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熒光定量PCR(qPCR)應用范圍領域有哪些?2025/07/08
熒光定量PCR(Real-timePCR),是指在PCR擴增反應體系中加入熒光基團,通過對擴增反應中每一個循環(huán)產(chǎn)物熒光信號的實時檢測,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。熒光定量PCR(qPCR)作為一種強大的核酸定量分析工具,其應用范圍廣泛,涵蓋了多個領域:1.醫(yī)學診斷:1)病原體檢測:能夠快速、準確地檢測病毒、細菌、真菌等病原體的核酸,如淋球菌、沙眼衣原體、人類乳頭瘤病毒、流感病毒等。2)基因表達分析:用于監(jiān)測特定基因在不同條件下的表達水平,如藥物處理、物理處理、化學處理等的影響。
化學試劑變質的原因歸納2025/07/03
化學試劑在貯存過程中是否會發(fā)生變質,取決于內外兩個方面的因素,內因是試劑本身化學結構所決定的理化性質;外因則是試劑所處的環(huán)境條件。要做到合理保管,一要了解試劑結構與性質間關系,二要創(chuàng)造適應試劑貯存的外部環(huán)境。環(huán)境主要是指貯存的溫度、光照和介質。介質一般是指空氣和混有的雜質。貯存室里除空氣中含有的氧、二氧化碳和水蒸氣以外,還往往含有存放的各種揮發(fā)性試劑擴散到空氣中的蒸氣,常見的有氯化氫、硝酸、硫化氫、二氧化硫、溴、碘、乙烯、甲醛等蒸氣;另外還有飄混在空氣中的塵埃,其中有無機物也有有機物及各種微生物
ELISA酶聯(lián)吸附試驗內源性干擾物質講解2025/06/24
ELISA(enzymelinkedimmunosorbentassay)即酶聯(lián)吸附試驗,是一種常用的固相酶免疫測定方法。血清是常用的ELISA試劑盒試驗常用的標本,血漿一般可視為與血清同等的標本,標本引起的假陽性和假陰性結果主要內源性干擾物質具體有哪些方面?有人認為大約40%的人血清標本中含有非特異性干擾物質,可以不同程度影響檢測結果。常見的干擾物質有:類風濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導的抗鼠Ig(s)抗體、交叉反應物質和其它物質等。1、類風濕因子人血清中IgM、IgG
ELISA實驗洗板次數(shù)的指導確定原則2025/06/17
在ELISA實驗中,洗板次數(shù)是一個關鍵參數(shù),它直接影響到實驗結果的特異性和準確性。通常,洗板的目的是清除未結合的抗原或抗體,減少背景信號,同時保持特異性結合物的穩(wěn)定。以下是一些關于洗板次數(shù)的指導原則:1.常規(guī)推薦:大多數(shù)ELISA試劑盒說明書會建議一個標準的洗板次數(shù),通常是3到5次。這是基于實驗驗證得出的平衡點,既能有效去除未結合物,又不會過度清洗掉特異性結合物。2.背景與特異性平衡:如果背景信號過高,可能需要增加洗板次數(shù),因為更多的洗板可以減少非特異性結合。然而,如果洗板次數(shù)過多,可能會導致信
抗體非特異性結合避免策略2025/06/10
