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ELISA實驗檢測方法的優缺點2023/11/20

ELISA實驗檢測方法的優缺點：1、直接法（directELISA）將抗原直接固定在固相載體上，參加酶符號的一級抗體，即可測定抗原總量，此一級抗體的特異性非常重要。優勢：操作手續簡略，因無須運用二抗可防止交互反響。缺陷：實驗中的一抗都得用酶符號，但不是每種抗體都適合做符號，費用相對進步。2.間接法（indirectELISA）此測定辦法與直接法相似，不一樣在于一級抗體沒有酶符號，改用酶符號的二級抗體去辨識一級抗體來測定抗原量。優勢：二抗能夠加強信號，并且有多種挑選能做不一樣的測定剖析。不加酶符號

傳代培養操作步驟及注意事項2023/11/13

原代細胞培養成功以后，需要進行分離培養，否則細胞會因生存空間不足或密度過大，營養障礙，影響細胞生長。細胞由原培養瓶內分離稀釋后傳到新的培養瓶中培養的過程稱之為傳代培養。傳代細胞允許培養的細胞擴增(形成細胞株)，可以進行細胞克隆，易于保存，但可能喪失一些特殊的細胞和分化特征。傳代細胞形成細胞株的最大利處在于提供了大量持久的實驗材料，便于實驗。細胞株也是可以購買的。1、操作步驟：（1）、吸掉或倒掉培養瓶內舊培養液。（2）、向瓶內加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆蓋培養瓶底為宜。（3）、置37

微生物培養基的操作步驟與注意事項2023/11/06

培養基(culturemedium)是人工配制的，適合微生物生長、分離鑒別的營養基礎。一般基礎培養基中古有蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸粉、氯化鈉、瓊脂等基本營養物質。微生物培養基應用范圍很廣。例如，無菌試驗培養基可檢查藥品、生物制品是否污染細菌，它直接關系到人民用藥安全；在臨床及食品衛生檢驗中常用選擇、鑒別培養基，此類培養基中根據用途不同，需要加入抑菌劑、指示劑、血液、糖等試劑，以利于特定細菌的分離與鑒別，需要使細菌大量生長、繁殖的各類培養基；病毒培養及疫苗中則需用組織細胞培養液，主要成分為多種氨基

ELISA實驗出現“花板”結果原因與解決辦法2023/10/30

酶聯免疫吸附試驗(EnzymeLinkedImmunoSorbentAssay，ELISA)原理是抗原或抗體的固相化及抗原抗體的酶標記。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，由此進行定性或定量分析。該實驗因其靈敏度較高，特異性較好，操作較簡單，可大批量操作而廣泛應用于多種傳染性疾病的篩查工作中。然而，“花板”現象的出現，往往會給實驗者判讀結果帶來麻煩。所謂“花板”，就是空白、陰性、陽性對照及室內質控孔結果正常，而標本孔的OD值卻偏高，弱陽性結果較多。

針對?PCR擴增無目的條帶現象分析2023/10/23

聚合酶鏈反應(PCR)技術是在體外進行的由引物介導的酶促DNA擴增反應。PCR反應的關鍵環節：①模板核酸的制備；②引物的質量與特異性；③酶的質量；④PCR條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析檢測。1、模板a．模板質量不佳，含有雜蛋白質，特別是染色體中的組蛋白；模板核酸變性不夠；提取制備模板時丟失過多，或吸入酚。建議選擇質量可靠的提取試劑，重新提取高純度基因組模板；若模板為cDNA，需要檢查逆轉錄反應及其所用RNA的純度及完整度。b．模板中含有尿嘧啶抑制高保真酶的活性，或含有Taq酶抑制劑。c．

有關RT-PCR詳細闡述2023/10/16

RT-PCR是指將逆轉錄(ReverseTranscription；RT)反應和PCR(PolymeraseChainReaction)反應組合在一起的方法。1、RT-PCR的原理RT-PCR將以RNA為模板的cDNA合成同PCR結合在一起，提供了一種分析基因表達的快速靈敏的方法。RT-PCR用于對表達信息進行檢測或定量。另外，這項技術還可以用來檢測基因表達差異或不必構建cDNA文庫克隆cDNA。RT-PCR比其他包括Northern印跡、RNase保護分析、原位雜交及S1核酸酶分析在內的RNA

抗原抗體反應的主要四特性解析2023/10/08

抗原抗體反應是指抗原與相應抗體之間所發生的特異性結合反應。這種反應既可在機體內進行，也可以在機體外進行。抗原抗體反應的過程是經過一系列的化學和物理變化，包括抗原抗體特異性結合和非特異性促凝聚兩個階段，以及由親水膠體轉為疏水膠體的變化。抗原抗體反應的特點主要有四性：即特異性、比例性、可逆性，階段性。一、特異性抗原表位與抗體超變區結合的特異性，是兩者在化學結構和空間構型上呈互補關系所決定的。這一特性，是應用于臨床診斷的基礎。但某些天然抗原具有多種抗原表位，與另一物質可能有共同抗原表位，對檢驗結果產生

