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PCR實(shí)驗(yàn)DNA復(fù)制酶系作用順序

來源:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司   2024年11月18日 14:29  

DNA的半保留復(fù)制:

DNA復(fù)制時,以親代DNA的兩條鏈分別作為模板,在DNA聚合酶的催化下,按堿基互補(bǔ)的原則合成兩條與模板鏈互補(bǔ)的新鏈,組成新的DNA分子,新形成的兩個子代DNA與親代DNA的堿基順序全一樣。由于子代DNA分子中一條鏈來自親代,而另一條鏈?zhǔn)切潞铣傻模虼诉@種復(fù)制方式稱為半保留復(fù)制(semi-conservative replication)。

DNA的復(fù)制過程:


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DNA復(fù)制酶系作用順序:

1. 拓?fù)洚悩?gòu)酶
使DNA超螺旋結(jié)構(gòu)解開,形成其基本的雙螺旋結(jié)構(gòu)。

2. 解鏈酶
使DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)解開,堿基間氫鍵斷裂,形成兩條單鏈DNA,構(gòu)成”復(fù)制叉“。

3. 單鏈DNA結(jié)合蛋白
單鏈DNA結(jié)合蛋白結(jié)合在兩條單鏈DNA上,穩(wěn)定單鏈DNA,阻止DNA復(fù)性,避免被核酸酶降解,便于復(fù)制子代DNA 。

4. 引物酶
是一種依賴DNA的RNA聚合酶,該酶以DNA為模板,聚合一段RNA短鏈引物,以提供自由的3'-OH,形成引發(fā)體,使子代DNA鏈能夠開始聚合。

5. DNA聚合酶
由于DNA聚合酶只能以5'→3'方向聚合子代DNA鏈,即模板DNA鏈的方向必須為3'→5'。因此,分別以兩條親代DNA鏈作為模板聚合子代DNA鏈時的方式是不同的。

以3'→5'方向的親代DNA鏈作模板的子鏈,在復(fù)制時連續(xù)合成,子鏈的聚合方向?yàn)?'→3',這一條新合成的子鏈被稱為前導(dǎo)鏈(leading strand)。以5'→3'方向的親代DNA鏈為模板,合成子鏈的過程不連續(xù),這條鏈被稱為隨從鏈(lagging strand)或滯后鏈。

DNA雙鏈在復(fù)制時逐步解開,因此隨從鏈的合成是一段一段的。DNA在復(fù)制時,由隨從鏈所形成的一些子代DNA短鏈稱為岡崎片段 (Okazaki fragment)。

6. DNA連接酶
在DNA連接酶的催化下,形成最后一個磷酸酯鍵,將岡崎片段連接起來,形成完整的DNA長鏈。


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