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PCR反應四個特點2022/07/18

PCR(聚合酶鏈式反應)是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫(經常是60°C左右)時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結合，再調溫度至DNA聚合酶最適反應溫度(72°C左右)，DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈?；诰酆厦傅腜CR儀實際就是一個溫控設備，能在變性溫度，復性溫度，延伸溫度之間很好地進行控制。PCR反應特點有下列四個：1、特異性強PCR反應的特異性決定因素為：①引物與模板DNA特異正確的結合；②堿基配對原則；③TaqDNA聚合酶合成反應的忠實性；

詳解PCR反應溫度條件2022/07/12

基于PCR原理三步驟而設置變性-退火-延伸三個溫度點。在標準反應中采用三溫度點法，雙鏈DNA在90～95℃變性，再迅速冷卻至40～60℃，引物退火并結合到靶序列上，然后快速升溫至70～75℃，在TaqDNA聚合酶的作用下，使引物鏈沿模板延伸。對于較短靶基因(長度為100～300bp時)可采用二溫度點法，除變性溫度外、退火與延伸溫度可合二為一，一般采用94℃變性，65℃左右退火與延伸(此溫度TaqDNA酶仍有較高的催化活性)。1.變性：在第一輪循環前,在94℃下變性5-10min非常重要,它可使模

蒸餾或精餾純化化學試劑方法2022/07/05

蒸餾和精餾主要用于液體、或是加熱可成為液體的化學試劑，特別是用于有機化學試劑的純化。在蒸餾或精餾之前，有時可加入某些化學試劑，與欲純化的化學試劑中的雜質發生化學反應，生成沸點更高（或更低）的物質，在蒸餾或精餾是更容易除去。在蒸餾或精餾時，往往是除去最初餾出的餾分和最后剩下的餾分，兩頭除去的越多，得到的化學試劑純度就越高，但產率越低。下面介紹幾個用蒸餾或精餾方法純化的化學試劑：1.鹽酸的提純：（1）除去一般雜質的鹽酸用三次離子交換水將一級鹽酸按鹽酸：水=7：3的體積比稀釋（或按1：1稀釋，按此比例

細菌鑒定生化反應常見七種2022/06/21

細菌鑒定生化反應常見七種：1、糖(醇)類發酵試驗不同的細菌含有發酵不同糖(醇)的酶,因而發酵糖(醇)的能力各不相同.其產生的代謝產物亦不相同,如有的產酸產氣,有的產酸不產氣.酸的產生可利用指示劑來判定.在配制培養基時預先加入溟甲酚紫［PHS.2(黃色)一6.8(紫色)],當發酵產酸時,可使培養基由紫色變為黃色.氣體產生可由發酵管中倒置的杜氏小管中有無氣泡來證明.例如：甘露醇發酵試驗。2、甲基紅(Methylred)試驗(該試驗簡稱MR試驗)很多細菌,如大腸桿菌等分解葡萄糖產生丙酮酸,丙酮酸再被分

病毒轉化的B細胞保存防護方法2022/06/14

病毒轉化的B細胞保存防護方法：一、防蛻變：1．防氧化：亞硫酸鈉、硫酸亞鐵、硫代硫酸鈉均易被氧化，瓶口應涂臘。2．防碳酸化：硅酸鈉、過氧化鈉、苛性堿均易吸收二氧化碳，應該涂臘。3．防風化：晶體碳酸鈉、晶體硫酸銅應進行臘封，存放在地下室中。4．防分解：碳酸氫銨、濃硝酸受熱易分解，涂臘后，存放在地下室中。5．活性炭能吸附多種氣體而蛻變，（木炭亦同），應放在干燥器中。6．黃磷遇空氣易自燃，永遠保存水中，每15天查水一次：磷試劑瓶中加水、置于有水水糟中，上加鐘罩關閉。7．鉀、鈉保存在火油中。8．硫酸亞鐵溶