常用的熒光素特性2023/10/03

熒光素發光原理：熒光實際上是一種發光類型，其中光子最初被吸收，導致原子處于激發狀態單線態。當電子回落到基態時，會發射出較低能量的光子。常用的熒光素特性：1、異硫氰酸熒光素（fluoresceinisothiocyanate，FITC）為黃色或橙黃色結晶粉，吸收光490~495nm，發射光520~530nm，明亮的黃綠色熒光。2、四乙基羅丹明（rhodamine，RIB200）為橘紅色粉末，吸收光570nm，發射光595~600nm，橘紅色熒光。3、四甲基異硫氰酸羅丹明（tetramethylrh

有關抗體和重組蛋白重點解讀2023/09/21

重組蛋白（recombinantprotein）是指應用重組DNA或重組RNA技術而獲得的蛋白質。重組蛋白工程先應用基因克隆或化學合成技術獲得目的基因（geneofinterest，GOI），連接到適合的表達載體，導入到特定的宿主細胞，利用宿主細胞的遺傳系統，表達出有功能的蛋白質分子。抗體的本質是免疫球蛋白（immunoglobulins），指具有抗體（Ab）活性或化學結構，與抗體分子相似的球蛋白。無論是保存還是運輸，請避免反復凍融。反復凍融，冰晶會破壞抗體和重組蛋白的空間結構，導致蛋白變性形成

細胞培養的一般過程科普2023/09/11

細胞培養（cellculture）是指在體外模擬體內環境（無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養條件等），使之生存、生長、繁殖并維持主要結構和功能的一種方法。細胞培養也叫細胞克隆技術，在生物學中的正規名詞為細胞培養技術。細胞培養的一般過程如下：一、準備工作準備工作對開展細胞培養異常重要，工作量也較大，應給予足夠的重視，推備工作中某一環節的疏忽可導致實驗失敗或無法進行。準備工作的內容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無菌室或超凈臺的清潔與消毒，培養箱及其他儀器的檢查與調試。

介紹洗滌ELISA平板的技巧2023/09/08

優化ELISA的重點之一在于洗滌。洗滌步驟可降低未結合抗體所引起的背景信號，從而增加分析的信噪比。每一步之間的洗滌確保只有特異的結合事件被保留，在最后一步產生信號。而不充分的洗滌會導致差異和高背景，從而帶來不理想的結果。下面介紹一些利用自動洗板機來洗滌ELISA平板的技巧。1、洗滌參數：第一個主要的參數是洗滌量。自動洗板機會分配洗滌液。如果你之前遭遇過高背景，那么不要猶豫，將洗滌量調為高，最好是比包被體積更高。太少的洗滌液會讓一部分分析表面洗滌不到，從而明顯增加背景。所有反應孔的洗滌量必須相同。

標準溶液作為基準物質的要求2023/08/28

標準溶液是指已知準確濃度的溶液，它是滴定分析中進行定量計算的依據之一。不論采用何種滴定方法，都離不開標準溶液。因此，正確地配制標準溶液，確定其準確濃度，妥善地貯存標準溶液，都關系到滴定分析結果的準確性。配制標準溶液的直接配制法一般如下：用分析天平準確地稱取一定量的物質，溶于適量水后定量轉入容量瓶中，稀釋至標線，定容并搖勻。根據溶質的質量和容量瓶的體積計算該溶液的準確濃度。能用于直接配制標準溶液的物質，稱為基準物質或基準試劑，它也是用來確定某一溶液準確濃度的標準物質。作為基準物質必須符合下列要求：

培養基滅菌效果取決因素解讀2023/08/21

培養基滅菌，影響因素很多，除了培養基內雜菌的種類和數量，滅菌溫度的高低，時間長短外，還取決于：1.營養成分的保持濕熱滅菌時，微生物被殺死的同時，培養基的營養成分也遭到了一定的破壞，特別是氨基酸和維生素。如在121℃，僅20min，就有59%的賴氨酸和精氨酸及其他堿性氨基酸被破壞，蛋氨酸和色氨酸也有相當數量被破壞。在熱的作用下某些營養成分還可能因受熱而相互之間發生反應，造成培養基中原有營養成分的數量變化，因而影響培養基質量。2.微生物的耐熱性細菌芽孢的熱阻較大，滅菌所需要的時間取決于把細菌芽孢減少

細胞因子生物學特點及功能2023/08/16

細胞因子（CK）是由活化免疫細胞和非免疫細胞（如某些基質細胞）合成分泌的能調節細胞生理功能、參與免疫應答和介導炎癥反應等多種生物學效應的小分子多肽或糖蛋白，是不同于免疫球蛋白和補體的又一類免疫分子。根據來源zui初將活化淋巴細胞產生的細胞因子稱為淋巴因子（LK），將單核-吞噬細胞產生的細胞因子稱為單核因子（MK）。目前根據功能，細胞因子大致分為以下六類：白細胞介素；干擾素（IFN）；腫瘤壞死因子（TNF）；集落刺激因子（CSF）；生長因子和趨化因子。細胞因子生物學功能：1.介導和調節免疫應答2.

