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PCR產物常用的直接純化技術方法2025/02/14

PCR產物一般都含有過量的引物、TaqDNA酶及dNTP，這些成分的存在將直接影響到后續(xù)的酶切、雙脫氧PCR測序反應等過程,因此有必要除去。目前核酸純化的方法有很多,商用化試劑盒的出現使得DNA的純化過程變得更加簡便快捷。PCR擴增完成后需要進行瓊脂糖凝膠電泳檢測，在條帶單一無其他雜帶的情況下，可以直接對產物進行純化，常見的純化方法有：一、產物直接純化：1、硅膠層析柱法原理：大多數離心柱中吸附DNA的是一層硅膠膜，實際上就是一層玻璃纖維，其表面有大量修飾的硅羥基（Si-OH），硅羥基在溶液中解離

ELISA實驗是否需重做判斷指南2025/02/06

ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術。在檢測時，受檢標本（測定其中的抗原）與固相載體表面的抗體反應。洗滌后加入酶標記的抗體，通過反應結合在固相載體上。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。ELISA實驗過程中時常發(fā)生重做的情況，實驗是否需要重新進行，判斷可以根據評估標準曲線、檢測限、對照反

關于蛋白質沉淀鹽析方法探究2025/01/21

蛋白質通過鹽析的辦法沉淀的原理是降低蛋白質的溶解度，使蛋白質凝聚而從溶液中析出。蛋白質的沉淀（proteinprecipitation），沉淀是溶液中的溶質由液相變成固相析出的過程。蛋白質從溶液中析出的現象，稱為蛋白質的沉淀。蛋白質沉淀常用的方法有鹽析、等電點沉淀、有機溶劑沉淀、生物堿試劑與某些酸沉淀等。在生化制備中，沉淀主要用于濃縮目的，或用于除去留在液相或沉淀在固相中的非必要成分。在生化制備中常用的鹽析法多用于各種蛋白質和酶的分離純化。一般來說，所有固體溶質都可以在溶液中加入中性鹽而沉淀析出

實時熒光定量PCR 方法原理簡述2025/01/14

目前主流的實時熒光定量PCR（QuantitativeReal-timePCR）方法分為染料法和探針法，染料法以SYBRGreen法為代表，SYBRGreen染料游離時熒光微弱，但一旦與雙鏈DNA結合后，熒光大大增強，反應管中的熒光強度與反應管中雙鏈DNA的數量成正比例關系，因此可以通過檢測熒光計算反應管中產生的雙鏈DNA（PCR產物）的量，但該方法沒有特異性，非特異性擴增的產物也會被計入。對于探針法來說，反應管中的熒光強度也是檢測PCR產物量的依據。但其發(fā)光機制卻與染料法全不同。根據所使用的技

微生物培養(yǎng)基配置指南2025/01/07

培養(yǎng)基(culturemedium)是人工配制的，適合微生物生長、分離鑒別的營養(yǎng)基礎。一般基礎培養(yǎng)基中古有蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸粉、氯化鈉、瓊脂等基本營養(yǎng)物質。微生物培養(yǎng)基應用范圍很廣。例如，無菌試驗培養(yǎng)基可檢查藥品、生物制品是否污染細菌，它直接關系到人民用藥安全；在臨床及食品衛(wèi)生檢驗中常用選擇、鑒別培養(yǎng)基，此類培養(yǎng)基中根據用途不同，需要加入抑菌劑、指示劑、血液、糖等試劑，以利于特定細菌的分離與鑒別，需要使細菌大量生長、繁殖的各類培養(yǎng)基；病毒培養(yǎng)及疫苗中則需用組織細胞培養(yǎng)液，主要成分為多種氨基

