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標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋解析2022/12/19

下面標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋解析:1、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液的選擇：若血清、血漿、組織勻漿樣本，用試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。若細(xì)胞上清樣本，建議用細(xì)胞培養(yǎng)基梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。2、耗材準(zhǔn)備：準(zhǔn)備8個1.5Ml離心管，寫上S1-S7、空白。3、梯度稀釋：根據(jù)說明書，每管加入等體積的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液（培養(yǎng)基）。吸取同體積溶解好的標(biāo)準(zhǔn)品到S1管中，吹打10次混勻，渦旋5S。從S1管中吸取同體積溶液到S2管，吹打10次混勻，渦旋5s。同法稀釋S3-S7濃度。4、空白:標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液（培養(yǎng)基）作為空白即零濃度。注意：梯度

蛋白酶抑制劑的作用解讀2022/12/13

蛋白酶抑制劑從廣義上指與蛋白酶分子活性中心上的一些基團(tuán)結(jié)合，使蛋白酶活力下降，甚至消失，但不使酶蛋白變性的物質(zhì)。從放線菌發(fā)酵液中分離到亮肽素、抗痛素、糜蛋白酶抑素、抑彈性蛋白酶醛、抑胃蛋白酶素、磷酰胺素等，能分別抑制胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、糜蛋白酶、彈性蛋白酶、胃蛋白酶、金屬蛋白酶等各種蛋白酶。都屬于蛋白酶抑制劑。蛋白酶抑制劑的作用特點：是基于肽類的化合物，它們或競爭性抑制蛋白酶活性或作為互補蛋白酶活性點的抑制劑。這類藥wu能抑制蛋白酶的活性，其主要作用于艾滋病病毒復(fù)制的后階段，由于蛋白酶被抑制，

小鼠ELISA試劑盒收集標(biāo)本注意事項2022/12/06

ELISA的檢測目的是為了實驗提供準(zhǔn)確的實驗依據(jù)，為了保證實驗數(shù)據(jù)的可靠性，在實驗過程中必須堅持全面的質(zhì)量控制和全過程質(zhì)量控制，在收集標(biāo)本前都必須有一個完整的計劃。1、每個樣本量收集體積=100ulx檢測種類，如果要做復(fù)孔，標(biāo)本量收集體積=100ulx檢測種類x2。2、樣本收集后若在一周內(nèi)進(jìn)行檢測可保存于2-8°C，若不及時檢測，請進(jìn)行分裝，凍存于-20°或-80°C，避免反復(fù)凍融3、試劑盒的檢測范圍不等同于樣本中待測物的濃度范圍，建議實驗前通過相關(guān)文獻(xiàn)預(yù)估樣本中待測物的濃度并通過預(yù)實驗確定樣本

RT-PCR反應(yīng)靈敏度提高具體方式2022/11/25

PCR是一種選擇性體外擴(kuò)增DNA或RNA片段的方法，即通過試管中進(jìn)行的DNA復(fù)制反應(yīng)，使極少量的基因組DNA或RNA樣品中特定基因片段在短短幾小時內(nèi)擴(kuò)增上百萬倍。簡單說，就是我們在體外模仿體內(nèi)DNA復(fù)制的過程，混合DNA模板、合適的引物、足夠的4種dNTP、耐熱DNA聚合酶以及適宜的體系后，在一定溫度和時間條件下，進(jìn)行的DNA擴(kuò)增。PCR有很多種，其中RT-QPCR(實時熒光定量)原理：基于PCR反應(yīng)的技術(shù)提升與延伸，有染色法和熒光探針法。RT-PCR反應(yīng)體系的靈敏度提高具體方式有以下幾種：1、

化學(xué)實驗室個人防護(hù)措施及安全注意事項2022/11/14

在實驗室做實驗，一定要注意實驗的安全，畢竟化學(xué)藥品大多數(shù)都是電郵一定毒性的，一旦出現(xiàn)問題，影響不容小覷，甚至可能會危及生命。化學(xué)實驗室個人防護(hù)措施：1、眼睛及臉部的防護(hù)（1）、全防護(hù)眼鏡（眼睛及臉部是實驗室中最易被事故所傷害的部位，因而對他們的保護(hù)尤為重要。實驗室內(nèi)，氖實驗人員必須戴安全防護(hù)眼鏡（2）、當(dāng)化學(xué)物質(zhì)濺入眼睛后，應(yīng)立即用水徹di沖洗。沖洗時，應(yīng)將眼皮撐開，小心地用自來水沖洗數(shù)分鐘，再用蒸餾水沖，然后去醫(yī)務(wù)室進(jìn)行治療。（3）、面部防護(hù)用具用于保護(hù)臉部和喉部。為了防止可能的爆炸及實驗產(chǎn)生

