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影響PCR反應結果的各組分綜述2023/06/27

PCR反應體系由反應緩沖液（10×PCRBuffer）、脫氧核苷三磷酸底物（dNTPmix）、耐熱DNA聚合酶（Taq酶）、寡聚核苷酸引物（Primer1，Primer2）、靶序列（DNA模板）五部分組成。各個組份都能影響PCR結果的好壞。1．反應緩沖液：一般隨TaqDNA聚合酶供應。標準緩沖液含：50mMKCl，10mMTris-HCl（pH8.3室溫），1.5mMMgCl2。Mg2+的濃度對反應的特異性及產量有著顯著影響。濃度過高，使反應特異性降低；濃度過低，使產物減少。在各種單核苷酸濃度為

化學實驗室安全注意事項匯總2023/06/05

在實驗室做實驗，一定要注意實驗的安全，畢竟化學藥品大多數都是電郵一定毒性的，一旦出現問題，影響不容小覷，甚至可能會危及生命。一、化學實驗室個人防護措施注意事項：1、眼睛及臉部的防護（1）、全防護眼鏡（眼睛及臉部是實驗室中最易被事故所傷害的部位，因而對他們的保護尤為重要。實驗室內，氖實驗人員必須戴安全防護眼鏡（2）、當化學物質濺入眼睛后，應立即用水徹di沖洗。沖洗時，應將眼皮撐開，小心地用自來水沖洗數分鐘，再用蒸餾水沖，然后去醫務室進行治療。（3）、面部防護用具用于保護臉部和喉部。為了防止可能的爆

PCR引物設計關鍵事項2023/05/29

PCR引物設計需要注意：1、引物長度：一般為15～30個堿基，引物太短會降低擴增特異性。引物過長退火溫度會提高，不利于反應的發生。2、引物序列：設計引物時堿基要隨機分布，避免堿基或核苷酸的重復導致錯誤引發；引物間和引物自身序列也要盡量避免互補，防止形成引物二聚體或發夾結構。3、堿基分布：GC含量一般40-60%，含量過高或過低都不利于進行反應。其含量過低會使引物不穩定；過高會引發非特異性擴增。4、Tm值：引物的Tm值（解鏈溫度）=4（G+C）+2（A+T），盡可能保證上下游引物的Tm值一致，一般

標準物質證書通用包含內容闡述2023/05/24

標準物質證書的內容其實非常多，要詳細看懂標準物質證書，也不是太容易，大致來說包括下面17個方面的內容。1、定值機構的名稱、地址該名稱（常在證書上端以顯著的字體寫出）應當是對證書提供的信息負責的團體或組織的名稱，如定值機構。除名稱之外，還包括通訊地址、電-話，如果可能的話，也包括電子郵件地址。2、文件（證書）的標題應當有清晰明顯的標題，例如，分析證書或測量證書。出具臨時證書的偶然行為會使得同一批次標準物質/標準樣品有一個以上的證書，而可能引起混亂，因此不鼓勵。3、標準物質/標準樣品的名稱標準物質/

描述增加特異性的引物的特點及引物退火溫度2023/05/15

細心地進行引物設計是PCR中最重要的一步。理想的引物對只同目的序列兩側的單一序列而非其他序列退火。設計糟糕的引物可能會同擴增其他的非目的序列。下面的指導描述了一個可以增加特異性的引物所具有的特點：①典型的引物18到24個核苷長。引物需要足夠長，保證序列獨te性，并降低序列存在于非目的序列位點的可能性。但是長度大于24核苷的引物并不意味著更高的特異性。較長的序列可能會與錯誤配對序列雜交，降低了特異性，而且比短序列雜交慢，從而降低了產量。②選擇GC含量為40％到60％或GC含量映像模板GC含量的引物

抗體的分裝與保存闡述2023/05/04

機體在抗原物質刺激下，由B細胞分化成的漿細胞所產生的、可與相應抗原抗體抗原發生特異性結合反應的免疫球蛋白。免疫球蛋白是結構及化學的概念，而抗體是生物學及功能的概念。可以說，所有抗體都是免疫球蛋白，但并非所有免疫球蛋白都是抗體。抗體保存得當與否，直接決定了抗體的活性和使用效果。如果抗體保存得當，大部分抗體活性都可以維持數月甚至數年。1.收到抗體后請在12000rpm離心1-5min，將附著在管壁或蓋內的抗體全部離心下來后再打開管蓋進行分裝和保存！2.對絕大多數抗體來說，保存在-20℃是wan全足夠

