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ELISA酶聯免疫吸附實驗檢測目的抗原方法分享2024/09/02

ELISA酶聯免疫吸附實驗是一種廣泛應用在測定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫分析技術。酶聯免疫吸附試驗的標準程序，通常是把蛋白、抗體、或激素等（即抗原）直接或是以捕捉抗體（captureAb）固定在固相載體上，再加入一級檢測抗體（primarydetectionAb），形成一個抗原抗體的復合物。如果該抗體已經用酶（enzyme）標記了，即可用來直接測定抗原的量，若無，則可利用另一個酶標記的二級抗體來測定抗原的量。測定抗原量的方法是加入該酶的底質（substrate），作用后產生出現的顏色深

干粉培養基原倍液的配制2024/08/29

1、配制過濾除菌的細胞培養基(1)閱讀培養基使用說明，確定需要添加何種添加劑（如NaHCO3、L-谷氨酰胺、丙酮酸鈉、HEPES等）。(2)根據所需將培養基全部倒入一容器中，用少量注射用水（20℃～30℃）將袋內殘留培養基洗下，并入容器。加注射用水至總體積的95％，輕微攪拌溶解。(3)加入規定量的碳酸氫鈉及所要添加的物質。(4)輕微攪拌溶解，加注射用水至規定體積。(5)用1mol/L氫氧化鈉溶液或1mol/L鹽酸溶液調pH至所需值。(6)用0.22μm濾膜正壓過濾除菌。(7)溶液應在2℃－8℃下

ELISA（酶聯免疫吸附實驗）測定結果計算方法2024/08/19

ELISA（酶聯免疫吸附實驗）是一種常用的生物化學分析技術，用于檢測特定蛋白質或其他生物分子的存在和濃度，ELISA數據分析和結果解讀是實驗過程中至關重要的一步。ELISA試劑盒在國內有許多種叫法：例如：ELISA檢測試劑盒、ELISAKit、酶聯免疫試劑盒、酶聯免疫吸附測定試劑盒、酶聯免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等，比較常見的叫法是ELISA檢測試劑盒、酶聯免疫吸附測定試劑盒等。ELISA試劑盒自從60-70年代問世以來，得到世界科研工作者的認可及推崇，在歐美及中國獲得很大的推廣，尤其是國內生化

酶聯免疫吸附測定（ELISA）樣本制備處理分述2024/08/12

酶聯免疫吸附測定（Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay，ELISA）是免疫學和分子生物學中廣泛使用的實驗室技術，能夠應用ELISA實驗的樣本種類很多，有血清，血漿，細胞上清，細胞裂解液，尿液，關節滑液，腦脊液，肺泡灌洗液，各種組織的組織勻漿；采集和處理的方式都不相同。一、血清1、將全血收集到未經處理的測試管中，或者到不含抗凝劑的管中，如BD血清用真空采血管。2、在室溫下連續孵育20分鐘。3、4℃3,000rpm離心10分鐘。4、立即分裝上清液（血漿）并在-80℃下保存

標準溶液配制和標定技術事項匯總2024/08/05

標準溶液是指已知準確濃度的試劑溶液，在容量分析中用作滴定劑，以滴定被測物質;或在儀器分析中，用作標準校準系列來測定待測物的含量。標準溶液的取得有兩種方法，一種是用基準物質直接配制，一種是用基準物質或已知準確濃度的標準溶液進行標定來取得。用于配制或標定標準溶液濃度的-高純度化學試劑稱為基準試劑或基準物質，用基準試劑或基準物質配制成已知準確濃度的溶液稱為標準溶液。標準溶液的濃度準確與否直接關系檢測結果的精密度、準確度。因此配制和標定中你必須知道這些事：1、用于配制或標定的標準溶液濃度的基準物質必須符

影響ELISA檢測質量因素分析2024/07/30

ELISA測定的陽性判斷值,通常是將大量陰性和陽性人群的測定數據進行統計分析后確定的,其確定依據為判斷結果的假陽性和假陰性率最di。在陽性判斷值周圍一定范圍內之外的測定結果可歸為可疑,亦即ELISA測定的“灰區”。“灰區”的大小可用統計學方法確定。測定結果處于“灰區”的樣本,可通過確認試驗或追蹤檢測來確定到底是陽性還是陰性ELISA“灰區”是把定量分析的正常值范圍引入定性分析而建立的概念。灰區的設置有二種:(1)CO×(1±C),C為該試劑的批內C(一般在15%～20%間);(2)CO±2S,S

ELISA測定結果通常計算方法簡述2024/07/22

ELISA試劑盒在國內有許多種叫法：例如：ELISA檢測試劑盒、ELISAKit、酶聯免疫試劑盒、酶聯免疫吸附測定試劑盒、酶聯免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等，比較常見的叫法是ELISA檢測試劑盒、酶聯免疫吸附測定試劑盒等。ELISA試劑盒自從60-70年代問世以來，得到世界科研工作者的認可及推崇，在歐美及中國獲得很大的推廣，尤其是國內生化領域的長足發展。ELISA生物試驗是一種敏感性高，特異性強，重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩定、易保存，操作簡便，結果判斷較客觀等因素，已廣泛應用在免疫學檢驗

