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逆轉(zhuǎn)錄PCR反應(yīng)條件選擇指南2024/04/16: 逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction，RT-PCR)的原理是：提取組織或細(xì)胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo（dT）或隨機(jī)引物利用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成cDNA。再以cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，而獲得目的基因或檢測(cè)基因表達(dá)。RT-PCR使RNA檢測(cè)的靈敏性提高了幾個(gè)數(shù)量級(jí)，使一些極為微量RNA樣品分析成為可能。該技術(shù)主要用于：分析基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物、獲取目的基因、合成cDNA探針、構(gòu)建RNA高效轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)。一、

免疫學(xué)工具WB與ELISA各方面比較2024/04/08: 免疫學(xué)檢測(cè)是應(yīng)用免疫學(xué)理論設(shè)計(jì)的一系列測(cè)定抗原、抗體、免疫細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子的實(shí)驗(yàn)手段，用途非常廣泛，既可用于基礎(chǔ)理論和應(yīng)用研究，因此免疫學(xué)研究一直都是生命科學(xué)領(lǐng)域?qū)W術(shù)前沿。免疫印跡WB（WesternBlot）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），是免疫學(xué)常用工具，應(yīng)用于目的蛋白的定位、定性和定量。WB只能半定量,但是可以檢測(cè)細(xì)胞膜蛋白,這點(diǎn)ELISA做不到。ELISA可用定量方法檢測(cè)蛋白,也就是說(shuō)你可以觀察不同濃度刺激物對(duì)目的蛋白的影響。WB是目前一種結(jié)合內(nèi)參對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行半定量的方法，Eli

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)相關(guān)干貨分享2024/04/01: 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定義：為了保證分析測(cè)試結(jié)果具有一定的準(zhǔn)確度，并具有可比性和一致性，常常需要一種用來(lái)校準(zhǔn)儀器、標(biāo)定溶液濃度和評(píng)價(jià)分析方法的物質(zhì)。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)已經(jīng)確定了具有一個(gè)或多個(gè)足夠均勻的特性值的物質(zhì)或材料，作為分析測(cè)量行業(yè)中的“量具"，在校準(zhǔn)測(cè)量?jī)x器和裝置、評(píng)價(jià)測(cè)量分析方法、測(cè)量物質(zhì)或材料特性值和考核分析人員的操作技術(shù)水平，以及在過(guò)程中產(chǎn)品的質(zhì)量控制等領(lǐng)域起著重要的作用。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的特性，通常把標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分為一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。1.一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：主要用于標(biāo)定比它低一級(jí)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、校準(zhǔn)高準(zhǔn)確度的計(jì)量

ELISA檢測(cè)法結(jié)果判斷方法詮釋2024/03/25: ELISA定性測(cè)定的結(jié)果判斷是對(duì)受檢標(biāo)本中是否含有待測(cè)抗原或抗體作出"有"或"無(wú)"的簡(jiǎn)單回答，分別用"陽(yáng)性"、"陰性"表示。"陽(yáng)性"表示該標(biāo)本在該測(cè)定系統(tǒng)中有反應(yīng)。"陰性"則為無(wú)反應(yīng)。用定性判斷法也可得到半定量結(jié)果，即用滴度來(lái)表示反應(yīng)的強(qiáng)度，其實(shí)質(zhì)仍是一個(gè)定性試驗(yàn)。在這種半定量測(cè)定中，將標(biāo)本作一系列稀釋后進(jìn)行試驗(yàn)，呈陽(yáng)性反應(yīng)的稀釋度即為滴度。根據(jù)滴度的高低，可以判斷標(biāo)本反應(yīng)性的強(qiáng)弱，這比觀察不稀釋標(biāo)本呈色的深淺判斷為強(qiáng)陽(yáng)性、弱陽(yáng)性具定量意義。在間接法和夾心法ELSIA中，陽(yáng)性孔呈色深于陰性孔。在