貼壁細胞與懸浮細胞細胞處理說明2022/06/07

以下細胞處理方法及細胞說明書僅供參考，具體操作還需要根據到貨時細胞密度，細胞生長狀態等具體情況，酌情處理，如需要更詳細技術指導。一．貼壁細胞客戶接收到細胞，用75%的酒精消毒（建議配制75%酒精的水是滅菌過的）培養瓶外部。肉眼觀察細胞培養基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收到時的培養瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。顯微鏡觀察細胞，當細胞融匯至80%左右（可以傳代的情況下），細胞應該在37度培養箱預溫1-2h后再做處理。如未達到細胞傳代密度

細菌數量的測定的幾種方法2022/05/31

1、顏色改變單位法（colourchangeunit,簡稱CCU）這種方法通常用于很小，用一般的比濁法無法計數的微生物，比如支原體等，因為支原體的液體培養物是完-全透明的，呈現為清亮透明紅色，因此無法用比濁法來計數，由于支原體固體培養很困難，用cfu法也不容易計數，因此需要用特殊的計數方法，即CCU法。它是以微生物在培養基中的代謝活力為指標，來計數微生物的相對含量的，下面以解脲脲原體為例，簡單介紹其操作：（1）取12只無菌試管，每一管裝1.8ml解脲脲原體培養基。（2）在第1管加入0.2ml待測

淺談LAMP試劑盒技術優勢特點2022/05/23

環介導等溫擴增技術（Loop-MediatedIsothermalAmplification，LAMP）是一種新型的核酸擴增技術。反應的過程主要分為循環擴增反應起始物的形成和循環擴增反應。其基本原理是采用4/6條特異引物和具有鏈置換功能的DNA聚合酶，在65℃左右對核酸進行等溫擴增。目前，該技術已經應用于人類及動植物細菌、真菌、寄生蟲、病毒等病原體的快速檢測。LAMP技術具有下面的優勢特點：1）在恒溫的條件下實現核酸的擴增，不需要熱循環儀；2）特異性高，采用4/6條特異引物識別目的基因上的6/8

免疫學那些名詞解釋你知道嗎？2022/05/18

免疫學名詞解析：抗體：是B淋巴細胞接受抗原激活后增殖分化為漿細胞所合成分泌的一類能與相應抗原特異性結合的、具有免疫功能的球蛋白。補體：補體是一種血清蛋白質，存在于人和脊椎動物血清及組織液中，不耐熱，活化后具有酶活性、可介導免疫應答和炎癥反應。可被抗原-抗體復合物或微生物所激活，導致病原微生物裂解或被吞噬?？赏ㄟ^三條既獨立又交叉的途徑被激活，即經典途徑、旁路途徑和凝集素途徑。CK：細胞因子是由機體多種細胞分泌的小分子蛋白質，通過結合細胞表面的相應受體發揮生物學作用。MHC復合體：主要組織相容復合體

解析有關ELISA試劑盒實驗避光2022/05/09

ELISA試劑盒注意避光反應的原因其實這個主要是看顯色的時候用的是什么底物了，OPD的話要避光，因為這種底物受光照后會自行變色，如果用TMB底物的話，就沒這么嚴格了，其他的步驟中像抗原綁定、洗滌之類也都不用避光的，只有在做完二抗洗滌完上酶顯色底物的時候。因為大部分的底物對光敏感的，見光會分解，所以要求避光操作。當顯色完成后（顯色時間是比較短的，需要預先摸索好）加入顯色終止液后溶液顏色會在幾個禮拜之內保持穩定，也不用再避光了。其他反應步驟加蓋封板膜的作用不是避光，而是防止反應過程中有異物落入板孔，