抗體非特異性結合是指抗體在與特定抗原結合時,還可能與無關的抗原或細胞表面的其他分子結合的現(xiàn)象。這種非特異性結合會干擾實驗結果,導致假陽性信號。在流式細胞術實驗中,由于多數(shù)免疫細胞表面都表達Fc受體(FcR),抗體的Fc端容易與這些受體結合,產(chǎn)生非特異性背景信號。為避免這種情況,實驗前通常會使用FcR阻斷劑,如CD16/CD32抗體,來封閉FcR,減少非特異性結合。此外,在進行抗體染色時,確保抗體與抗原的最佳結合條件,使用適當?shù)淖钄鄤┖颓逑床襟E,也是減少非特異性結合的關鍵措施。抗體避免非特異性結合
原代細胞與傳代細胞在基因表達方面差異匯總2025/06/04
原代細胞和傳代細胞在基因表達方面存在顯著差異,這主要體現(xiàn)在幾個關鍵點上:1.基因表達模式的保持性:原代細胞:由于它們直接從生物體中分離出來,因此在基因表達模式上更接近體內情況。它們保留了原始的基因組結構和表達譜,能夠反映細胞在體內的真實狀態(tài)。傳代細胞:隨著傳代次數(shù)的增加,細胞可能會發(fā)生基因表達模式的變化。長期培養(yǎng)可能導致基因表達的不穩(wěn)定性和突變,尤其是在50代之后,細胞可能會出現(xiàn)癌變特征,進一步改變其基因表達譜。2.基因表達的可變性:原代細胞:不同個體或組織來源的原代細胞之間存在基因表達的差異,
微生物酯酶的分離純化方法步驟2025/05/27
微生物酯酶的常規(guī)分離純化方法:1.超濾超濾是利用壓力或離心力,使小分子溶質和溶劑穿過一定孔徑的特制的薄膜而使大分子溶質不能透過,留在膜的一邊,從而使大分子物質得到了部分的純化,根據(jù)蛋白質分子大小的不同而選擇不同分子量的膜上,以達到濃縮和脫鹽的目的,從而使蛋白質得到分離。2.鹽析法鹽析一般是指溶液中加入無機鹽類,蛋白質在低鹽濃度下的溶解度隨著鹽溶液濃度升高而增加,當鹽濃度不斷上升時,蛋白質的溶解度又以不同程度下降并先后析出,此稱鹽析,從而達到分離純化的效果。一般粗抽提物常用該法進行粗分。3.有機溶
BCA 蛋白定量檢測試劑盒測蛋白濃度過程2025/05/19
蛋白定量的方法有很多種,應用較多的主要有兩種:BCA蛋白定量檢測法和Bradford蛋白定量檢測法,市售的蛋白定量試劑盒也多基于上述兩種檢測方法而開發(fā)的。兩種方法均需配制蛋白標準品,蛋白與定量試劑經(jīng)過一定時間的反應(BCA法反應為37℃、20-30min,Bradford法反應一般為37℃,5min),酶標儀讀取樣品的OD值,繪制的蛋白標準曲線,依據(jù)標準曲線計算WB蛋白的濃度。蛋白定量:取適量上述步驟中未變性的總蛋白溶液,用BCA蛋白定量檢測試劑盒(G2026-200T;G2026-1000T)
大鼠ELISA檢測試劑盒特點及注意點2025/05/14
大鼠ELISA檢測試劑盒是一種用于定量檢測大鼠樣本中特定蛋白或抗體的免疫學檢測試劑盒。這類試劑盒通常采用雙抗體夾心法,通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)來檢測和定量目標蛋白或抗體。例如,有專門用于檢測大鼠總谷胱甘肽、Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽、白介素17(IL17)、抗體效價、胰島素等的ELISA試劑盒。大鼠ELISA試劑盒的特點:1.高靈敏度和特異性:設計用于檢測特定的靶標蛋白或抗體,具有高度的靈敏度和特異性。2.操作簡便:試劑盒通常包含所有必要的試劑和組件,操作流程簡單,適合實驗室常規(guī)使用。3.