PCR反應準備工作及操作步驟2024/07/15

PCR（PolymeraseChainReaction，聚合酶鏈式反應）是現代生物學中一項重要的技術，能進行體外擴增DNA序列，為基因組研究和分子診斷提供了有力的工具。PCR原理是指在DNA聚合酶催化下，以母鏈DNA為模板以特定引物為延伸起點，利用脫氧核苷三磷酸(dNTP)，通過變性、退火、延伸等步驟，體外復制出與母鏈模板DNA互補的子鏈DNA的過程。PCR反應開始前的準備工作：PCR反應開始前，你需要準備好DNA模板（基因組DNA或者反轉錄制備的cDNA）,特異性的引物（手動設計或利用軟件設計

影響ELISA檢測試劑盒測定結果操作因素匯集2024/07/08

ELISA全稱叫酶聯免疫吸附試驗，ELISA原理：測定時，受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應，用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與溶液中的其他物質分開，再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應結合在固相載體上，加入酶反應的底物后，底物被酶催化成有色產物，產物的量與標本中要檢測的目標物質的量直接相關，故可根據顏色的深淺進行定性或定量分析。影響ELISA檢測試劑盒測定結果操作因素如下：1、嚴格按照試劑說明書進行操作。2、檢測前應將試劑放置室溫平衡半小時，洗滌液應現用現配，同時觀察濃縮洗滌

實驗室樣品收集及培養基滅菌使用2024/07/01

樣品的采集及檢測:一、保證采樣器具的無菌性1.玻璃器皿：采用干熱滅菌方式進行滅菌，保證恒溫、時間足夠（但不可時間過長，導致玻璃器皿易裂紋而報廢）。2.取樣筐：使用前要用75%酒精進行噴灑消毒3.取樣勺、濃奶取樣提子：要保證其清潔消毒，清潔后用75%酒精進行擦拭消毒。4.取樣袋：可現用酒精進行擦拭消毒，再在超凈臺用紫外燈照射消毒，（包裝車間要在傳遞窗用紫外燈照射消毒）。5.電子稱表面用75%酒精消毒。二、人員操作1.保證手部的清洗、消毒：取樣前及做樣前都要先洗手再消毒。2.取樣要具有代表性（隨機樣

多克隆抗體和單克隆抗體的作用用途2024/06/24

單克隆抗體的定義:單克隆抗體是僅與目標蛋白某一特定表位結合的單一抗體。單克隆抗體的制備：簡單來說就是將免疫原注射到宿主動物體內產生免疫反應，之后把B細胞從脾臟中移出，單種B細胞與骨髓瘤細胞融合為B細胞雜交瘤，成為一個永生化胞株。這樣一來，雜交瘤的B細胞就會一直產出只識別單一表位的單克隆抗體，通常這個胞株會有一個特定的克隆號（clonenumber），用來與其他胞株區分。雜交瘤接下來可以被注射到小鼠的腹腔中大量，雜交瘤分泌富含抗體的一種液體，被稱作腹水，用注射器抽取純化，就可獲得大量的單克隆抗體。

PCR反應引物條件優化2024/06/12

PCR（Polymerasechainreaction，聚合酶鏈式反應）是模擬體內DNA復制過程，對特定DNA序列進行大量擴增的一種技術。PCR反應是以4種dNTP為底物，引物引導，DNA聚合酶催化作用下，在單鏈DNA模板3’末端開始進行互補鏈的延伸，多次反復的擴增使特定DNA序列以指數增加。PCR反應體系參與PCR反應的物質主要為包括：引物、酶、dNTP、Buffer、模板和Mg2+。引物是兩段與待擴增靶DNA序列互補的寡核苷酸片段，兩引物間距離決定擴增片段的長度，兩引物的5’端決定擴增產物的

實際篩選血清方式推送2024/06/03

細胞培養液中添加的血清有牛血清、馬血清、人血清等，其中牛血清是常用的血清，分為胎牛血清和新生小牛血清。胎牛血清是從母牛破腹取出的胎牛中分離出的血清，價格昂貴。新生小牛血清是從剛出生的尚未哺乳的小牛中分離出來的血清，如廠家能做到這一點，新生小牛血清的質量與胎牛血清的質量相差不大。如小牛出生后已哺乳，從這種小牛中取出的血清中可能含有較多的生物活性物質，其質量明顯不如前兩種。血清，指血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白原及某些凝血因子后分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。細胞培養中血清的主