細胞轉染實驗常用步驟2022/05/05

細胞轉染實驗常用步驟:1.轉染試劑的準備①將400ul去核酸酶水加入管中，震蕩10秒鐘，溶解脂狀物。②震蕩后將試劑放在-20攝氏度保存，使用前還需震蕩。2.選擇合適的混合比例(1:1-1:2/脂質體體積:DNA質量)來轉染細胞。在一個轉染管中加入合適體積的無血清培養基。加入合適質量的MyoD或者EGFP的DNA，震蕩后在加入合適體積的轉染試劑，再次震蕩。3.將混合液在室溫放置10―15分鐘。4.吸去培養板中的培養基，用PBS或者無血清培養基清洗一次。5.加入混合液，將細胞放回培養箱中培養一個小時

細胞生長緩慢可能原因及解決方法2022/04/24

動物細胞培養是生物學基礎實驗中的基礎，養不好細胞，后續的實驗都難以開展。而細胞培養中也時常會有各種狀況發生，例如細胞生長緩慢?，F了解細胞生長緩慢可能原因及解決方法?？赡茉颍号囵B液及培養方法有誤；更換不同培養液或血清也可能導致生長緩慢。培養液中一些細胞生長必須成分如生長因子耗盡或缺乏。培養物中有少量細菌或真菌污染；接種細胞起始濃度太低；細胞老化；支原體污染。解決方法：檢查培養液和培養方法是否正確，比較新培養液與原培養液成分，讓細胞逐漸適應新培養液；換入新鮮配置培養液，或補加生長因子；用無抗生素培

細胞凍存和復蘇操作過程注意事項2022/04/19

那么在細胞凍存和復蘇實際操作過程中應注意哪些事項呢？1、凍存和復蘇最好用新配制的培養液。2、DMSO應過濾除菌，甘油用高壓消毒。3、細胞懸液分裝凍存時要迅速，均勻。安瓿封口后先放入0.05‰美藍溶液中，使冷凍保護劑分布均衡，且可檢出有滲漏的壞安瓿。安瓿上貼上標簽，作好記錄，包括細胞的種屬、來源、代數、凍存日期、數量、凍存位置、備注等。4、細胞降溫應逐步進行，先以每分鐘降1～3℃的速度降至-30℃，再加速以15～30℃/分鐘降至-150℃，隨即迅速轉入液氮。5、復蘇時，取出后立即放入37℃水浴中，

支原體污染的檢測及鑒定方法2022/04/13

支原體污染的檢測及鑒定方法：1、分離培養法支原體的病原學檢測主要是從被污染的細胞、雞胚中分離培養出支原體來確定，分離培養法是檢測支原體污染中最為可靠準確的方法。但是支原體對環境的影響敏感，容易被滅活，而且分離培養操作相對繁瑣，所需時間較長，因此只能夠對支原體污染進行定性觀察。分離培養法在常規的支原體檢測中多用于輔助其它檢測方法。2、DNA熒光染色法DNA熒光染色法較分離培養法縮短了檢測周期，主要用于細胞培養中污染支原體的檢測。DNA熒光染色法正是利用熒光染色劑雙苯咪唑（Bisbenzimidzo

分享?菌種使用注意事項2022/04/07

菌種是用于發酵過程作為活細胞催化劑的微生物，包括細菌、放線菌、酵母菌和霉菌四大類。來源于自然界大量的微生物，從中經分離并篩選出有用菌種，再加以改良，貯存待用于。菌種使用注意事項：1、復蘇質控菌種前應準備適于該菌種生長的培養基和培養設備，所有操作均應在符合生物安全保護及無菌條件下進行。2、啟開質控菌種前，用75%酒精棉消毒西林瓶表面。在無菌條件下，按鋁蓋上的箭頭方向打開塑蓋，撕開鋁蓋，打開西林瓶膠塞，加入復蘇液(購買菌株包裝中提供)，將凍干菌種(干粉)制成懸浮液，然后用無菌滴管或移液器吸取適量，移

