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小白鼠骨髓細胞染色體顯帶（C帶）技術2015/06/08

實驗原理染色體顯帶（Banding）技術是一種用染料對染色體進行分化染色的方法。就是將染色體經酸、堿、溫度等處理后，再以染料染色，或單用某些熒光染料就可以染出深淺不同或明暗各異的帶紋的縱向結構。此項技術發明于本上世紀六十年代末、七十年代初，發展至今已是非常成熟。1971年在巴黎召開第四次人類遺傳學會議上制定了人類染色體識別的統一體制，訂出了各條染色體分帶的寬窄、位置和名稱；1981年又公布了《人類細胞遺傳學高分辨率顯帶命名體制》，這些規定目前為世界各國學者所普遍采用。在我國，染色體顯帶工作起步于

ELISA原理2015/06/08

實驗原理ELISA是以免疫學反應為基礎，將抗原、牽9體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。由于抗原、抗體的反應在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應物，從而保證試驗結果的特異性與穩定性。在實際應用中，通過不同的設計，具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測抗體的間接法(圖a)、用于檢測抗原的雙抗體夾心法(圖b)以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接

動物組織塊DNA的提取2015/06/08

實驗原理DNA是一切生物細胞的重要組成成分，主要存在于細胞核中。通過研磨和SDS作用破碎細胞；苯酚和氯仿可使蛋白質變性，用其混合液（酚：氯仿：異戊醇）重復抽提，使蛋白質變性，然后離心除去變性蛋白質；RNase降解RNA，從而得到純凈的DNA分子。實驗試劑1．生理鹽水2．十二烷基硫酸鈉（SDS）3．三羥甲基氨基甲烷（Tris）4．乙二胺四乙酸（EDTA）5．飽和酚6．氯仿7．異戊醇8．無水乙醇9．75%乙醇10．蛋白酶K11．RNase酶（試劑配制1．Tris–HCL1mol/LPH8.050ml

PAGE膠制備方法2015/06/08

實驗試劑1.5x樣品緩沖液（10ml）:0.6ml1mol/L的Tris-HCl(pH6.8),5ml50％甘油，2ml10％的SDS，0.5ml巰基乙醇，1ml1％溴酚藍，0.9ml蒸餾水。可在4℃保存數周，或在－20℃保存數月。2.凝膠貯液：在通風櫥中，稱取丙烯酰胺30g，甲叉雙丙烯酰胺0.8g，加重蒸水溶解后，定容到100ml。過濾后置棕色瓶中，4℃保存，一般可放置1個月。3.pH8.9分離膠緩沖液：Tris36.3g，加1mol/LHCl48ml，加重蒸水80ml使其溶解，調pH8.9，

PCR擴增產物鑒定與純化12015/06/02

實驗原理瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR擴增產物。（原理參照瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA實驗）本實驗使用了TaKaRa公司的膠純化試劑盒（AgaroseGelDNAPurificationKit），該試劑盒是從瓊脂糖凝膠中回收并純化DNA片段的試劑盒。試劑盒采用了*的凝膠融解系統，結合DNA制備膜技術，具有、快速、方便的特點，全套操作只需30min便可完成。使用該試劑盒每次可純化得到多至10μg的DNA片段（100bp～30kb），回收率高達50～80%。本試劑盒回收純化的DNA片段純度高，完整性好，可直接

間接血凝試驗2015/06/02

實驗原理若將可溶性的鼻疽抗原吸附在比其體積大千萬倍的紅細胞表面上，使紅細胞產生一種新的血清學性質，制成所謂的致敏紅細胞，即可用以診斷鼻疽。只要與少量相應抗體相遇，紅細胞通過抗原抗體反應，即可被動地結合在一起，呈現肉眼可見的凝集現象，陰性者紅細胞由于自然沉積于孔底，則呈圓點狀。這樣可以明顯地提高反應的敏感性。間接血凝試驗即間接紅細胞凝集試驗，它也存在一些缺點，例如不同批次制備的抗原或紅細胞，在敏感性和穩定性方面，可能不一致，它很容易受外界因素的影響，發生非特異性凝集，所以應用的器皿等就應當清潔，不

植物葉片光合速率的測定（改良半葉法）2015/06/02

實驗試劑三氯、石蠟。實驗設備剪刀，分析天平，稱量皿（或鋁盒），烘箱，刀片，金屬（有機玻璃也可）模板（或打孔器），紗布，夾子，有蓋搪瓷盤，錫紙等。實驗材料生長于田間的植株。實驗步驟1．選擇測定樣品：實驗可在晴天上午8~9點鐘開始，預先在田間選定有代表性的葉片（如葉片在植株上的部位、年齡、受光條件等）10張，掛牌編號。2．葉子基部處理，目的是將葉子輸導系統的韌皮部破壞：1)棉花等雙子葉植物，可用刀片將葉柄的外皮環割約0.5cm寬，切斷韌皮部運輸。2)小麥、水稻等單子葉植物，由于韌皮部和木質部難以分開