抗體的作用功能及局限性介紹2024/12/24

抗體是一種被免疫系統(tǒng)用來鑒別與中和外來物質如細菌、病毒等的大型Y形蛋白質，是一種免疫球蛋白。它的產生是由于抗原侵入人體后引起各種免疫細胞相互作用，使淋巴細胞中的B細胞增殖分化而形成漿細胞（效應B細胞），漿細胞可產生分泌抗體。抗體的分類：按作用對象，可將其分為抗毒素、抗菌抗體、抗病毒抗體和親細胞抗體。抗體的作用機理：(1)、抗體在抗原顆粒和吞噬細胞之間“搭橋”，從而加強了吞噬細胞的吞噬作用。(2)、抗體與相應顆粒性抗原結合后，改變抗原表面電荷，降低吞噬細胞與抗原之間的靜電斥力。(3)、抗體可中和某

ELISA酶標儀的檢測單位和檢測值計算2024/12/17

ELISA酶聯(lián)免疫吸附試驗方法簡稱酶標法，是標記技術中的一種，是從熒光抗體技術，同位素免疫技術發(fā)展而來的一種敏感，特異，快速并且能自動化的現代技術。酶標法的基本原理是將抗原或抗體與酶用膠聯(lián)劑結合為酶標抗原或抗體，此酶標抗原或抗體可與固相載體上或組織內相應抗原或抗體發(fā)生特異反應，并牢固地結合形成仍保持活性的免疫復合物。當加入相應底物時，底物被酶催化而呈現出相應反應顏色。顏色深淺與相應抗原或抗體含量成正比。由于此技術是建立在抗原-抗體反應和酶的高效催化作用的基礎上，因此，具有高度的靈敏性和特異性，是

活性氧 (ROS) 含量檢測試劑盒實驗詳細說明2024/12/09

活性氧含量檢測試劑盒通過使用特異性探針或底物與ROS發(fā)生化學反應，從而實現對ROS含量的測定。這種檢測方法基于探針或底物與ROS的特異性反應，通常使用熒光分光光度計或流式細胞術進行測量。活性氧含量檢測試劑盒具有以下幾個優(yōu)勢：1.高選擇性：活性氧含量檢測試劑盒能夠特異性地檢測ROS，避免了其他化學物質的干擾，確保測量結果的準確性。2.高靈敏度：活性氧含量檢測試劑盒能夠檢測到極低濃度的ROS，使研究人員能夠對ROS含量進行準確測量，揭示微小變化對細胞功能和疾病發(fā)展的影響。3.快速和簡便：活性氧含量檢

PCR基因擴增儀應用詳細說明2024/12/03

一、原理PCR技術的本質是體外核酸擴增，加熱使雙鏈DNA解開螺旋，在退火溫度條件下引物同模板DNA雜交，在TaqDNA聚合酶，dNTPs，Mg2+和合適pH緩沖液存在條件下延伸引物，重復“變性→退火→引物延伸”過程至25～40個循環(huán)，呈指數級擴大待測樣本中的核酸拷貝數。二、分類1.普通的PCR儀一次PCR擴增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀，又叫傳統(tǒng)的PCR儀。用途：主要是做一些簡單的、對單一退火溫度的目的基因進行擴增。（1）梯度PCR儀：一次PCR擴增可以設置一系列不同的退火溫度條件(溫度梯

酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）實驗各封閉劑優(yōu)缺點2024/11/25

酶聯(lián)免疫吸附測定（Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay，ELISA）是免疫學和分子生物學中廣泛使用的實驗室技術，是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識別和結合原理，對待測抗體或者抗原進行分析測定的方法。封閉（blocking）是繼包被之后用高濃度的無關蛋白質溶液再包被的過程。抗原或抗體包被時所用的濃度較低，吸收后固相載體表面尚有未被占據的空隙，封閉就是讓大量不相關的蛋白質充填這些空隙，從而排斥在ELISA試劑盒其后的步驟中干擾物質的再吸附。在免疫學實

