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微生物學技術:高壓蒸汽滅菌實驗

來源:上海北諾生物科技有限公司   2014年08月14日 14:27  

標簽: 高壓蒸汽 滅菌

高壓蒸汽滅菌是將待滅菌的物品放在一個密閉的加壓滅菌鍋內,通過加熱,使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產生蒸汽。待水蒸汽急劇地將鍋內的冷空氣從排氣閥中驅盡,然后關閉排氣閥,繼續加熱,此時由于蒸汽不能溢出,而增加了滅菌器內的壓力,從而使沸點增高,得到高于100℃的溫度。導致菌體蛋白質凝固變性而達到滅菌的目的。

實驗方法

  • 高壓蒸汽滅菌實驗
實驗方法原理在使用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌時,滅菌鍋內冷空氣的排除是否*極為重要,因為空氣的膨脹壓大于水蒸汽的膨脹壓,所以,當水蒸汽中含有空氣時,在同一壓力下,含空氣蒸汽的溫度低于飽和蒸汽的溫度。
試劑、試劑盒

牛肉膏蛋白胨培養基

儀器、耗材

培養皿 手提式高壓蒸汽菌鍋

實驗步驟

1.  首先將內層滅菌桶取出,再向外層鍋內加入適量的水,使水面與三角擱架相平為宜。


2.  放回滅菌桶,并裝入待滅菌物品。注意不要裝得太擠,以免防礙蒸汽流通而影響滅菌效果。三角燒瓶與試管口端均不要與桶壁接觸,以免冷凝水淋濕包口的紙而透入棉塞。


3.  加蓋,并將蓋上的排氣軟管插入內層滅菌桶的排氣槽內。再以兩兩對稱的方式同時旋緊相對的兩個螺栓,使螺栓松緊一致,勿使漏氣。


4.  用電爐或煤氣加熱,并同時打開排氣閥,使水沸騰以排除鍋內的冷空氣。待冷空氣*排盡后,關上排氣閥,讓鍋內的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上升。當鍋內壓力升到所需壓力時,控制熱源,維持壓力至所需時間。本實驗用1.05 kg/cm2,121.3℃,20分鐘滅菌。


5.  滅菌所需時間到后,切斷電源或關閉煤氣,讓滅菌鍋內溫度自然下降,當壓力表的壓力降至0時,打開排氣閥,旋松螺栓,打開蓋子,取出滅菌物品。如果壓力未降到0時,打開排氣閥,就會因鍋內壓力突然下降,使容器內的培養基由于內外壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口,造成棉塞沾染培養基而發生污染。


6.  將取出的滅菌培養基放入37℃溫箱培養24小時,經檢查若無雜菌生長,即可待用。

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