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選擇合適二抗需考慮方面

來源:上海撫生實業有限公司   2022年07月25日 15:18  

       二抗是指用于靶向結合一抗的抗體。在多種免疫印跡、ELISA以及免疫熒光等免疫實驗中,二抗經常和一抗結合使用以檢測目標蛋白。很多二抗都帶有標記物,例如Alexa Fluor熒光染料或辣根過氧化物酶(HRP),從而使二抗的信號可以被檢測到。

      實驗中也可以使用帶有標記物的一抗,但是二抗有很多優點。無論是使用哪種一抗進行檢測,使用二抗可便于更換不同的標記物。例如,同樣的一抗可以與HRP標記二抗一起用于免疫印跡,也可以與另一種Alexa Fluor 488熒光標記二抗一起用于免疫熒光實驗。

      另外,二抗結合在抗原位置的標記染料比直標一抗要多,從而增強檢測信號。使用二抗可以避免對一抗進行復雜且昂貴的化學標記(偶聯),而且偶聯反應(具有氨基酸特異性)可能干擾一抗對抗原的識別。


      二抗是在其它宿主體內制備的能與一抗或一抗片段結合的抗體,上通常連有酶或熒光素等標簽。由于二抗所具備的優點使得其在免疫學實驗中得以廣泛應用,如WB/ELISA/IHC/IP等。二抗針對某一特定物種的所有抗體均具有特異性,因而使用特定標記的二抗可以免去對每一個一抗進行標記,大大節省了時間和費用;此外,一個一抗分子可以同時結合幾個二抗分子,從而使信號大大增強,提高了實驗靈敏度。

     二抗,廣義上是指專門和一抗進行特異性反應和結合的抗體。檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇,在選擇二抗的時候要綜合考慮一抗的類型及后繼檢測方案的要求,一般來說,選擇合適的二抗需要從以下幾個方面考慮:

1.一抗的種屬來源

根據一抗的物種來源選擇相應的抗該物種的二抗。例如:一抗是小鼠源的單克隆抗體,二抗則選抗小鼠的二抗(山羊抗小鼠或兔抗小鼠等)。

2.一抗的類別亞型

二抗需與一抗的類別或亞類相匹配。這通常是針對單克隆抗體而言。多克隆抗體主要是IgG類免疫球蛋白,因此相應的二抗就是抗IgG抗體。單克隆抗體的類別及亞型通常會在產品說明書中有描述,如果一抗是小鼠IgM,那么相應的二抗就應當是抗IgM。如果單克隆一抗是小鼠IgG的某一亞型(IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3),那么幾乎所有的抗小鼠IgG都可以與之結合,或者你也可以選擇專門針對這一亞型的二抗。此種抗體在雙標記實驗中尤其合適。

3.二抗的藕聯標記

一般來講,藕聯到二抗上的探針主要有酶(辣根過氧化酶HRP)、熒光基團、生物素、金顆粒。選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實驗。WB和ELISA常用的二抗是酶標二抗,而免疫熒光實驗中通常使用熒光基團標記的二抗,而金顆粒標記的二抗則更多的應用于免疫電鏡中。


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