PCR實驗DNA復制酶系作用順序2024/11/18

DNA的半保留復制：DNA復制時，以親代DNA的兩條鏈分別作為模板，在DNA聚合酶的催化下，按堿基互補的原則合成兩條與模板鏈互補的新鏈，組成新的DNA分子，新形成的兩個子代DNA與親代DNA的堿基順序全一樣。由于子代DNA分子中一條鏈來自親代，而另一條鏈是新合成的，因此這種復制方式稱為半保留復制(semi-conservativereplication)。DNA的復制過程：DNA復制酶系作用順序：1.拓撲異構酶使DNA超螺旋結構解開，形成其基本的雙螺旋結構。2.解鏈酶使DNA雙螺旋結構解開，堿基

PCR血液標本保存方法及注意事項2024/11/13

最好是用淋巴細胞分離液把單個核細胞分離出來，然后-80℃保存。外周血單個核細胞（Peripheralbloodmononuclearcell,PBMC）的分離是免疫學研究中的一項基本技術。目前國內外分離PBMC的常用方法是葡聚糖-泛影葡胺密度梯度離心法（ficoll-hypaquedensitygradientcentrifugation），用此方法分離PBMC純度可達95％，淋巴細胞約占90％，其中T淋巴細胞占80％，B淋巴細胞占4～10％。ficoll-hypaque混合溶液，又稱淋巴細胞分

培養(yǎng)基的配置基本原則匯集2024/10/28

培養(yǎng)基是指供給微生物、植物或動物（或組織）生長繁殖的，由不同營養(yǎng)物質組合配制而成的營養(yǎng)基質。一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽（包括微量元素）、維生素和水等幾大類物質。培養(yǎng)基既是提供細胞營養(yǎng)和促使細胞增殖的基礎物質，也是細胞生長和繁殖的生存環(huán)境。培養(yǎng)基的配置基本原則：1、選擇適宜的營養(yǎng)物質總體而言，所有微生物生長繁殖均需要培養(yǎng)基含有碳源、氮源、無機鹽、生長因子、水及能源，但由于微生物營養(yǎng)類型復雜，不同微生物對營養(yǎng)物質的需求是不一樣的，因此首先要根據不同微生物的營養(yǎng)需求配制針對性強的培養(yǎng)基。自

?免疫PCR實驗主要程序及步驟2024/10/21

PCR（聚合酶鏈式反應）是一種分子生物學技術，現在已經被廣泛運用于臨床和實驗室，用于擴增特定的DNA片段。它的基本原理就是在體外模擬細胞內DNA復制的條件，最終完成特定基因的體外復制。主要程序：（1）抗原+生物素化抗體→抗原-生物素化抗體復合物；（2）加親合素→抗原-生物素化抗體-親合素復合物；（3）加生物素化DNA→抗原-生物素化抗體-親合素-生物素化DNA；（4）PCR擴增生物素化DNA部分。實驗步驟：（1）制備生物素化DNA將噬粒BLuescriptskt,用生物素標記的M13引物進行PC

實時熒光定量 PCR (RT-qPCR)原理及熒光技術方法2024/10/14

實時熒光定量PCR(RT-qPCR)是一種用于實時擴增和檢測特定DNA或RNA序列的分子生物學技術。該方法利用熒光染料或探針，當與擴增的DNA或RNA分子結合時會發(fā)出信號，從而可以對目標序列進行量化。RT-qPCR通常用于基因表達分析、病毒載量定量和基因突變檢測等應用。RT-qPCR原理的三個主要步驟：1、反轉錄：1）、使用逆轉錄酶和特定引物將RNA樣品反轉錄成cDNA。2）、該步驟將RNA模板轉化為更穩(wěn)定且可擴增的DNA形式。3）、反轉錄過程中使用特定引物。2、PCR擴增：1）、使用特定引物對