ELISA試劑盒配對抗體技能方法2023/04/26

ELISA試劑盒單克隆抗體制備時很多朋友會遇到這樣的問題，即咱們免疫用的蛋白為原核表達蛋白而意圖蛋白是真核蛋白或病毒等，由于沒有規范品咱們做出來的抗體沒有辦法用規范品來驗證是否與其發作反響，終究導致咱們做出的是無用抗體。以下內容為試驗室技能總結的幾種方法，期望對大家有所協助。一、若要檢測的抗原為某種新的病毒ELISA試劑盒辦法：1、很多做出該病毒某個蛋白的單克隆抗體；2、很多收集該病毒疑似感染動物或人血液，用PCR的辦法進一步斷定每份血液是否真的有該病毒存在；3、將你做出的很多抗體中的一個做符號

RT-PCR引物的設計原則把握2023/04/23

1、引物的特異性決定PCR反應特異性。因此引物設計是否合理對于整個實驗有著至關重要的影響。在引物設計時要充分考慮到可能存在的同源序列，同種蛋白的不同亞型，不同的mRNA剪切方式以及可能存在的hnRNA對引物的特異性的影響。盡量選擇覆蓋相連兩個內含子的引物，或者在目的蛋白表達過程中特異存在而在其他亞型中不存在的內含子。2、引物設計原則的把握包括:1、.引物長度:一般為15～30bp，引物太短會影響PCR的特異性，引物太長PCR的最適延伸溫度會超過Taq酶的最適溫度，也影響反應的特異性。2、.堿基分

血清和血漿制備方法2023/04/20

血清和血漿均是不含細胞（包括血小板）等有形成分的血液液體部分，其主要區別是血清不含凝血因子和血小板，血漿則含有凝血因子，它們的制備方法如下：1、血清的制備：獲得的血液不能抗凝，盛于離心管或可以離心的器皿中，靜置或置37℃環境中促其凝固，待血液凝固后，將其平衡后離心（一般為3000rpm，離心5～10min），得到的上清液即為血清，可小心將上清吸出（注意切勿吸出細胞成分），分裝備用。2、血漿制備：在盛血的容器中先加人一定比例的抗凝劑（抗凝劑：血液=1：9，將血液加到一定量后顛倒混勻，離心（離心條件

細胞培養常見的污染源歸納2023/04/10

細胞培養（cellculture)也叫細胞克隆技術，在生物學中的正規名詞為細胞培養技術。細胞培養泛指所有體外培養，其含義是指從動物活體體內取出組織，于模擬體內生理環境等特定的體內條件下，進行孵育培養，使之生存并生長。細胞培養過程很容易受到污染。一、常見的污染源如下：1、細菌：細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀，根據感染細菌的不同，可有不同的外形，培養液一般會渾濁變黃，對細胞生長影響明顯。仔細檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時放氣時間足夠，壓力足夠！尤其是和儲存培養液接觸的移液管等物品，連續

原代細胞和傳代細胞培養主要不同點2023/03/20

一、定義不同：1、原代培養是指由體內取出組織或細胞進行的首ci培養，也叫初代培養。2、傳代培養是指需要將培養物分割成小的部分，重新接種到另外的培養器皿（瓶）內，再進行培養的過程。對單層培養而言，80%匯合或剛匯合的細胞是較理想的傳代階段。二、特點不同：1、原代細胞培養與體內原組織在形態結構和功能活動上相似性大。由于培養的細胞剛剛從活體組織分離出來，故更接近于生物體內的生活狀態。這一方法可為研究生物體細胞的生長、代謝、繁殖提供有力的手段。同時也為以后傳代培養創造條件。2、當原代培養成功以后，隨著培

PCR反應主要五種物質2023/03/13

PCR反應五要素：參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+。1、引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以zui低引物量產生所需要的結果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。2、酶及其濃度目前有兩種TaqDNA聚合酶供應，一種是從棲熱水生桿菌中提純的天然酶，另一種為大腸菌合成的基因工程酶。催化一典型的PCR反應約需酶量2.5U(指總反應體積為100ul時)，濃度過高可引起非特異性擴增，濃度過低則合成產物量減

血清不穩定原因及解決辦法參考2023/03/06

血清，指血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白已被除去的血漿。其主要作用是提供基本營養物質、提供激素和各種生長因子、提供結合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷、對培養中的細胞起到某些保護作用。血清最大的劣勢就是不穩定，不穩定原因如下：1、來源不穩定以胎牛血清為例，懷孕母牛在屠宰前腹部被剖開，取出胎牛，在低溫無菌條件下，刺破胎牛的心臟以獲取血清。就這一條，動物倫理組織就可以把你攔住嘮嘮。另外，牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國家，我國在對牛血

