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上海北諾生物科技有限公司
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三色書虱體內wolbachia的分子檢測2015/03/23
實驗試劑氯仿[重慶川東化工集團有限公司]異丙醇[重慶川東化工集團有限公司]無水乙醇[重慶川東化工集團有限公司]異戊醇[上海化學試劑有限公司]溴酚藍[上海三愛思試劑有限公司]二甲苯氰FF[AmerscoCo.]溴化乙錠[AmerscoCo.]飽和酚(pH7.0)[Tianjin,H&YBio.Co.Ltd]TaqDNA聚合酶[Tianjin,H&YBio.Co.Ltd]十二烷基肌氨酸鈉[Tianjin,H&YBio.Co.Ltd]十二烷基硫酸鈉[Tianjin,H&YBio.Co.Ltd]三輕甲基
人類染色體核型分析2015/03/23
實驗原理核型(karyotype)一詞在20世紀20年代首先由蘇聯學者T.A.Levzky等人提出。核型分析的發展有三項技術起了很重要的促進作用,一是1952年美籍華人細胞學家徐道覺發現的低滲處理技術,使中期細胞的染色體分散良好,便于觀察;二是秋水仙素的應用便于富集中期細胞分裂相;三是植物凝集素(PHA)刺激血淋巴細胞轉化、分裂,使以血培養方法觀察動物及人的染色體成為可能。核型是指染色體組在有絲分裂中期的表型,包括染色體數目、大小、形態特征等。核型分析是對染色體進行測量計算的基礎上,進行分組、排
高壓蒸汽滅菌步驟2015/03/23
實驗試劑牛肉膏蛋白胨培養基實驗材料培養皿(6套一包)注意事項檢查培養基滅菌是否*。
中藥免疫抑制成份杠柳苷全合成(杠柳苷,免疫抑制,中藥)2015/01/22
中國科學院上海有機化學研究所生命有機化學國家重點實驗室俞飚課題組于近期實現了對杠柳苷PeriplosideA的全合成。該類化合物具有一個*的亞甲基縮醛橋連的七元環原酸酯結構,這一的結構模塊加之連續的2-脫氧-beta-糖苷鍵,使得它的化學合成挑戰性。俞飚課題組利用分子內縮醛環化反應成功地構建了七元環原酸酯的核心骨架,并應用該課題組原創的三氟亞胺酯糖苷化和金催化糖苷化反應,完成了原酸酯二糖與甾體苷元的拼接以及脫氧四糖的延伸,zui終以總計76步、線性zui長29步和9.2%的總產率完成了全合成。該
研究揭示H10N8禽流感病毒感染人的分子機制2015/01/22
HA蛋白對人氣管組織及鴨子小腸組織的免疫熒光染色繼2013年先后在H5N1和H7N9禽流感病毒跨種間傳播研究中取得重要進展后,中國科學院微生物研究所高福課題組在H10N8禽流感病毒感染人的分子機制(MolecularMechanisms)和跨種間傳播趨勢評估上取得新的進展,研究結果已經于2015年1月9日在雜志《自然通信》(NatureCommunications)在線發表。2013年12月起,我國先后發生3例人感染H10N8禽流感病毒病例,并導致2人死亡。這種能感染人的H10N8病毒是否像H7
細胞計數儀的選擇2015/01/22
細胞生物學研究中的一些常規操作只是整個項目中微不足道但又非常重要的一步。這些常規操作簡單沒有技術內涵,卻消耗了研究者大量時間與體力,且結果也不能得到保證。其中使用血球計數板在顯微鏡下進行手動細胞計數*。手工計數不僅浪費了研究者大部分的時間,繁冗無聊的計數過程往往讓人頭暈眼花,影響了研究者的積極性,有種大材小用的感覺。不少研究者提起細胞計數都頻頻搖頭,不僅費時費力,枯燥無味,又沒有成就感。同時,手工計數的主觀性強,造成計數結果的可靠性大大打折,重復性差。不同操作者之間的計數結果一致性差,無可比性,
十招搞定免疫熒光2015/01/22
免疫熒光是標記免疫技術發展zui早的一種,它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術,通過將抗體與一些示蹤物質結合,利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位。免疫熒光步驟包括,細胞固定和通透,封閉,孵育一抗,二抗等。除了這些基本步驟,以下建議可以幫助您獲得更好的實驗結果。細胞固定和通透為達到*的檢測效果,細胞需要經過固定和通透。這些步驟非常關鍵,細胞和抗原需要保證*的結構,并利于抗體與抗原結合。通常情況下,需要通過以下步驟得以實現:細胞用2%-4%多聚甲醛固定,之后用0.
