本期我們將為您提供優化 4D-Nucleofector™ X 單元的 Nucleofection™ 條件的指南,及有關該主題的常見問題。
Nucleofector™ I 或 II 條件與4D-Nucleofector™ X 單元兼容度
4D-Nucleofector™ 系統基于升級后的 Nucleofector™ 技術,主要改進如下:
兩種 Nucleofection™ 體系(20ul和100ul),且實驗條件可以互相轉移
Nucleocuvette™ 由導電聚合物而非鋁組成,提高了細胞活力
簡化的 4D-Nucleofector™ 試劑
更廣泛的程序來微調您的優化
由于這些差異,為 Nucleofector™ I 或 II 設備的解決方案對 4D-Nucleofector™ 系統無效。然而,在 4D-Nucleofector™ X 單元上運行優化是一個潛在改善 Nucleofection™ 結果的機會。
可以優化哪些參數
在 Nucleofection™ 優化中,重要的參數是 Nucleofector™ 試劑和程序。
使用什么底物進行優化
無論您感興趣的底物(質粒、siRNA、蛋白質或化合物)如何,我們始終建議使用我們的 pmaxGFP™ 載體進行優化。使用 pmaxGFP™ Vector 進行優化消除了許多變量,例如底物制備的性質和質量以及分析時間。
以什么 Nucleofection™ 體系優化
4D-Nucleofector™ X 單元旨在簡化優化步驟。我們建議使用 20 μl Nucleocuvette™ Strips 進行優化,減少珍貴細胞的消耗。確定條件后,您可以使用相同的方案,通過將細胞數量和底物數量乘以 5 來簡單地切換到 100 μl Nucleocuvette™。
如何優化 4D-Nucleofector™ X 單元的 Nucleofection™ 條件
當您的細胞沒有的方案時,將適用以下三種情況之一:
如果沒有任何可用的建議,則開始輪優化。幾種 Nucleofector™ 試劑(原代細胞的 P1 至 P5 和細胞系的 SE、SF 和 SG)中的每一種都將使用 15 個不同的程序進行測試。
遵循基本的 4D-Nucleofector™ X 單元方案(如果有)。使用少量的程序 (6–7個) 測試一個或兩個 Nucleofector™ 試劑。
數據庫描述了 4D-Nucleofector™ X 單元的 Nucleofection™ 條件和數據。您可以選擇測試它們或返回前兩個選項之一。
如何進一步改善Nucleofection™ 條件
參考下方的優化策略,可能會改善 Nucleofection™ 結果:
在表格中選擇效果好的初始程序(例如 DN-100)。表格中間垂直列出的是輪優化中描述的 15 個程序。
使用所選程序左側的程序來提高細胞活力(例如 DH-100)。使用右側的程序來提高轉染效率(例如 ER-100)
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