細(xì)胞培養(yǎng)實用技巧小結(jié)2022/11/07

細(xì)胞培養(yǎng)是指將細(xì)胞從動物或植物體內(nèi)取出，然后在適宜的人工環(huán)境中生長的過程。細(xì)胞可以在培養(yǎng)前直接從組織中取出并通過酶或機(jī)械方法進(jìn)行解離，也可以來源于已建立的細(xì)胞系或細(xì)胞株。一、細(xì)胞培養(yǎng)實用技巧:1.買細(xì)胞要去靠譜的地方買，比如ATCC或者素冉生物。一般上面會有針對細(xì)胞的介紹，這樣培養(yǎng)之前可以了解細(xì)胞正常生長的狀態(tài)圖、傳代、培養(yǎng)基的類型等。2.不管是買的細(xì)胞，還是別人惠贈的細(xì)胞，剛拿到手趕緊的做兩件事：檢測是否有支原體污染;迅速擴(kuò)增凍存，凍存細(xì)胞復(fù)蘇后第二天*更換一次培養(yǎng)基。3.發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有污染迅速處

ELISA實驗樣本的保存與處理2022/11/01

ELISA實驗過程中除了選擇靈敏度高的ELISA試劑盒之外，處理樣本的方法也是不一樣的。ELISA實驗中常見液體類樣本有血清、血漿、尿液、細(xì)胞上清、腦脊液等幾種。一、ELISA樣本的保存正常情況下，再5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4°C，標(biāo)本再冰箱中保存時間過長會導(dǎo)致血清IgG聚合，是間接法的試劑本底加深，超過一周測定的需-20°C保存，凍結(jié)血清溶解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分不均，應(yīng)充分混勻并避免產(chǎn)生氣泡，渾濁或有沉淀的血清標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾，澄清后再檢測。測抗體的血清的標(biāo)本如需保存作多次檢測，以少量

驗證生化試劑盒是否適合使用方法2022/10/24

通常生化試劑盒可分為液體單試劑和液體雙試劑，前者特別適用于半自動生化分析儀和小型自動生化分析儀，使用方便，缺點是穩(wěn)定性較差。與單試劑相比，雙試劑提高了抗干擾能力，具有穩(wěn)定性能較好，可消除樣品自身空白等特點。此外還有多項同測組合試劑、濃縮試劑等。對新的試劑盒，我們首先要查看其資質(zhì)是否齊全，是否為合法有效試劑，是否有相關(guān)的臨床試驗驗證等。其次，在本實驗室，可做以下工作來進(jìn)行驗證是否適合使用。一、試劑空白吸光度用蒸餾水做空白，用zhi定的空白液加入試劑作為樣品測試，在測試主波長下，記錄測試啟動時的吸光

?PCR反應(yīng)污染原因與對策2022/10/17

PCR反應(yīng)的最大特點是具有較大擴(kuò)增能力與很高的靈敏性，但令人頭痛的問題是易污染，極其微量的污染即可造成假陽性的產(chǎn)生。一、污染原因1、標(biāo)本間交叉污染:標(biāo)本污染主要有收集標(biāo)本的容器被污染，或標(biāo)本放置時，由于密封不嚴(yán)溢于容器外，或容器外粘有標(biāo)本而造成相互間交叉污染;標(biāo)本核酸模板在提取過程中，由于吸樣槍污染導(dǎo)致標(biāo)本間污染;有些微生物標(biāo)本尤其是病毒可隨氣溶膠或形成氣溶膠而擴(kuò)散，導(dǎo)致彼此間的污染。2、PCR試劑的污染:主要是由于在PCR試劑配制過程中，由于加樣槍、容器、雙蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染.

ELISA實驗中洗板機(jī)洗板關(guān)鍵點2022/10/10

洗板機(jī)洗板人為因素少，速度快，條件恒定，但是使用洗板機(jī)洗板時應(yīng)注意以下三個關(guān)鍵點。1、洗滌參數(shù)主要的參數(shù)是洗滌量。自動洗板機(jī)會分配洗滌液。如果你之前遭遇過高背景，那么不要猶豫，將洗滌量調(diào)為高，最好是比包被體積更高。太少的洗滌液會讓一部分分析表面洗滌不到，從而明顯增加背景。所有反應(yīng)孔的洗滌量必須相同。江萊生物ELISA試劑盒的使用手冊中列出包被量。我們建議使用350µl洗滌液進(jìn)行洗滌，以便清潔整個反應(yīng)孔的壁。一般來說，洗滌量越高，則孵育步驟殘留的抗體或抗原量就越少。2、洗滌次數(shù)影響洗滌效果的主要參