質粒純化方案中的關鍵步驟2015/01/14
如今質粒純化不再是什么難題,那么做了這么次質粒抽提的你了解質粒純化的原理嗎?你知道哪些步驟對質粒純化的成功起著關鍵作用嗎?QIAGEN質粒抽提簡單原理:在堿性條件下裂解細菌之后,將裂解液以的鹽濃度加入QIAGEN-tip當中。質粒DNA將發生選擇性的結合而從RNA、蛋白質及其他細胞污染物中被分離出來。1、制備細胞裂解產物細胞產率很大程度上依賴于細胞裂解質量。因此制備澄清的細胞裂解產物是QIAGEN純化方案中的重要一環,QIAGEN已經仔細針對*的裂解條件進行了相關的專業設計。對培養物進行收獲和重
Agilent安捷倫PCR相關產品小結2015/01/13
安捷倫科技公司(AgilentTechnologies)是新一代測序靶向序列捕獲解決方案和基因組學微列陣芯片領域的。安捷倫于2007年6月收購了生命科學試劑儀器品牌美國Stratagene公司,Stratagene公司的分子生物學、遺傳學、蛋白質組學、藥物研發和毒理學等領域的產品遍及學術界、政府研究機構和工業研究領域,特別是在生命科學研究領域的試劑、儀器尤為。例如文庫構建、定點突變、高保真Pfu酶等,部分經典產品說明書更成為被譽為生命科學研究圣地的冷泉港實驗室實驗課程的標準參考。1、Strata
Agilent安捷倫突變產品小結2015/01/13
突變是指在PCR過程中通過堿基改變而引起蛋白質氨基酸的改變。定點突變:在DNA片段的特定位點引入堿基改變,或者片段的插入以及刪除。AgilentQuikChangeLighting定點突變產品優勢1、可突變任何來源于dam+陽性菌株的質粒2、非PCR線性反應,可減少不需要的錯誤3、點突變,缺失突變,插入突變4、突變擴增4-14kb大小,具有85%突變效率5、突變AgilentQuikChangeLighting多點突變產品優勢1、Agilent*2、非PCR線性反應減少不需要的錯誤3、可突變任何
質粒DNA質量如何評估才可靠?2015/01/13
質粒抽提過程中有很多步驟會影響zui后的產量和質量,那么如何評估質粒DNA的產量和質量呢?目前使用分光光度法定量質粒DNA和通過瓊脂糖凝膠電泳進行質粒DNA產率和質量的分析是兩種zui常用的方法。溶液中的核酸濃度可通過260nm的吸光度方便地進行計算。A260的數值處于0.1至1.0之間時測量結果具有良好的重復性,但當A260數值小于0.1或大于1.0的時候,結果的可重復性將顯著下降。而且,3.0以上的讀值是無法使用的,它可能會潛在導致對DNA質量的低估。因此,為了獲得可靠的DNA分光光度定量結
間充質干細胞的傳代培養2015/01/06
間充質干細胞的傳代培養試劑和材料:1.*培養基:α-MEM:α-*基礎培養基,含谷氨酰胺,無核苷酸或脫氧核苷酸;添加:20%附加L-谷氨酰胺2mmol/L、經F雜交瘤純化,非熱滅活、青霉素100U/ml、鏈霉素100μg/ml。過濾除菌。儲存于4℃,不超過2周;2.A;3.胰蛋白酶/EDTA;4.聚丙烯離心管,15ml和50ml;5.塑料組織培養皿,直徑15cm;6.塑料微量移液器槍頭,10—1000μl;7.0.85%臺盼藍鹽溶液;8.微量移液器;9.改良的Neubauer血細胞計數器實驗方法
臍帶血干細胞的準備2015/01/06
臍帶血干細胞的準備試劑和材料:1.運輸培養基:Eagle基礎培養基(EBM),添加300U/ml青霉素和300μg/ml鏈霉素,150μg/ml慶大霉素和1μg/ml兩性霉素B;2.夾子;3.剪刀;4.抗凝劑:CPDA-1:122mmol/L(26g/L)枸櫞酸鈉,0.142mol/L(25.5g/L)葡萄糖,15.6mmol/L(3.0g/L)枸櫞酸和18.3mmol/L(2.2g/L)磷酸二氫鈉;5.etadine﹡或70%乙醇;6.18號注射器針頭;7.臍帶收集袋,175ml,含24.5m
從臍靜脈分離干細胞2015/01/06
從臍靜脈分離干細胞試劑和材料:1.培養基:*LG-DMEM:含2mmol/L的左旋谷氨酰胺的低糖DMEM,添加10%熱滅活胎牛血清,100U/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素;2.A;3.胰蛋白酶,0.05%,含EDTA;4.膠原酶A,0.1%用A配制;5.培養瓶;6.導管;實驗方法:1.在正常分娩后6-12h內收集和處理臍帶;2.在臍靜脈內插入導管,用A*地洗2次;3.夾住遠端臍帶;4.用0.1%膠原酶溶液充滿靜脈;5.夾住近端臍帶;6.將臍帶在37℃孵育20min;7.輕輕按摩臍帶,收集含