影響培養(yǎng)基滅菌效果因素有什么？2024/10/08

滅菌的方法很多，在實驗室可以使用干熱滅菌、對于環(huán)境可以使用化學試劑滅菌，但化學試劑的滅菌方法有很大的限制。在工業(yè)生產中，對于培養(yǎng)基、管道、設備的滅菌，通常采用蒸汽加熱到一定的溫度，并保溫一段時間的滅菌方法，稱之為濕熱滅菌。濕熱滅菌的顯著優(yōu)點是：使用方便，無污染，而且其冷凝水可以直接冷凝在培養(yǎng)基中，也可以通過管道排出。培養(yǎng)基滅菌的效果，影響因素很多，除了培養(yǎng)基內雜菌的種類和數量，滅菌溫度的高低，時間長短外，還取決于：1.營養(yǎng)成分的保持濕熱滅菌時，微生物被殺死的同時，培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分也遭到了一定的破

微生物培養(yǎng)基相關資料匯總2024/09/29

培養(yǎng)基是液體、半固體或固體形式的，含天然或合成成分，用于保證微生物繁殖或保持其活力的物質。培養(yǎng)基的制備和使用是微生物實驗室檢測工作的重要環(huán)節(jié)，培養(yǎng)基自身質量的優(yōu)劣、保存是否得當、配制使用是否正確等都直接影響到檢測結果的準確性。一、培養(yǎng)基的購置與驗收1.購置從培養(yǎng)基自身的質量來看，不同生產廠家的產品，甚至同一廠家不同批號的產品都會存在差異。依據ISO/IEC17025《檢測和校準實驗室能力的通用要求》，對培養(yǎng)基的供應企業(yè)進行評價后選擇合格的供應商，這是培養(yǎng)基購買過程中重要的步驟。應選擇產品市場信譽

驗證生化試劑盒適用方式分述2024/09/23

通常生化試劑盒可分為液體單試劑和液體雙試劑，前者特別適用于半自動生化分析儀和小型自動生化分析儀，使用方便，缺點是穩(wěn)定性較差。與單試劑相比，雙試劑提高了抗干擾能力，具有穩(wěn)定性能較好，可消除樣品自身空白等特點。此外還有多項同測組合試劑、濃縮試劑等。對新的試劑盒，我們首先要查看其資質是否齊全，是否為合法有效試劑，是否有相關的臨床試驗驗證等。其次，在本實驗室，可做以下工作來進行驗證是否適合使用。一、試劑空白吸光度用蒸餾水做空白，用zhi定的空白液加入試劑作為樣品測試，在測試主波長下，記錄測試啟動時的吸光

ELISA專用酶標儀故障解決排除大全2024/09/19

酶標儀即酶聯(lián)免疫檢測儀，是酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）的專用儀器又稱微孔板檢測器，酶標儀檢測技術是一種高通量微孔板檢測技術，其核心是一個比色計，利用比色法來進行分析。因其高靈敏度、高效率及操作簡便，被廣泛應用于生命科學、生物制藥、體外診斷、食品安全、環(huán)境科學等多個領域。任何儀器在使用時往往都會出現一些小故障，酶標儀儀器也一樣，下面將與大家分享酶標儀的一些常見故障及處理方法：1、打印機不工作⑴、酶標儀后部DIL開關設置不正確。DIL標準設置:左下下下下下下上下上上下下上下上上右(人站在儀器后部，

實驗室質量控制主要方法2024/09/09

實驗室質量控制是一系列確保檢測結果準確性和可靠性的措施和程序。實驗室質量控制主要包括以下幾方法：標準物質監(jiān)控、人員比對、方法比對、儀器設備比對、留樣復測、空白測試、重復測試、回收率試驗、校準曲線的核查以及使用質量控制圖等。一、標準物質監(jiān)控1.1、質控過程通常的做法是實驗室直接用合適的有證標準物質或內部標準樣品作為監(jiān)控樣品，定期或不定期將監(jiān)控樣品以比對樣或密碼樣的形式，與樣品檢測以相同的流程和方法同時進行，檢測室完成后上報檢測結果給相關質量控制人員，也可由檢測人員自行安排在樣品檢測時同時插人標準物