血清的儲(chǔ)存與應(yīng)用探究2024/03/18: 血清是由血漿去除纖維蛋白原而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。血清是血漿中不含纖維蛋白原的膠狀液體,具有維持血液的正常粘度、酸堿度、滲透壓等作用。實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)確的應(yīng)用及保存血清，才能使血清施展應(yīng)有的效果。一、血清儲(chǔ)存：1.應(yīng)用前處理:大部分血清在應(yīng)用前必需滅活處置，即560C30分鐘。滅活的目標(biāo)是去除血清中的補(bǔ)體身分，防止補(bǔ)體對(duì)細(xì)胞發(fā)生毒性同化。血清顛末滅活也會(huì)喪失一些對(duì)細(xì)胞無(wú)利的成分，如發(fā)展

ELISA定性測(cè)定結(jié)果判斷方法介紹2024/03/11: ELISA定性測(cè)定的結(jié)果判斷是對(duì)受檢標(biāo)本中是否含有待測(cè)抗原或抗體作出"有"或"無(wú)"的簡(jiǎn)單回答，分別用"陽(yáng)性"、"陰性"表示。"陽(yáng)性"表示該標(biāo)本在該測(cè)定系統(tǒng)中有反應(yīng)。"陰性"則為無(wú)反應(yīng)。用定性判斷法也可得到半定量結(jié)果，即用滴度來(lái)表示反應(yīng)的強(qiáng)度，其實(shí)質(zhì)仍是一個(gè)定性試驗(yàn)。在這種半定量測(cè)定中，將標(biāo)本作一系列稀釋后進(jìn)行試驗(yàn)，呈陽(yáng)性反應(yīng)的稀釋度即為滴度。根據(jù)滴度的高低，可以判斷標(biāo)本反應(yīng)性的強(qiáng)弱，這比觀察不稀釋標(biāo)本呈色的深淺判斷為強(qiáng)陽(yáng)性、弱陽(yáng)性具定量意義。在間接法和夾心法ELSIA中，陽(yáng)性孔呈色深于陰性孔。在

適合實(shí)驗(yàn)的ELISA試劑盒選擇參照原則2024/03/04: 目前市場(chǎng)上的ELISA試劑盒質(zhì)量參差不齊，試劑盒數(shù)以千計(jì)，供應(yīng)商的科研實(shí)力也相差懸殊，試劑盒的質(zhì)量好壞會(huì)嚴(yán)重影響到檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此如何去挑選適合自己的試劑盒就顯得特別重要。以下為歸納ELISA試劑盒選擇需考慮的要素，供參考。1、基于研究物種選擇如果樣品來(lái)自經(jīng)典模型，如人、小鼠和大鼠，則可以相對(duì)輕松地找到經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的ELISA試劑盒。但如果樣品來(lái)自猴子等非經(jīng)典模型，則可獲得的商品ELISA試劑盒數(shù)量有限。如果要檢測(cè)這些物種的指標(biāo)，最好要對(duì)待檢物(如有種屬差異性)進(jìn)行同源性分析以及試劑盒的種屬交

細(xì)胞因子的生物學(xué)活性及種類(lèi)介紹2024/02/26: 細(xì)胞因子是由免疫原、絲裂原或其他刺激劑誘導(dǎo)多種細(xì)胞合成并分泌的具有廣泛生物學(xué)活性的低分子質(zhì)量蛋白或多肽，參與細(xì)胞間信號(hào)傳導(dǎo)和相互作用。人體內(nèi)的許多類(lèi)型的細(xì)胞都能產(chǎn)生細(xì)胞因子，而且細(xì)胞因子的產(chǎn)生通常是由抗原刺激的。細(xì)胞因子將信號(hào)從一個(gè)細(xì)胞傳遞到另一個(gè)細(xì)胞，以各種方式改變細(xì)胞行為，調(diào)節(jié)機(jī)體對(duì)潛在威脅的免疫反應(yīng)，這些威脅可能是病原體，如病毒、細(xì)菌、寄生蟲(chóng)或毒素。研究表明，單個(gè)細(xì)胞因子可以影響幾種不同類(lèi)型的細(xì)胞，并且可以發(fā)揮一種功能，而幾種不同的細(xì)胞因子可以發(fā)揮相同的功能，不同類(lèi)型的細(xì)胞對(duì)同一種細(xì)胞因子