熒光定量PCR中各個環節的對照2023/08/07

對照的目的是對檢測的各個環節進行監控，因此我們按照檢測的流程對對照進行梳理。常規熒光定量PCR的流程是：樣品采集-運輸-樣品處理-核酸提取-反轉錄（RNA病毒）-擴增-結果讀取。下面看看各個環節都可以使用哪些對照？1.陽性對照和陰性對照陽性對照和陰性對照是指在相同的處理條件下，比如一份已知的感染樣品和一份已知的未感染樣品，都進行了提取和擴增最終獲得了陽性結果和陰性結果。陰陽性對照強調處理過程與樣品一致，并且有明確的預期結果。2.擴增對照我們通常說的陽性對照和陰性對照指的是擴增試劑盒中附帶的不需要

血清使用實驗人必看注意事項2023/08/01

細胞培養液中添加的血清有牛血清、馬血清、人血清等，其中牛血清是zui常用的血清，分為胎牛血清和新生小牛血清。胎牛血清是從母牛破腹取出的胎牛中分離出的血清，價格昂貴。新生小牛血清是從剛出生的尚未哺乳的小牛中分離出來的血清，如廠家能做到這一點，新生小牛血清的質量與胎牛血清的質量相差不大。如小牛出生后已哺乳，從這種小牛中取出的血清中可能含有較多的生物活性物質，其質量明顯不如前兩種。血清的質量，種類及使用的濃度都有可能影響細胞的生長，而不同批次的血清支持細胞生長的能力也不同，尤其是對克隆細胞的生長，某些

胎牛血清和小牛血清不同表現2023/07/24

小牛血清(或新生牛血清)是從出生2周左右牛齡的小牛中獲得的，是一種經濟有效的胎牛血清替代品。血清通常用作細胞生長的添加物，擁有多種功能和用途，如：富含大分子蛋白，低分子量的營養素，作為氨基酸、碳水化合物、維生素的額外來源;提高介質的緩沖能力;可結合或中和有毒成分;減少細胞氧化應激，減少細胞凋亡;提供促進生長的因子，有助細胞適應培養環境。小牛血清提供許多與胎牛血清相同的營養物質，蛋白質和免疫球蛋白水平稍高，但生長因子較少，適合培養容易培養或對培養環境要求低的細胞。胎牛血清是應用廣泛的細胞培養添加物

細胞轉染實驗中常見問題探究2023/07/17

細胞轉染常見問題一、轉染效率低影響轉染效率因素很多，主要因素有細胞培養物、血清、載體構建、DNA質量以及轉染技術等。1.沒有使用優化條件：優化陽離子脂質體試劑和DNA的量。2.DNA-陽離子脂質體試劑復合物在存在血清條件下形成。3.存在抑制劑：不要在用于制備DNA-陽離子脂質體復合物的培養基中使用抗生素，EDTA，檸檬酸鹽，磷酸鹽，RPMI，硫酸軟骨素。透明質酸，硫酸葡聚糖或其他硫酸蛋白多糖。4.不恰當的細胞密度：轉染時融合度應為70%-90%。5.陽離子脂質體試劑凍結：不要使用凍結的或儲存溫度

關于?血清熱滅活相關事項2023/07/10

血清熱滅活的步驟在1970年代就已建立，至今成為很多實驗室的常規血清前處理步驟；但許多先前認為必須熱滅活的原因，卻早已經不再成立。至少70%的研究者對血清的滅活僅僅是因為遵照常規操作，或者說認為是理所當然的。常規滅活建議的溫度在45℃到62℃之間，而時間則從15分鐘到60分鐘不等，其中zui常用的手法是56℃熱處理30分鐘。隨著血清采集、處理、加工工藝的提高，許多早先認為是熱滅活的原因已經不再成立，只有少數對血清進行熱滅活的研究者在實驗中證實了這一步驟的有效性和必要性。一、熱敏補體與熱滅活熱滅活

揭秘ELISA顯色淡原因及解決方案2023/07/03

ELISA（enzymelinkedimmunosorbentassay）也就是酶聯免疫吸附測定，是指將可溶性的抗原或抗體結合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體特異性結合，進行免疫反應的定性和定量檢測方法。下面揭秘ELISA顯色淡的八大原因及解決方案。原因一：試劑盒在運輸途中時間太長，溫度太高。解決方案：盡量縮短運輸時間，夏季應放冰塊降溫。原因二：試劑盒未充分平衡。解決方案：試劑盒從2～8℃冰箱取出后打開盒蓋，于室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫（約25℃）。原因三：培養箱溫度不足