關(guān)于抗體功能分類簡介2022/10/05

抗體是哺乳動物適應(yīng)性免疫系統(tǒng)對抗病原體的核心，它是在病原體刺激下由漿細(xì)胞（效應(yīng)B細(xì)胞）所分泌的一種免疫球蛋白，能夠識別并結(jié)合特異的病原體抗原，隨后通過介導(dǎo)中和作用、調(diào)理作用、效應(yīng)T細(xì)胞殺傷等來清除病原體。機(jī)體在抗原物質(zhì)刺激下，由B細(xì)胞分化成的漿細(xì)胞所產(chǎn)生的、可與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)的免疫球蛋白。因為初有人用電泳證明血清中抗體活性在γ球蛋白部分，故曾把抗體統(tǒng)稱為兩種(γ)球蛋白。后來證明，抗體并不都在γ區(qū);而且位于γ區(qū)的球蛋白，也不一定都具有抗體活性。1964年，世界衛(wèi)生組織舉行專門會議，將

細(xì)胞周期的測定原理與操作步驟2022/09/26

細(xì)胞周期的測定原理與操作步驟：一、原理1、細(xì)胞周期指細(xì)胞一個世代所經(jīng)歷的時間。從一次細(xì)胞分裂結(jié)束到下一次分裂結(jié)束為一個周期。細(xì)胞周期反應(yīng)了細(xì)胞增殖速度。2、單個細(xì)胞的周期測定可采用縮時攝影的方法，但它不能代表細(xì)胞群體的周期，故現(xiàn)多采用其他方法測群體周期。3、測定細(xì)胞周期的方法很多，有同位素標(biāo)記法、細(xì)胞計數(shù)法等，這里介紹一種利用BrdU滲入測定細(xì)胞周期的方法。4、BrdU（5-溴脫氧尿嘧啶核苷）加入培養(yǎng)基后，可做為細(xì)胞DNA復(fù)制的原料，經(jīng)過兩個細(xì)胞周期后，細(xì)胞中兩條單鏈均含BrdU的DNA將占l/

標(biāo)準(zhǔn)新生牛血清保存與注意事項2022/09/19

標(biāo)準(zhǔn)新生牛血清(輻照滅菌)保存：1.需要保存的血清，必須存儲于-20℃至-70℃低溫冰箱中。4℃冰箱保存請勿超過一個月時間。由于血清結(jié)冰時體積會增加約10%，因此在凍存之前，必須預(yù)留一定的體積空間，以免發(fā)生污染或玻璃瓶破裂；2.血清的熱滅活在56℃溫度中加熱30分鐘，加熱過程中必須搖晃均勻。熱滅活的目的是使血清中的補體成分滅活，除非必須，不建議做這樣的處理，因為這會導(dǎo)致血清沉淀物顯著增多，從而影響血清質(zhì)量。補體參與反應(yīng)有：細(xì)胞毒作用、平滑肌細(xì)胞收縮、肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺、增強吞噬作用、促進(jìn)淋

上海撫生為大家介紹PCR反應(yīng)的引物2022/09/13

引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：1、引物長度：5-30bp，常用為20bp左右。2、引物擴(kuò)增跨度：以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至0kb的片段。3、引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串

溶液配制步驟與注意事項2022/09/05

溶液、試劑的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確度是保證理化分析質(zhì)量的前提，受到各實驗室的高度重視。但母液、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)往往不能直接用于實驗分析，需要配制成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液才能使用。配制后的試劑、溶液保存期因?qū)嶒炇噎h(huán)境、溶劑、器皿潔凈度、密封程度、使用頻次等條件而不一致，檢測標(biāo)準(zhǔn)或證書一般未作詳細(xì)規(guī)定，給理化實驗室標(biāo)準(zhǔn)溶液的管理帶來不便。由于各實驗室標(biāo)準(zhǔn)溶液存放條件相對固定，使用En值確定所使用標(biāo)準(zhǔn)溶液有效期，為大家定量確定溶液、試劑的有效期提供一種方法。溶液配制步驟:1.計算:計算配制所需固體溶質(zhì)的質(zhì)量或液體濃溶液的體