熒光定量PCR實驗操作詳細說明2025/05/07
PCR(PolymeraseChainReaction,聚合酶鏈反應)是一種在體外模擬DNA復制過程的技術。通過設計特異性引物,PCR可以擴增目標DNA片段,使其在短時間內達到可檢測的水平。PCR主要包括三個階段:變性、退火和延伸。熒光定量PCR原理:熒光定量PCR在傳統(tǒng)PCR基礎上,引入了熒光標記技術。根據(jù)熒光標記物的不同,熒光定量PCR可分為兩種:染料法和探針法。(1)染料法染料法利用一種能與雙鏈DNA特異性結合的熒光染料,如SYBRGreenI。在PCR反應體系中,染料與雙鏈DNA結合后,
標準曲線測定:標準溶液濃度確定過程2025/04/28
用于測定標準曲線的標準溶液濃度應通過合理的設置和精確的配制方法來確定,以確保實驗數(shù)據(jù)的準確性和可靠性。在化學分析中,標準曲線是一種重要的定量工具,它通過已知濃度的標準物質與相應的儀器響應值之間的關系來定量未知樣品。首先,需要考慮所測組分的濃度范圍和檢測器的靈敏度。標準曲線的濃度點必須覆蓋被測量的范圍,并且每個點的濃度要在儀器的靈敏范圍內。通常,第一個濃度點應為檢出限的5至10倍,之后按一定順序遞增,最高濃度是zui低濃度的10至20倍為宜。其次,要進行正確的標準溶液配制。常用的方法有直接配制法和
ELISA檢測方法的共同過程盤點2025/04/21
ELISA檢測是一種免疫檢測方法,通常用于測量生物樣品中的抗體或抗原,包括蛋白質或糖蛋白。像其他免疫檢測法一樣,它們依靠抗體與目標的結合來促進檢測。通常情況下,ELISA檢測是在96孔板中進行的,這種形式使其適合于一次篩選許多樣品。血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液、細胞裂解液、唾液、組織裂解液和尿液都是用于這些檢測的常見樣品類型,但理論上大多數(shù)液體樣品類型都可以使用。然而,重要的是要考慮到一些樣品類型可能包括抑制性因素,如共享相似抗原表位的緩沖液成分或可能損害目標或檢測成分的蛋白酶等因素,這些因素可能
標準物質管理使用說明2025/04/15
標準物質一般是指一種確定了具有一個或多個足夠均勻的特性值的物質或材料,作為分析測量行業(yè)中的“量具',在校準測量儀器和裝置、評價測量分析方法、測量物質或材料特性值和考核分析人員的操作技術水平,以及在過程中產(chǎn)品的質量控制等領域起著*的作用。企業(yè)或實驗室應當建立標準物質的科學管理制度,以保證標準物質全流程的可追溯性、使信息傳遞正確有效,保證流轉過程數(shù)量和貯存準確、讓使用更規(guī)范與合理。一、標準物質來源合法,可追溯對標準物質的原材料選擇、制備方法、標定方法、標定結果、定值準確性、量值溯源、穩(wěn)定性等過程進行
植物根系活力檢測試劑盒(TTC法)實驗操作步驟2025/04/01
植物根系是活躍的吸收器官和合成器官,根的生長情況和活力水平直接影響地上部的生長和營養(yǎng)狀況及產(chǎn)量水平。本實驗練習測定根系活力的方法,為植物營養(yǎng)研究提供依據(jù)。氯化三苯基四氮唑(TTC)是標準氧化電位為80mV的氧化還原色素,溶于水中成為無色溶液,但還原后即生成紅色而不溶于水的三苯甲瓚,生成的三苯甲瓚比較穩(wěn)定,不會被空氣中的氧自動氧化,所以TTC被廣泛地用作酶試驗的氫受體,植物根系中脫氫酶所引起的TTC還原量能表示脫氫酶活性并作為根系活力的指標。操作步驟:建議正式實驗前選取2個樣本做預測定,了解本批樣
揭秘細胞污染細節(jié)匯集2025/03/24
