ELISA實驗過程中除了選擇靈敏度高的ELISA試劑盒之外,處理樣本的方法也是不一樣的。ELISA實驗中常見液體類樣本有血清、血漿、尿液、細胞上清、腦脊液等幾種。
一、ELISA樣本的保存
正常情況下,再5天內測定的血清標本可放置于4°C,標本再冰箱中保存時間過長會導致血清IgG聚合,是間接法的試劑本底加深,超過一周測定的需-20°C保存,凍結血清溶解后,蛋白質局部濃縮,分不均,應充分混勻并避免產生氣泡,
渾濁或有沉淀的血清標本應先離心或過濾,澄清后再檢測。
測抗體的血清的標本如需保存作多次檢測,以少量分裝冰存,
保存血清只采集是就應注意無菌操作,也可加入適當的防腐劑,抗凝不wan全的標本因纖維蛋白元的干擾而造成假陽性,建議勁量不使用抗凝血尤其是肝素抗凝劑。
二、ELISA樣本處理
1、血清:室溫血液凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。
2.血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清,如有沉淀形成,應再次離心
3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4.細胞培養上清:檢測分泌性的成分時,用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)仔細收集上清,檢測細胞內的成分時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右,通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成分。
5.組織標本:切割標本后,稱取重量,加入一定量的PBS,PH7.4,用液氮迅速冷凍保存備用,標本融化后任然保持2-8°C的溫度,加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清,分裝后一份待檢測,其余冷凍備用,
6.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行試驗,若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20°C保存,單應避免反復凍融。
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