用DNA 芯片技術檢測基因的表達2015/06/02

一、芯片制備基因芯片的制備主要有兩種基本方法，一是在片合成法，另一種方法是點樣法。在片合成法是基于組合化學的合成原理,它通過一組定位模板來決定基片表面上不同化學單體的偶聯位點和次序。在片合成法制備DNA芯片的關鍵是高空間分辨率的模板定位技術和固相合成化學技術的精巧結合。目前，已有多種模板技術用于基因芯片的在片合成,如光去保護并行合成法、光刻膠保護合成法、微流體模板固相合成技術、分子印章多次壓印原位合成的方法、噴印合成法。在片合成法可以發揮微細加工技術的優勢，很適合制作大規模DNA探針陣列芯片，實

淋巴細胞的分離和激化實驗2015/05/20

實驗試劑1.PBS（Dulbecco）：0.10g/L無水CaCl20.20g/LKCl0.20g/LKHPO40.10g/LMgCl2.6H2O8.00g/LNaCl2.16g/LNaH2PO4.7H2O調pH至7.42.生長培養基：不含谷氨酰胺的RPMI1640培養基10%FBS慶大霉素（可不用）（10μg/ml）2mmol/LL-谷氨酰胺1mmol/L丙酮酸鈉3.促細胞分裂劑（終濃度）5μg/mlPHA：1mg/ml母液-20℃分裝凍存25μg/ml刀豆凝集素A（conA）：0.4mg/m

生物因素對微生物的影響（抗菌譜試驗）2015/05/20

實驗原理許多微生物在其生命活動過程中能產生某種特殊的代謝產物，具有選擇性地抑制或殺死其他微生物的作用，例如抗生素。不同抗生素的抗菌譜是不同的，某些抗生素只對少數細菌有抗菌作用，例如青霉素一般只對革蘭氏陽性菌有抗菌作用，多粘菌素只對革蘭氏陰性菌有作用，這類抗生素稱為窄譜抗生素；而另一些抗生素則對多種細菌有作用，例如四環素、土霉素對許多革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌都有作用，這類抗生素稱為廣譜抗生素。如果將產生某種抗生素的菌劃直線接種在豆芽汁葡萄糖瓊脂培養基平板上，經培養后，就會長出一條菌帶，并產生某種

Omega質粒小量提取流程2015/05/20

實驗試劑1.使用前，將RNaseA全部加入SolutionI中并于4度保存。2.按下表用無水乙醇稀釋DNAWashBuffer，并于室溫保存。D6948-00B:加入8ml無水乙醇D6948-01B:加入80ml無水乙醇D6848-02B:加入80ml無水乙醇實驗步驟1.取1.5-5ml菌液10，000xg室溫離心1min收集菌體沉淀；2.小心去除上清液，加250ulSolutionI/RNase，渦旋或用移液槍上下吹打重懸菌體。3.加250ulSolutionⅡ，來回顛倒4-6次輕柔混勻，得到

細菌中蛋白質的提取與純化技術2015/05/20

實驗試劑采用T7?TagAffinityPurificationKitT7?Tag抗體瓊脂。B/W緩沖液：4.29mMNa2HPO4，1.47mMKH2PO4，2.7mMKCl，0.137mMNaCl，1%吐溫-20，pH7.3洗脫緩沖液:0.1M檸檬酸，pH2.2.中和緩沖液：2MTris，pH10.4。PEG20000。實驗步驟1.100ml含重組表達質粒的菌體誘導后，離心5000g×5min，棄上清，收獲菌體，用10ml預冷的B/W緩沖液重懸。2.重懸液于冰上超聲處理，直至樣品不再粘稠，4

從瓊脂糖凝膠（Agaros gel）中回收DNA片段2015/05/20

實驗原理限制性內切酶切割后的DNA片斷經過電泳后，按分子量大小被分開，排列在瓊脂糖凝膠中，可以將特定的某條DNA帶所在的凝膠切下來，加熱或用特殊的試劑熔解凝膠，使DNA溶回到溶液中，再經過乙醇沉淀或過柱即可獲得目的DNA酶切片段。實驗試劑1.電泳緩沖液2.熒光染料3.電泳級瓊脂糖粉4.10′加樣緩沖液5.DNA分子量標準(DL2000)6.DNA凝膠回收試劑盒實驗設備1.旋渦混合器2.微量移液取樣器3.移液器吸頭4.1.5ml微量離心管5.雙面微量離心管架6.臺式離心機7.瓊脂糖凝膠電泳系統8.