細胞污染的種類可分成細菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉?jié){菌。主要的污染原因為無菌操作技術不當、操作室環(huán)境不佳、污染之血清和污染之細胞等。嚴格之無菌操作技術、清潔的環(huán)境、與品質良好之細胞來源和培養(yǎng)基配制是減低污染之好方法。細胞受到嚴重污染時,有時即使想盡各種辦法也難以挽回。因此,防止污染,預防是關鍵。只有將預防措施貫穿于整個細胞培養(yǎng)的始終,才能將發(fā)生污染的可能性降到最小程度。一、一般預防細胞污染以下幾方面:1、從物品、用品消毒滅菌著手細胞培養(yǎng)所用物品清洗、消毒要徹di,各種溶液滅菌除菌要仔細,并在取樣檢
蛋白定量BCA法檢測實驗干貨分享2025/03/17
BCA(BicinchoninicAcid)法是一種常用的蛋白定量檢測方法,其原理是利用蛋白質與銅離子在堿性溶液中發(fā)生絡合反應,生成穩(wěn)定的紫紅色復合物,再與標準曲線比較,即可求出待測蛋白的濃度。該方法具有靈敏度高、準確度高、操作簡便、抗干擾能力強等優(yōu)點,廣泛應用于生物化學等領域。實驗步驟:1.試劑準備(1)BCA工作液:將BCA試劑A和B按50:1的比例混合,充分搖勻,備用。(2)標準蛋白溶液:取適量的標準蛋白,用PBS或去離子水溶解,配制成濃度為1mg/mL的標準蛋白溶液。2.蛋白樣品制備(1
PCR實驗出現(xiàn)失敗結果探究2025/03/11
聚合酶鏈式反應(polymerasechainreaction,PCR)模擬體內DNA復制條件,應用DNA聚合酶反應,體外程序化地特異性擴增某一DNA片段的技術。PCR的最大特點,是能將微量的DNA大幅增加。一、模板質量問題:1)模板提取不完整,其中不含你的目的基因,或目的基因含量太低。可以跑個電泳看看提取的DNA,PCR陽性樣品與陰性樣品是否有明顯差別。如果確定是這種問題,可以增加模板量試試,但不一定行得通。2)模板里面殘留某種試劑成份,可能抑制Taq聚合酶的活性,如果是這種情況,可以用試劑盒
化學試劑穩(wěn)定性判斷遵循原則2025/03/04
化學試劑(chemicalreagent)是進行化學研究、成分分析的相對標準物質,是科技進步的重要條件,廣泛用于物質的合成、分離、定性和定量分析,可以說是化學工作者的眼睛,在工廠、學校、醫(yī)院和研究所的日常工作中,都離不開化學試劑。判斷化學試劑的穩(wěn)定性,可遵循以下幾個原則:1、無機化合物,只要妥善保管,包裝完好無損,可以長期使用。但是,那些容易氧化、容易潮解的物質,在避光、蔭涼、干燥的條件下,只能短時間(1~5年)內保存,具體要看包裝和儲存條件是否合乎規(guī)定。2、有機小分子量化合物一般揮發(fā)性較強,包
血清、血漿及全血的用途作用2025/02/25
血液生化指標的分析及激素等含量的測定對臨床判斷、預測藥物毒性作用及疾病的發(fā)生發(fā)展有著重要的意義。那么,血清、血漿、全血有何區(qū)別,各自的用途是什么呢?1、常見的血液生化指標與激素常見的血液生化指標:血糖(GLU)、谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、肌酐(Crc)、尿素氮(BUN)、膽固醇(CHO)、堿性磷酸酶(ALP)、總膽紅素(TBIL)、鎂、鈣等。常見的激素:睪酮(T)、孕酮(P)、雌二醇(E2)、三碘甲腺原氨酸(T3)、甲狀腺素(T4)、游離三碘甲
聚合酶鏈式反應(PCR)影響因素介紹2025/02/18
PCR(PolymeraseChainReaction)-聚合酶鏈式反應,可以選擇性擴增一段DNA序列。其基本步驟是,首先將待擴增的模板DNA變性使之成為單鏈,DNA樣品中,特異性的引物能夠與其互補的序列雜交,在dNTPs和Taq酶存在時,就可以合成模板DNA的互補鏈,反應完成后,將反應混合物加熱使DNA雙鏈變性,溫度下降后,過量的引物又可以開始第二輪的合成反應。這種延伸-變性-退火-延伸的循環(huán)可以重復多次,使所需要的DNA片段得到特異性的擴增。1.變性:加熱使模板DNA在高溫下(94℃)變性,
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