解決你的煩惱，讓你不再emo！FlashGel閃膠系統是一個快速分離DNA，不需要紫外光照射就可在跑膠的同時觀察DNA/RNA遷移的便捷電泳系統。這個的工具在5分鐘之內分離多達32個樣品，可

Lonza 384孔Nucleofector高通量電轉全基因組2022/05/13

當前生物醫藥行業面臨著藥物靶點同質化嚴重的問題，確認疾病的作用機制并尋找的、有效的、安全的藥物靶點將成為轉化醫學和創新藥物開發的有效措施，基于高通量全基因組CRISPR篩選可以為此提供很好的幫助。CRISPR/Cas9已成為一種流行的基因編輯工具，因為它易于使用，并且與其他基因調節工具（例如siRNA技術）相比，脫靶效應更少。CRISPR/Cas9敲除篩選文庫的形式主要有混合文庫和陣列文庫，已被廣泛用于靶點識別和機制分析。雖然混合文庫的CRISPR/Cas9篩選通常更便宜且耗時更少，但陣列式CR

如何檢測單細胞功能性蛋白表達超能力？2022/05/10

如何知道有沒有超能力呢？首先要有IsoSpark超級細胞探測器，采用微流控技術全自動運行，搭配IsoCode單細胞微流控蛋白質組分析芯片，進行單細胞蛋白質組分析，檢測單細胞功能性蛋白表達超能力！芯片內12,000個獨立亞納升等級的微室可以同時捕獲上千個單細胞，微室底部的*抗體編碼技術可以在單細胞培養于微室時實時捕捉分泌因子或是胞內蛋白，單細胞可獲取30種以上的蛋白數據。然后數據自動端到端傳輸到IsoSpeak分析軟件，獲取單細胞PolyfunctionalStrengthIndexTM(PSIT

Isoplexis單細胞蛋白組技術免疫分析，加速臨床前研發2022/05/05

免疫療法已被證明是一種很有前途的治療方法。但由于免疫相關的潛在的嚴重不良反應，使許多研究人員依賴小鼠模型來獲得對于研究的治療產品或療法進行更深入的了解。從早期研發到臨床的整個過程中，IsoPlexis的單細胞解決方案一直在這方面幫助研究人員，通過體外實驗獲得與體內活性相關指標。通過檢測每個細胞同時分泌多個細胞因子的能力，即細胞的多功能性，檢測*的細胞亞群進而建立這種聯系。對于單細胞多功能檢測，允許研究人員發現臨床前發展的新機制，并加速他們的研究。相比于傳統的動物模型實驗有著很大的優勢。IsoPl

轉載：Lonza Cocoon® 細擴展細胞磁珠分選新功能2022/04/27

Lonza近日發布的第二代Cocoon®儀器擴展了Cocoon®平臺功能，包括在細胞結合、細胞分離和磁珠去除方面新的整合功能。磁珠分選功能可在細胞治療生產過程的任何階段使用，提供高水平的定制化和一致性，并擴展了細胞治療生產的端到端解決方案。這一創新功能將進一步加強Cocoon®平臺在細胞治療商業化方面的地位，幫助將研發推進到可以使患者受益的臨床階段。近日，細胞和基因治療生產Lonza龍沙宣布，用于自動化細胞治療生產的Cocoon®平臺的功能擴展。新的磁珠分選模塊增加了細胞結合、細胞分離和磁珠去除

一文帶你了解4D-Nucleofector轉染系統的原理2022/04/25

4D-Nucleofector轉染系統結合電穿孔技術和細胞特異性轉染液，通過系統內置優化的轉染程序，將外源基因高效導入目標細胞的細胞質中，并可直接入核，整合到細胞染色體中。4D-Nucleofector轉染系統可用于免疫細胞、干細胞、神經細胞、內皮細胞等較難轉染的原代細胞和各類細胞系中，其不依賴于病毒感染、不依賴于細胞有絲分裂，可加快基因表達，已成功轉染1200余種細胞系、130余種原代細胞，多數細胞系轉染效率可高達50-70%，部分原代細胞轉染效率可超過90%。4D-Nucleofector轉

Isoplexis 單細胞蛋白質組學技術攻克神經免疫研究中的挑戰2022/04/24

神經炎癥是對神經組織損傷的一種復雜生物反應，它在神經退行性疾病中起著關鍵作用。然而，由于細胞因子產生的異質性和異常的細胞因子特征，可能很難對其評估。為此，IsoPlexis開發了創新性的單細胞蛋白質組學平臺，可以對每個細胞的功能進行定義，從而深入探討神經免疫作用機制，以加速開發更有效的治療。如果僅僅是對細胞表面表型或RNA轉錄水平分析，可能會錯過發現胞外和胞內的功能表型差異，從而無法揭示患者反應的生物學驅動因素。傳統蛋白檢測技術往往只能分析樣本中所有細胞分泌的蛋白平均水平，而IsoPlexis技