蛋白質濃度測定（雙縮脲法）2015/05/15

實驗原理測定蛋白質的定量方法有很多，目前常用的有凱氏定氮法；比色法主要包括雙縮脲法、Folin-酚試劑法及染料結合法；紫外分光光度法等雙縮脲(Biuret)法：在堿性溶液中，雙縮脲(H2N—CO—NH—CO—NH2)與二價銅離子作用形成紫紅色的絡合物，這一反應稱雙縮脲反應。凡分子中含二個或二個以上酰胺基(—CO—NH2)，或與此相似的基團[如—CH2—NH2，—CS—NH2，—C(NH)NH2]的任何化合物，無論這類基團直接相連還是通過一個碳或氮原子間接相連，均可發生上述反應。蛋白質分子含有眾多

微生物生物量和生長曲線的測定2015/05/15

實驗原理我們知道微生物都具有生長旺、繁殖快的特點，單細胞微生物如細菌、酵母菌的個體細胞的增大即細胞物質的增加是有限度的，細胞長大到一定程度就開始分裂繁殖，菌體數量增多。細菌旺盛生長時幾十分鐘就可繁殖一代。因此他們的生長往往是通過繁殖表現出來的，本質上是以群體細胞數目增加為生長標志。絲狀微生物如放線菌、霉菌的生長主要表現為菌絲的伸長和分枝，他們相互纏繞，很難分清個體與個體之間的界限，所以通常以菌絲的重量增長(細胞質量的增加)或菌絲生長速度間接來衡量生長狀況。目前測定微生物數量的方法有直接法和間接法

EMSA凝膠遷移2015/05/15

實驗原理凝膠遷移或電泳遷移率實驗（EMSA）是一種研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用的技術，可用于定性和定量分析。這一技術zui初用于研究DNA結合蛋白，目前已用于研究RNA結合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常將純化的蛋白和細胞粗提液和32P同位素標記的DNA或RNA探針一同保溫，在非變性的聚丙烯凝膠電泳上，分離復合物和非結合的探針。DNA-復合物或RNA-復合物比非結合的探針移動得慢。同位素標記的探針依研究的結合蛋白的不同，可是雙鏈或者是單鏈。當檢測如轉錄調控因子一類的D

LB培養基的配制2015/05/15

實驗步驟1.LB培養基Tryptone10gYeastExtract5gNaCl10g加水至1000mL（pH7.2，固體培養基加1.8%瓊脂粉）。2.LB抗性篩選培養基待滅菌后的LB固體培養基溫度降至50℃左右，加入抗生素儲存液至終濃度50μg/mL，即每毫升培養基加抗生素儲存液1μL，搖勻后，倒平板。液體LB抗性篩選培養基，在*冷卻后加入抗生素，加入的量與固體培養基相同。3.LB/Amp/IPTG/X-gal培養基在含100μg/mLAmp的LB瓊脂平板上加入40μLX-gal貯存液和40μ

醋酸纖維薄膜電泳分離血清的蛋白質2015/05/15

實驗原理帶電荷的蛋白質，在電場中向著與其所帶電荷電性相反的電極泳動稱為電泳。血清中各種蛋白質的等電點不同，但大都在pH7以下，若將血清置于pH8.6的緩沖液中，則這些蛋白質均帶負電，在電場中都向陽極移動。由于各種蛋白質在同一pH環境中所帶負電荷多少及分子大小不同，所以在電場中向陽極泳動速度也不同。蛋白質分子小而帶電荷多者，泳動速度快；反之，則泳動速度慢。因此可將血清蛋白質依次分為清蛋白、a1-球蛋白、a2-球蛋白、b-球蛋白和g球蛋白五條區帶，經染色可計算出各血清蛋白質含量的百分數。以醋酸纖維薄

2013年上海公共場所集中空調系統中嗜肺軍團菌檢測2015/05/05

2013年上海市質量技監局組織開展了“公共場所集中空調系統中嗜肺軍團菌檢測能力驗證”活動，有關情況通報如下：一、參加單位本次能力驗證活動共有46家檢測機構參加，參加單位均已獲得所參加檢測項目的計量認證資質，覆蓋了本市所有具備該項目檢測能力的獲證單位。二、比對過程本次能力驗證樣品分為A、B兩個水平測試樣品和陰性樣品，A水平樣品為嗜肺軍團菌1型，B水平樣品為其他嗜肺軍團菌血清型，兩水平樣品之間嗜肺軍團菌的血清型不同；陰性樣品則不含嗜肺軍團菌。每個檢測機構檢測A、B兩個水平和陰性共三份樣品，檢測目標值

進出口水產品安全衛生檢測監控項目一覽表2015/05/05

出口歐盟水產品安全衛生檢測監控項目一覽表產品名稱檢測監控內容備注項目取樣計劃*海捕蝦類(凍品)(中風險)檢測氯霉素不得檢出硝基呋喃代謝物（所有蝦類產品）不得檢出SO2（捕撈產品）計生、鮮、冷凍產品150ppm包括E220二氧化硫，E221亞硫酸鈉，E222亞硫酸氫鈉，E223偏亞硫酸鈉，E224焦亞硫酸鉀，E226亞硫酸鈣，E227亞硫酸氫鈣，E228亞硫酸氫鉀。低于10ppm視為不存在,高于10ppm必須標注,如需考慮規格問題,參考原標準熟制品50ppm沙門氏菌陰性/25g霍亂弧菌陰性5-10