PCR反應(yīng)擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn)問(wèn)題分析2024/02/18: 聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)是在體外進(jìn)行的由引物介導(dǎo)的酶促DNA擴(kuò)增反應(yīng)。PCR的原理是在模板DNA、PCR引物、四種脫氧核糖核苷酸(dNTP)及適當(dāng)濃度的Mg2+存在的條件下，依賴(lài)于DNA聚合酶的體外酶促合成反應(yīng)。兩個(gè)引物分別位于靶序列兩端，同兩條模板的3’端互補(bǔ)，由此限定擴(kuò)增片段。PCR反應(yīng)由一系列的變性→退火→延伸反復(fù)循環(huán)構(gòu)成，即在高溫下模板雙鏈DNA變性解鏈，然后在較低溫度下同過(guò)量引物退火，再在適中溫度下由DNA聚合酶催化進(jìn)行延伸。理論上，經(jīng)過(guò)N次循環(huán)可使特定片段擴(kuò)增到2n-1，考慮到擴(kuò)增

介紹酶解聚方法獲得純化的原代細(xì)胞2024/02/05: 原代細(xì)胞分離的方法有多種，常用的是機(jī)械解離細(xì)胞法、酶學(xué)解離細(xì)胞法以及螯合劑解離細(xì)胞法，下面我們就介紹酶解聚方法獲得純化的原代細(xì)胞。1、胰蛋白酶純化法●在去除不需要的組織后，使用無(wú)菌的解剖刀和剪子把剩余的組織切成3~4mm小片，通過(guò)懸浮在無(wú)鈣鎂的平衡鹽溶液中清洗組織碎片。讓組織碎片沉淀，去除上清液。重復(fù)清洗2到3次。●將盛有組織碎片的容器置于冰上，去除殘留的上清液。加入0.25%溶解在無(wú)鈣鎂的平衡鹽溶液中的胰蛋白酶（100mg組織加入1ml胰蛋白酶）。●在4℃孵育6到18小時(shí)，使幾乎沒(méi)有胰蛋白酶活

實(shí)驗(yàn)室推選：標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的特點(diǎn)與制備2024/01/29: 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是為了保證分析測(cè)試結(jié)果具有一定的準(zhǔn)確度，并具有可比性和一致性，常常需要一種用來(lái)校準(zhǔn)儀器、標(biāo)定溶液濃度和評(píng)價(jià)分析方法的物質(zhì)。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)要求材質(zhì)均勻，性能穩(wěn)定，批量生產(chǎn)，準(zhǔn)確定值，有標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)已經(jīng)確定了具有一個(gè)或多個(gè)足夠均勻的特性值的物質(zhì)或材料，作為分析測(cè)量行業(yè)中的“量具"，在校準(zhǔn)測(cè)量?jī)x器和裝置、評(píng)價(jià)測(cè)量分析方法、測(cè)量物質(zhì)或材料特性值和考核分析人員的操作技術(shù)水平，以及在生產(chǎn)過(guò)程中產(chǎn)品的質(zhì)量控制等領(lǐng)域起著重要的作用。根據(jù)定義標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)具有三個(gè)顯著特點(diǎn)：1.具有特性量值的準(zhǔn)確性、均勻性、

皂素測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)2024/01/22: 皂素測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)試劑盒特點(diǎn):1、高效、靈敏、特異的抗體;2、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性;3、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體;4、適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類(lèi)型;5、節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。試劑盒性能：1.靈敏度：zui小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。2.特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。3.重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。實(shí)驗(yàn)原理:本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中血清素/血清胺(ST)水平。用純化

