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士鋒生物蛋白的裂解與提取方法步驟

來源:上海士鋒生物科技有限公司   2013年08月21日 06:47  

這是偶整理的蛋白裂解和提取的protocol,希望對大家有所幫助。

10ml 三去污裂解液配方如下:

50 mmol/L Tris-cl (pH 8.0): 0.07882g

150 mmol/L NaCl: 0.08775g

0.2 g/L疊氮鈉: 0.002g

1 g/LSDS 0.01g

100 mg/L Aprotin 0.001g

10 g/L NP-40 0.1g

5 g/L去氧膽酸鈉 0.05g

100 mg/L 苯甲基磺酰氟(PMSF) 0.001g


總蛋白抽提程序:

1.PBS洗細胞3 次

2.加入裂解緩沖液(1.5x106個細胞大約加入100µL 裂解液,或100ml細胞瓶中加入100µL 裂解液),

冰上放置20min

3.收集裂解液

4.離心,12000轉,2~10min

5.吸取上清,蛋白定量,分裝,保存在-80度備用
 

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