使用立式超低溫冰箱要注意以下幾點2022/04/21

立式超低溫冰箱的制冷系統基本采用復疊式制冷的工作原理，選用兩臺全封閉壓縮機作為高、低溫級壓縮機使用。低溫級蒸發器的紫銅管以盤管形式直接盤附于內箱體外側，并用導熱膠泥填堵于盤管與箱壁之間的縫隙中，以增加熱交換效果。冷凝蒸發器為殼管式結構，內部為四管螺紋型紫銅管，采用逆流式熱交換方式。低溫級系統中還加配有氣熱交換器，可使從蒸發器出來的低壓氣體同進入冷凝蒸發器前的高壓氣體進行熱交換，這樣不但減少了冷凝蒸發器的熱負荷，而且充分利用了熱量。過濾器多采用除蠟型過濾器，其目的是有效去除冷凍油中的石蠟，以降低系

支原體預防大法，從此污染說拜拜2022/04/19

咱們從細胞培養支原體污染的來源說起連續培養細胞污染的概率大約15～35%，生物制藥中支原體污染的比例較低，近十年污染百分比在個位數[1]。細胞培養中搗亂的支原體通常是那一小撮，約20多種。其中包括口腔支原體（M.orale）、肺炎支原體（M.pneumoniae）、發酵支原體（M.fermentans）、精氨酸支原體（M.arginini）、萊氏無膽甾原體（A.laidlawii）和豬鼻支原體（M.hyorhinis），占污染比例的95%[2]，分別為人源、牛源和豬源支原體。（放大）支原體是怎樣

JANUS G3自動化PCR體系構建工作站幫你解決重重困難2022/04/19

PCR技術已應用到生物制藥領域的各個環節從前期研發階段后選序列的篩選，到工藝開發環節穩健方法的建立，至生產放行的把控。每一個環節都需要倚仗PCR技術的結果作為衡量的依據。諸如支原體，宿主DNA，內外源性病毒，逆轉錄病毒等風險因子都要求在生產起始、中間過程和終產品階段，進行定性或定量PCR分析，以確保風險因子可控。對CART，TCRT，CAR-NK等細胞治療產品而言，CAR/TCR基因拷貝數，RCR/RCL復制型慢病毒檢測,轉染效率等也都是必需的PCR檢測項目。PCR體系構建中經常遇到的問題一個樣

Cocoon®和4D-Nucleofector™LV2022/04/19

自體T細胞免疫療法的研究和開發進展迅速，但關鍵瓶頸在于擴大制造規模以滿足商業需求。其中一個關鍵痛點是GMP病毒載體（慢病毒和γ-逆轉錄病毒）的安全性、漫長的生產周期和高額的費用。解決這個問題的一個辦法是利用非病毒轉染方法對細胞進行基因修飾。Lonza的4D-Nucleofector™LV單元采用電穿孔技術，可實現自動化、可擴展多種細胞類型和應用的非病毒轉染方案。Cocoon®平臺是實現大規模自動化生產的新工具，它可以實現細胞分離、激活、轉導、擴增、細胞清洗和收獲，同時提供整個過程中的實時生物反饋

轉載：Isoplexis超級英雄細胞治療結節性硬化癥綜合癥腫瘤2022/04/15

結節性硬化綜合癥（TSC）是一種常染色體顯性的多系統遺傳疾病，其特點是在皮膚、大腦和腎臟等身體各部位生長良性腫瘤。這種情況還造成了健康問題，影響到世界150多萬兒童和成年人。TSC是由TSC1或TSC2基因的生物等位基因突變引起的，這些突變是腫瘤抑制因子的代號。這些突變往往導致形成重要器官中的良性腫瘤，從而激活mTORC1途徑并控制細胞的生長和代謝。鑒于良性腫瘤可以依賴神經節苷脂D3（GD3）來激活mTORC1通路，這是一種在正常大腦發育和惡性腫瘤中表達的膜糖磷脂，研究人員在近發表在JCIIns

新制造工藝提高CAR-NK細胞的療效2022/04/12

截至目前，超過5種CAR-T細胞治療產品獲得美國FDA認證，批準。國內CAR-T產品也已獲批。但CAR-T產品也存在著生產周期長、有細胞因子風暴及神經毒性副作用等挑戰。CAR-NK細胞被認為可能應對這些挑戰，其發展引起了研究人員的極大興趣——主要是因為相比傳統的CAR-T細胞，CAR-NK細胞具有*的優勢。與CAR-T細胞不同，CAR-NK細胞可以應用于異體細胞治療環境，這意味著它有潛力成為一種“現成的”治療方法，并降低移植物抗宿主病(GVHD)的風險，解決了周期長，必須應對個體化需求的問題。C