資訊推送：細(xì)胞凍存實(shí)驗(yàn)必看2024/01/15: 細(xì)胞凍存的必要性：首先，細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，考慮到細(xì)胞株傳代次數(shù)逐漸增加后，細(xì)胞變異的可能性將增大，繼續(xù)培養(yǎng)的話細(xì)胞株可能會(huì)出現(xiàn)老化、狀態(tài)下降、丟失一些該細(xì)胞的特性的現(xiàn)象，對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)造成影響；此外，如果該細(xì)胞株特別珍貴，屬于實(shí)驗(yàn)室重要資源，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行大規(guī)模的保存，能有效降低課題項(xiàng)目執(zhí)行的風(fēng)險(xiǎn);最后，就是常見(jiàn)的風(fēng)險(xiǎn)規(guī)避問(wèn)題，正所謂人有失手、馬有失蹄，再熟練的實(shí)驗(yàn)操作者、再厲害的實(shí)驗(yàn)設(shè)備也是有出問(wèn)題的可能，一旦出問(wèn)題，意味著細(xì)胞資源的損失。基于以上幾點(diǎn)，細(xì)胞凍存對(duì)于一個(gè)實(shí)驗(yàn)室或個(gè)人來(lái)說(shuō)，是非常必要的操作

原代細(xì)胞培養(yǎng)具體方法步驟敘述2024/01/08: 一、準(zhǔn)備工作準(zhǔn)備工作對(duì)開(kāi)展細(xì)胞培養(yǎng)異常重要，工作量也較大，應(yīng)給予足夠的重視，推備工作中某一環(huán)節(jié)的疏忽可導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗或無(wú)法進(jìn)行。準(zhǔn)備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無(wú)菌室或超凈臺(tái)的清潔與消毒，培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試，具體內(nèi)容可參閱有關(guān)文獻(xiàn)。二、取材在無(wú)菌環(huán)境下從機(jī)體取出某種組織細(xì)胞（視實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩ǎ?jīng)過(guò)一定的處理（如消化分散細(xì)胞、分離等）后接入培養(yǎng)器血中，這一過(guò)程稱(chēng)為取材。如是細(xì)胞株的擴(kuò)大培養(yǎng)則無(wú)取材這一過(guò)程。機(jī)體取出的組織細(xì)胞的首ci培養(yǎng)稱(chēng)為原代

無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基中添加哪些組分起作用探討2024/01/02: 無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基（serumfreemedium，SFM）是一種特殊的細(xì)胞培養(yǎng)基，其中不含胎牛血清或其他血清成分。相對(duì)于傳統(tǒng)的含有血清的培養(yǎng)基，無(wú)血清培養(yǎng)基具有更高的質(zhì)量控制、更穩(wěn)定的性能、更好的可重復(fù)性以及更好的細(xì)胞增殖和生長(zhǎng)能力。因此，無(wú)血清培養(yǎng)基已經(jīng)成為細(xì)胞培養(yǎng)和生物技術(shù)領(lǐng)域中的一種重要工具和技術(shù)，但并不是所有細(xì)胞都適合在無(wú)血清培養(yǎng)基中生長(zhǎng)（例如原代細(xì)胞和一些非癌細(xì)胞系，通常需要更加特殊的培養(yǎng)條件才能在無(wú)血清培養(yǎng)基中生長(zhǎng)和繁殖。這些條件可以包括添加特殊的生長(zhǎng)因子、細(xì)胞外基質(zhì)和其他補(bǔ)充物，以

培養(yǎng)基種類(lèi)及選擇介紹2023/12/26: 培養(yǎng)基是指由人工方法配制而成，供微生物培養(yǎng)、分離、鑒別、研究和保存用的混合營(yíng)養(yǎng)物制品，英文為culturemedium或medium。微生物的生長(zhǎng)繁殖，需要一定的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和適宜的環(huán)境條件。一、下面具體介紹培養(yǎng)基種類(lèi)：1、按組成成分分類(lèi)：純化學(xué)培養(yǎng)基：僅含有已知分子結(jié)構(gòu)和純度的化學(xué)成分的培養(yǎng)基。未定義和部分定義的化學(xué)培養(yǎng)基：全部或部分由天然物質(zhì)，加工過(guò)的物質(zhì)或其他不純的化學(xué)物質(zhì)構(gòu)成的培養(yǎng)基。2、按狀態(tài)分類(lèi)：液體培養(yǎng)基：一種或多種成分組成的水溶液（如：蛋白胨水，營(yíng)養(yǎng)肉湯）。固體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基：