化學試劑儲存應防止事項合集2023/02/28

化學試劑在貯存時常因保管不當而變質。有些試劑容易吸濕而潮解或水解；有的容易跟空氣里的氧氣、二氧化碳或擴散在其中的其他氣體發生反應，還有一些試劑受光照和環境溫度的影響會變質。因此，現根據不同的生物試劑的物理性質和化學性質的不同，常用化學試劑保存注意事項進行以下總結：一、防揮發：1．油封2．水封3．臘封二、防光：1．硝酸銀，濃硝酸及大部份有機藥品應該放在棕色瓶中。2．硝酸鹽存放在地下室中既防熱，又防光、防火還能防震。3．有機試劑櫥窗一律用黑漆涂染。4．實驗室用色布窗簾，內紅外黑雙層。三、防潮：1．過

詳述細胞株和細胞系三個方面不同2023/02/20

生物細胞系和細胞株以傳代代數為區分，以遺傳物質是否改變為標志，細胞株強調細胞培養物中細胞成分單一性，所有的遺傳、生化等特性wan全相同，細胞系不強調純度，但某一類細胞占多數。細胞株和細胞系的區別，一般包括三個方面：概念、形成方法和細胞的延續性。一、概念不同1、細胞株：細胞株（CellStrain）是通過選擇法或克隆形成法從原代培養物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物的培養物稱為細胞株。2、細胞系：細胞系（cellline）指原代細胞培養物經首ci傳代成功后所繁殖的細胞群體。也指可長期連續傳代的培

ELISA實驗中標準曲線分析2023/02/15

標準曲線法也稱為外標法或直接比較法，是一種簡便、快速的定量方法，在ELISA實驗中比較常用的一種分析方法。一、ELISA試劑盒做標準曲線樣品檢測時有幾個問題需要注意1、樣品的濃度等指標是根據標準曲線計算出來的，所以首先要把做標準曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事，否則后面的實驗結果無從談起。2、設置標準曲線樣品的標準濃度范圍要有一個比較大的跨度，并且要能涵蓋你所要檢測實驗樣品的濃度，即樣品的濃度要在標準曲線濃度范圍之內，人ELISA試劑盒包括上限和下限。而對于呈S型的標準曲線，盡量要使實驗樣

?一般ELISA試劑盒組成結構成分2023/01/29

一般ELISA試劑盒組成結構：1、血清：操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。2、血漿：EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。3、細胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4、組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。5、保存：如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆

挑選適合細胞生長的血清幾個方法2023/01/16

血清是一種純天ran培養基，含有細胞生長繁殖所需的多種營養成分，如蛋白質、多肽等，多用于細胞培養、生物制品及診斷試劑的。血清的主要成分是蛋白質，血清的組成成分與含量常常與供血動物性別、年齡、生理條件和營養條件有關。那么，如何挑選適合細胞生長的血清？總結幾點方法如下：1.看產地不同產地的胎牛血清，品質也是相差甚遠。值得注意的是，胎牛血清是動物源生物制品，我國對于動物源制品的進口一直有很嚴格的規定，目前我國批準進口的胎牛血清來源是澳大利亞、新西蘭和烏拉圭，合法正規途徑進口的胎牛血清必須在產品包裝上標

中和抗體ELISA檢測試劑盒實驗步驟2023/01/10

中和抗體ELISA檢測試劑盒利用競爭法ELISA原理，當樣本中存在中和抗體時與刺突RBD蛋白結合，從而阻止了RBD與預包被板底的ACE2蛋白的結合，用于病毒中和抗體的定量檢測。實驗步驟：1.將100ul2ug/mlACE2加入至每孔，4℃孵育過夜；2.第二天，50ul稀釋好的樣本+50ul刺突RBD蛋白混合后，室溫孵育2h；3.包被后，移除孔中的ACE2蛋白，加入稀釋好的封閉液，室溫封閉1h；4.移除孔中的封閉液，用200ulwashbuffer洗滌一次；5.將孵育好的樣本+刺突RBD蛋白混合液

細胞培養基本操作過程2023/01/05

細胞培養技術指的是細胞在體外條件下的生長，在培養的過程中細胞不再形成組織（動物）。培養物是單個細胞或細胞群。細胞在培養時都要生活在人工環境中，由于環境的改變，細胞的移動或受一些其他因素的影響，培養時間加長，傳代導致細胞出現單一化型。細胞培養基本操作過程以下幾點：1.準備工作：準備工作的內容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無菌室或超凈臺的清潔與消毒，培養箱及其他儀器的檢查與調試。2.取材：在無菌環境下從機體取出某種組織細胞(視實驗目的而定)，經過一定的處理(如消化分