有關原代組織細胞利用酶常用解離方法2022/03/29

人或動物體內(或胚胎組織)由于多種細胞結合緊密，不利于各個細胞在體外培養中生長繁殖，必須將現有的組織塊充分散開，使細胞解離出來。從原代組織上獲取單個細胞懸液的常用方法是利用酶的解聚作用。盡量縮短用酶處理細胞的時間，以獲得高的存活率。現就來一起了解如何解離原代組織細胞。一、胰酶：1.先去除無關組織，然后用滅菌的解剖刀或剪刀將組織切成3-4mm大小碎塊。通過在不含鈣鎂的平衡鹽溶液進行重懸來清洗組織碎塊。待組織碎塊沉降后去掉上清液。重復清洗2-3次。2.將裝有組織碎塊的容器置于冰上，去掉所有上清液。在

介紹實驗室常見的抗凝劑2022/03/23

實驗室常用抗凝劑的選擇有以下幾種，也是事業單位考試中最常出現的幾個抗凝劑。一、枸櫞酸鹽主要為枸櫞酸三鈉，能與血液中鈣離子結合形成螯合物，從而阻止血液凝固。枸櫞酸鈉與血液的抗凝比例是1∶9或者1∶4，一般用于凝血和紅細胞沉降率的檢查。因其毒性小，也是輸血保養液的成分之一。二、草酸鹽常用的有草酸鈉、草酸鉀和草酸銨，草酸根與血液的鈣離子形成草酸鈣沉淀使鈣離子失去凝血作用而阻止凝血。此種抗凝劑溶解度大，抗凝作用強。2mg可使1mL血不凝。因草酸鹽與血液中鈣離子結合生成草酸鈣沉淀，可使血細胞形態發生變化，

細胞凍存的注意事項2022/03/15

細胞培養的傳代及日常維持過程中，在培養器具、培養液及各種準備工作方面都需大量的耗費，而且細胞一旦離開活體開始原代培養，它的各種生物特性都將逐漸發生變化并隨著傳代次數的增加和體外環境條件的變化而不斷有新的變化。因此及時進行細胞凍存十分必要。細胞冷凍儲存在-70℃冰箱中可以保存一年之久;細胞儲存在液氮中，溫度達-196℃，理論上儲存時間是無限的。關于細胞凍存的注意事項：1.為保持細胞最大存活率，一般都采用慢凍存融的方法。2.凍存物距液氮面越近溫度越低。標準的低凍速度為－1℃~12℃/分鐘，當溫度下降

干粉培養基原倍液的配制步驟2022/03/07

干粉培養基原倍液的配制1、配制過濾除菌的細胞培養基2、閱讀培養基使用說明，確定需要添加何種添加劑（如NaHCO3、L-谷氨酰胺、丙酮酸鈉、HEPES等）。3、根據所需將培養基全部倒入一容器中，用少量注射用水（20℃～30℃）將袋內殘留培養基洗下，醫學教.育網搜集整理并入容器。加注射用水至總體積的95%，輕微攪拌溶解。4、加入規定量的碳酸氫鈉及所要添加的物質。5、輕微攪拌溶解，加注射用水至規定體積。6、用1mol/L氫氧化鈉溶液或1mol/L鹽酸溶液調pH至所需值。7、用0.22μm濾膜正壓過濾除

生長因子受體結合蛋白2抗體實驗原理2022/03/01

實驗原理:1、特異性結合抗原：抗體本身不能直接溶解或殺傷帶有特異抗原的靶細胞，通常需要補體或吞噬細胞等共同發揮效應以清除病原微生物或導致病理損傷。然而，抗體可通過與病毒或毒素的特異性結合，直接發揮中和病毒的作用。2、活補體：IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通過經典途徑激活補體，凝聚的IgA、IgG4和IgE可通過替代途徑激活補體。3、結合細胞：不同類別的免疫球蛋白，可結合不同種的細胞，參與免疫應答。4、可通過胎盤及粘膜：免疫球蛋白G（IgG）能通過胎盤進入胎兒血流中，使胎兒形成自然被動免疫