細胞株的保存12014/12/25
1.紫外消毒30min后關閉紫外燈,開啟超凈臺正常工作狀態,用酒精消毒操作者的雙手。2.將所需的培養基,胰酶確保瓶身干凈后放于工作臺面內,點燃酒精燈,將培養基和胰酶瓶口用酒精棉球擦拭后,再將瓶口對準在酒精燈上消毒2-3次,旋開瓶蓋后再次分別消毒瓶口和瓶蓋,分別放于酒精燈的兩側。特別是將培養基瓶放于斜架上,瓶口對準酒精燈,且放在距離酒精燈zui近的位置,瓶蓋置于酒精燈的另一側。3.將培養瓶瓶口在酒精燈上消毒2-3次,旋開后分別再次消毒瓶口和瓶蓋2-3次,蓋放于酒精燈右側后將培養瓶內的培養液懸空倒進
重組細胞因子溶解2014/12/25
1.離心(Centrifuge):高速離心(10,000rpm)20-30秒,或低速離心(2,000rpm)5分鐘。2.溶解(Reconstitution):用去離子水或其它緩沖液(根據說明書要求進行選擇)溶解至說明書要求的濃度(一般為0.1-1.0mg/ml)。溶解時不可振蕩,避免因化學鍵的斷裂造成蛋白失活,可加入適當的溶劑輕搖并靜置一段時間,待細胞因子*溶解后使用。溶劑的選擇:1)要求用去離子水溶解的產品,務必不可用鹽溶液,避免過高的鹽濃度造成蛋白不可逆的析出;2)要求用鹽溶液溶解的產品,請
細胞凋亡的早期檢測方法有哪些?2014/12/25
1、PS(磷脂酰絲氨酸)在胞外膜分布的檢測PS從胞膜內側轉移到外側現象是在細胞凋亡的早期即可發生標志。AnnexinV是一種鈣依賴性的磷脂結合蛋白,能專一性的結合暴露在胞膜外側的PS,使用熒光素標記的AnnexinV蛋白(如AnnexinV-FITC)即可檢測細胞凋亡。由于這是一種凋亡早期的活細胞檢測(懸浮細胞和貼壁細胞都適用),可與DNA染料或別的晚期檢測方法相結合來標記凋亡的發展階段。操作簡便快速,10分鐘就可完成檢測。靈敏度高,可作為流式方法分析凋亡細胞的基礎。2、細胞內氧化還原狀態改變的
微生物菌種冷凍干燥和液氮保藏菌種技術2014/12/03
微生物菌種冷凍干燥和液氮保藏菌種技術-、安瓶管開封1.用浸過70%酒精的脫脂棉擦凈安瓿管。2.用火焰將安瓿管頂端加熱。3.滴無菌水至加熱的安瓿管頂端使玻璃開裂。4.用挫刀或鑷子敲下已開裂的安瓿管的頂端。二、菌株恢復培養1.用無菌吸管,吸取0.3~0.5ml適宜的液體培養基,滴人安瓿管內,輕輕振蕩,使凍于菌體溶解呈懸浮狀。2.取0.1~0.2ml菌體懸浮液,移植于適宜的瓊脂斜面/平板培養基上,剩余的菌液,注入適宜的液體培養基內,然后在建議的溫度下培養。3.若未能活化,或活化后有疑問時,請于收到菌種
上皮細胞的培養方法2014/12/03
上皮細胞的培養方法上皮細胞包括腺上皮是很多器官如肝、胰、乳腺等的功能成分,又由于癌起源于上皮組織,故上皮細胞培養特別受到重視.但上皮細胞培養中常混雜有成纖維細胞,培養時生長速度往往超過上皮細胞,并難以純化,同時上皮細胞難以在體外長期生存,因此純化和延長生存時間是培養關鍵.體內上皮細胞生長在膠原構成的基膜,因此培養在有膠原的底物上可能利于生長,另外人或小鼠表皮細胞培養在以3T3細胞為飼養層(用射線照射后)時,細胞易生長并可發生一定程度的分化現象.降低PH、Ca2+含量和溫度,向培養基中加入表皮生長
細胞的純化的兩種方法2014/12/03
細胞的純化的兩種方法細胞的純化一般分為兩種,即自然純化很人工純化.常用的純化方法有,酶消化法,細胞因子依賴純化法,機械刮除法,反復貼壁法,電烙篩選法.體外培養的細胞源于人或動物或胚胎組織,體內的細胞都是混雜生長,每一種組織都有血管和間葉組織,因此,來源于上述組織的培養材料的原代細胞、傳代細胞絕大多數都呈混合生長,既有上皮樣細胞又有纖維樣細胞,纖維樣細胞又包括成纖維細胞、肌細胞、骨細胞、滑膜細胞等,混雜的細胞會直接影響實驗結果,而利用體外培養細胞進行實驗研究時,為了保證實驗結果的可靠性、一致性、穩
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