貼壁細胞與懸浮細胞的培養有有哪些方面區別2024/05/27

貼壁細胞:概念：貼壁細胞是指那些在體外培養時需要附著在固體表面(如玻璃、塑料)上才能生長和分裂的細胞。這類細胞在自然狀態下，通常存在于實體組織中，如皮膚、肌肉、器官等。形態特征：貼壁細胞通常會附著在培養瓶底部，可能會形成緊密的細胞間連接，如緊密形成單層或多層的細胞層。它們的形狀多樣，可以是扁平的，長方形的，或者是多邊形的等。貼壁細胞通常會有明顯的核和細胞質，細胞質內可見各種細胞器。細胞之間連接、間隙連接等。生長特性：貼壁細胞的生長通常需要一定的時間，因為它們需要先附著在培養瓶底部，然后才能開始分

胎牛血清白蛋白（BSA）獲取途徑及其用途2024/05/20

胎牛血清白蛋白，英文名稱BovineSerumAlbumin（BSA），也稱CohnFractionV，是牛血清中的一種白蛋白，包含583個氨基酸殘基，分子量為66.430kDa，等電點為4.7。牛血清白蛋白在生化實驗中有廣泛的應用，例如在westernblot中作為Blockingagent;在酶切反應緩沖液中加入BSA，通過提高溶液中蛋白質的濃度，對酶起保護作用。防止酶的分解和非特異性吸附，能減輕有些酶的變性，能減輕有些不利環境因素如加熱，表面張力及化學因素引起的變性。是胎牛血清中的一種球蛋

ELISA實驗顯色淡詳細解讀2024/05/13

ELISA（酶聯免疫吸附試驗）是一種用于檢測抗原或抗體濃度的免疫學試驗。如果ELISA實驗的顯色淡或靈敏度低，可能有多種原因。ELISA實驗顯色淡的原因及解決方案：原因一：試劑盒在運輸途中時間太長，溫度太高。解決方案：盡量縮短運輸時間，夏季應放冰塊降溫。原因二：試劑盒未充分平衡。解決方案：試劑盒從2～8℃冰箱取出后打開盒蓋，于室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫（約25℃）。原因三：培養箱溫度不足37℃。解決方案：注意培養箱溫度，放入反應板后盡量減少開啟次數以免影響溫度恒定，非隔水式培

從不同方面比較原代細胞和傳代細胞培養2024/05/13

原代細胞生長緩慢，一般認為，原代細胞培養的第1代和傳代到第10代以內統稱為原代培養。原代培養的細胞一般傳至10代左右就不容易傳下去了，細胞的生長會出現停滯，大部分細胞衰老死亡。但是有極少數的細胞能夠度過“危機”而繼續傳下去，這些存活的細胞一般能夠傳到40-50代，這種傳代細胞叫做細胞株。當細胞傳至50代以后又會出現“危機”，這時有部分細胞的遺傳物質發生了改變且帶有癌變的特點，從而可能無限制地傳代下去，這種傳代細胞稱為細胞系。一、定義方面：1、原代培養是指由體內取出組織或細胞進行的第1次培養，也叫

抗體具有穩定性好特點原因詳解2024/05/06

抗體（antibody，Ab）是機體在體內存在的外來分子、微生物等抗原物質刺激下，由B淋巴細胞或記憶細胞增殖分化成的漿細胞所產生的、可與相應抗原發生特異性結合的免疫球蛋白（immunoglobulins，Ig），主要分布在血清中，也分布于組織液及外分泌液中。抗體在室溫、37℃保存與-20℃保存具有一樣的活性與穩定性。穩定性好的抗體具有的特點：1.抗體純度高純度的抗體產品，去除了包括各種蛋白酶在內的雜質，保證了抗體的穩定性。采用先進的抗體純化技術，確保抗體產品的高純度，保障其抗體產品的穩定性。2.

免疫組化染色實驗著色問題探究2024/04/28

良好的免疫組化染色切片是正確判斷染色結果的基礎和前提。由于免疫組化染色過程中存在很多步驟或環節，每一個步驟或環節都可能影響到染色的最終結果，因此，要做好一張高質量的免疫組化切片并不是一件非常容易的事。從染色的結果看，一般可分為兩類：無色片（即無陽性信號）和“雜音”染色片（有陽性信號）。一、無色片染色結束后，切片中見不到任何陽性信號。這是常規工作中比較常見的現象，出現這種現象，有兩種可能：1、真陰性結果：整個染色過程沒有出現問題，組織或細胞確實不表達與抗體相關的抗原。2、假陰性結果：即此陰性結果不

挑選適合實驗生化試劑盒鑒別方法2024/04/22

生化試劑盒通常可分為液體單試劑和液體雙試劑，前者特別適用于半自動生化分析儀和小型自動生化分析儀，使用方便，缺點是穩定性較差。與單試劑相比，雙試劑提高了抗干擾能力，具有穩定性能較好，可消除樣品自身空白等特點。此外還有多項同測組合試劑、濃縮試劑等。對新的試劑盒，我們首先要查看其資質是否齊全，是否為合法有效試劑，是否有相關的臨床試驗驗證等。其次，在本實驗室，可做以下工作來進行驗證是否適合使用。一、試劑空白吸光度用蒸餾水做空白，用最定的空白液加入試劑作為樣品測試，在測試主波長下，記錄測試啟動時的吸光度(