單克隆抗體基本概念2022/08/30

抗體(antibody)是一種通過效應(yīng)B細(xì)胞（漿細(xì)胞）分泌，用來鑒別和清除外源物質(zhì)如細(xì)菌、病毒等的一種“Y”形免疫球蛋白。通常，天然抗體具有2條較長、相對分子量較大的重鏈（H鏈），以及2條較短、相對分子量較小的輕鏈（L鏈）。鏈間由二硫鍵和非共價鍵連接形成一個的單體分子。按照生物學(xué)特征，整個抗體可進(jìn)一步分為恒定區(qū)（C區(qū)）和可變區(qū)（V區(qū)）兩部分。由于自然界中存在各種各樣的病原體，而這些病原體的表面又存在諸多不同的蛋白質(zhì)，抗體要識別它們，其“Y”形結(jié)構(gòu)的兩端部分（也就是其可變區(qū)）也相應(yīng)是千變?nèi)f化的，從

PCR擴(kuò)增儀的分類及性能指標(biāo)2022/08/15

PCR擴(kuò)增儀的種類總體來說，可以分成兩大類，即普通PCR擴(kuò)增儀和實時熒光定量PCR擴(kuò)增儀。一、普通PCR擴(kuò)增儀1.普通PCR擴(kuò)增儀即通常所謂的定性PCR擴(kuò)增儀。2.梯度PCR儀是由普通PCR儀衍生出的帶梯度PCR功能的基因擴(kuò)增儀。3.原位PCR儀是由普通PCR儀衍生出的帶原位擴(kuò)增功能的基因擴(kuò)增儀。二、實時熒光定量PCR擴(kuò)增儀1.金屬板式實時定量PCR儀，還可作為普通PCR儀使用，有的甚至帶梯度功能，可容納的樣本量大，無需特殊耗材，但溫度均一性欠佳，有邊緣效應(yīng)，標(biāo)準(zhǔn)曲線的反應(yīng)條件難以做到與樣品*一

好的引物所具有的特點2022/08/08

好的引物所具有的特點：1、典型的引物18到24個核苷長。引物需要足夠長，保證序列獨te性，并降低序列存在于非目的序列位點的可能性。但是長度大于24核苷的引物并不意味著更高的特異性。較長的序列可能會與錯誤配對序列雜交，降低了特異性，而且比短序列雜交慢，從而降低了產(chǎn)量。2、選擇GC含量為40％到60％或GC含量反映模板GC含量的引物。3、設(shè)計5'端和中間區(qū)為G或C的引物。這會增加引物的穩(wěn)定性和引物同目的序列雜交的穩(wěn)定性。4、避免引物對3'末端存在互補序列，這會形成引物二聚體，抑制擴(kuò)增。5、避免3'末

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制條件和標(biāo)定2022/08/01

一、配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液必須具備8個基本條件：1、應(yīng)采用具有高純度的溶質(zhì)或基準(zhǔn)物質(zhì)(如金屬、金屬氧化物或金屬化合物;酸、堿、金屬有機(jī)化合物、適宜的鹽類、有機(jī)溶劑等)。2、為確保配制標(biāo)準(zhǔn)溶液的可靠性、準(zhǔn)確性,實驗室的設(shè)備、環(huán)境設(shè)施均應(yīng)滿足其要求,(應(yīng)有監(jiān)測、控制和記錄環(huán)境條件。特別對灰塵、電磁干擾、放射、溫度、濕度、供電等)。3、具有符合稱量要求器具、應(yīng)有正確稱量的電子分析天平,并通過周期性的檢定,有質(zhì)檢部門檢定的證書。4、要有配制標(biāo)準(zhǔn)溶液的純度高的溶劑(采用雙重蒸餾去離子水、高純濃度的酸、堿或有機(jī)溶液

選擇合適二抗需考慮方面2022/07/25

二抗是指用于靶向結(jié)合一抗的抗體。在多種免疫印跡、ELISA以及免疫熒光等免疫實驗中，二抗經(jīng)常和一抗結(jié)合使用以檢測目標(biāo)蛋白。很多二抗都帶有標(biāo)記物，例如AlexaFluor熒光染料或辣根過氧化物酶（HRP），從而使二抗的信號可以被檢測到。實驗中也可以使用帶有標(biāo)記物的一抗，但是二抗有很多優(yōu)點。無論是使用哪種一抗進(jìn)行檢測，使用二抗可便于更換不同的標(biāo)記物。例如，同樣的一抗可以與HRP標(biāo)記二抗一起用于免疫印跡，也可以與另一種AlexaFluor488熒光標(biāo)記二抗一起用于免疫熒光實驗。另外，二抗結(jié)合在抗原位置