PCR反應(yīng) 模板核酸的提取辦法匯總2023/12/18: PCR反應(yīng)的關(guān)鍵因素主要有引物的選擇與設(shè)計(jì)，酶的質(zhì)量。模板的制備，在前二者都穩(wěn)定可行的情況下，PCR模板的制備尤為重要。模板處理方法的選擇及操作人員的基本技能，決定分離模板核酸(DNA或RNA)的質(zhì)和量及PCR的成敗。而提高模板核酸質(zhì)量的關(guān)鍵是除去雜質(zhì)(蛋白質(zhì)、酶、脂肪等)。除去抑制TaqDNA聚合酶活性抑制因子，提高模板核酸的產(chǎn)量。傳統(tǒng)的核酸模板提取方法是采用去垢劑如SDS等來(lái)破壞細(xì)胞組份，溶解細(xì)胞膜，使蛋白質(zhì)變性，再用蛋白酶K來(lái)消化去除蛋白質(zhì)，尤其是與DNA結(jié)合的蛋白質(zhì)，再用酚:抽提，然后用

各種常見(jiàn)的血清不同點(diǎn)比較2023/12/11: 血清是血漿凝固后分離出來(lái)的液體。當(dāng)血漿在離心過(guò)程中凝固后，血漿中的凝血因子會(huì)被消耗掉，形成透明液體的血清。因此，血清中不含凝血因子，但含有血漿中其他的成分，如蛋白質(zhì)、電解質(zhì)、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)等。常見(jiàn)的血清有胎牛血清、新生牛血清與小牛血清等，下面分它們的不同點(diǎn)：1.血清類(lèi)別牛血清類(lèi)別胎齡胎牛血清（FBS)胎兒(母牛懷孕3-8個(gè)月)新生牛血清(NCS)出生10日內(nèi)小牛血清（BCS）16-22周供體血清成年牛2.采血方式不同胎牛血清：母牛懷孕3-8個(gè)月時(shí)，采用剖腹心臟密閉穿刺取血新生牛血清、小牛血清、供體牛血

各種常見(jiàn)種類(lèi)PCR概述介紹2023/12/04: PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PolymeraseChainReaction）的簡(jiǎn)稱(chēng)，是一種體外擴(kuò)增特定DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)。PCR的常見(jiàn)種類(lèi)分述如下：1、普通PCR普通PCR即一代PCR，使用普通PCR擴(kuò)增儀擴(kuò)增靶基因，并通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行定性分析。2、實(shí)時(shí)熒光定量PCR（QuantitativeReal-timePCR,qPCR）實(shí)時(shí)熒光定量PCR，也叫Real-TimePCR，即二代PCR，是指在PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系中加入熒光染料或者熒光基團(tuán)，在整個(gè)PCR過(guò)程中通過(guò)收集熒光信號(hào)實(shí)時(shí)

抗體的科學(xué)保存條件分享2023/11/28: 抗體的科學(xué)保存條件：1、抗體濃度抗體濃度過(guò)低（2、多克隆抗體多克隆抗體在血清中于-20℃保存十年其活性損失不大。然而，一旦抗體被純化后，儲(chǔ)存在50%的甘油中于-20℃保存，即使沒(méi)有凍融，其活性的損失也可以觀察到，盡管其進(jìn)程仍然非常緩慢。即使沒(méi)有甘油，只要你不經(jīng)常凍融，抗體也可以存儲(chǔ)在-20℃幾年甚至幾十年。另一個(gè)重要的事情是，該抗體濃度應(yīng)高于1毫克/毫升，因?yàn)橄〉目贵w容易失去活性而且容易造成物理吸附導(dǎo)致的損失。3、單克隆抗體單克隆抗體可以保存在50％的甘油存放于-20℃。也可以將其保存在飽和硫酸

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