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HE染色實驗中常見問題及應對措施2023/04/25

HE染色實驗常見問題及解決方案HE染色是石蠟切片技術中常用的染色方法之一，簡稱為蘇木精-伊紅染色法。該方法使用堿性的蘇木精染液將細胞核內的染色質和胞質內的核酸染成紫藍色，同時使用酸性染料伊紅將細胞質和細胞外基質中的成分染成紅色。1、切片出現白色斑點原因：(1)烘片溫度過低，導致玻片未干透；(2)切片在二甲苯中停留時間過短；(3)二甲苯使用時間過長，導致脫蠟不效果不好。對策：若玻片未干透，先用無水乙醇去除水分，再重新脫蠟。若斑點是由于停留時間過短或使用時間過長造成的，則需重新操作，延長停留時間或更

穩定細胞株的篩選步驟2023/04/24

穩定細胞株是一種常用于基因表達、藥物篩選和蛋白質表達等領域的工具。但是，穩定細胞株的篩選需要經過一系列的步驟和實驗，下面介紹一下穩定細胞株篩選的兩種方法和穩定細胞株的篩選簡要步驟：一、質粒轉染法先把質粒整合到染色體上后，用相應的質粒DNA中的抗性標志來篩選該細胞系，單克隆篩選穩定細胞株。1、篩選濃度測定，以10~14天細胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度；2、進行細胞接種，轉染實驗前天接種細胞，各種細胞的平板密度依據各種細胞的生長率和細胞形狀而定。進行轉染當天細胞密度應達到60%~80%覆蓋；3、

紫外可見分光光度計操作標準SOP2023/04/21

紫外可見分光光度計操作維護標準SOP1.0適用范圍：本規程適用于制藥行業質量控制實驗室安裝的紫外可見分光光度計操作維護和清潔標準2.0職責：QC員：負責儀器的操作和維護。QC負責人/經理：負責儀器操作標準程序的問責制和有效實施。3.0定義-分光光度計：測量樣品在固定波長或較寬波長掃描范圍內的吸光度，并在單色光束通過樣品時產生光譜的裝置。4.0紫外可見分光光度計操作步驟：4.1操作前確保儀器清潔并校準。打開儀器和與儀器連接的計算機的主電源。4.3接通電源后，分光光度計開始初始化，檢查所有參數的功能

塑料離心管和玻璃離心管選購指南2023/04/21

市場上常見離心管主要分為兩種：即：塑料離心管和玻璃離心管，也有少數是鋼制離心管。那么這些不同材質的離心管有什么區別呢?下面小編就來介紹一下塑料離心管和玻璃離心管的區別。玻璃離心管玻璃離心管是由玻璃制成的，不同廠家可能使用的玻璃成分不同，所以強度上可能會略有差異。我們的普通玻璃試管可以承受的相對離心力(RCF)通常小于3000g，而硼硅玻璃管一般可以承受超過10000g以上的相對離心力。但由于玻璃離心管質量易碎，所以玻璃管一般不用于高速離心機，用得也不多。由于玻璃本身的特性，它具有良好的化學穩定性

細胞凋亡實驗步驟及注意事項2023/04/19

一、實驗目的1、掌屋凋亡細胞的形態特征2、學會用熒光探針對細胞進行雙標記來檢測正常活細胞、凋亡細胞和壞死細胞的方法二、實驗原理細胞死亡根據其性質、起源及生物學意義區分為凋亡和壞死兩種不同類型。凋亡普遍存在于生命界，在生物個體和生存中起著非常重要的作用。它是細胞在一定生理條件下一系列順序發生事件的組合，是細胞遵循一定規律自己結束生命的自主控制過程。細胞凋亡具有可鑒別的形態學和生物化學特征。在形態上可見凋亡細胞與周圍細胞脫離接觸，細胞變園，細胞膜向內皺縮、胞漿濃縮、內質網擴張、細胞核固縮破裂呈團塊狀

慢病毒包裝常見問題匯總2023/04/14

Q:什么是MOI？A:在微生物學中，MOI是病原體(如噬菌體或病毒、細菌等)與感染目標(如細胞)的比率。對于病毒，MOI是病毒顆粒數量與特定空間中存在的目標細胞數量的比率。通?？蓪⒛持昙毎?0%被感染時所用的病毒顆粒數和細胞數目的比值作為該株細胞的MOI。Q：如何稀釋病毒？A：您可使用完培、PBS液等將病毒稀釋到需要的滴度。如將滴度為5x109TU/ml的病毒稀釋到1x109TU/ml，則需取20µl病毒液加入到80µl的完培中。Q：用于病毒感染的細胞接種量是多少？A:根據細胞增殖的速度調整細

慢病毒包裝步驟2023/04/13

1.重組慢病毒的制備Day1:匯合度90%的10cmdishsHEK293T細胞（~6×107/dish）按1：1比例傳代至15cmdishs，第二天細胞匯合度達到90%-95%（~1.5×108/dish），培養基為Gibico高糖DMEM培養基（含10%FBS）。Day2:轉染前2-3個小時更換培養基（含10%FBS)；2)按照以下比例配制轉染試劑：Mix1體積μlMix2量DMEM（無FBS）1000μlDMEM（無FBS）1000μl目的基因質粒25μgVGF190μl（1μg/μl）P

病毒實驗原理和慢病毒包裝系統介紹2023/04/13

慢病毒是一種有包膜的RNA病毒，直徑為80-120nm，呈二十面體對稱結構、球形。病毒顆粒最外層是包膜(包膜蛋白決定了感染細胞的類型)，再往里依次為基質蛋白和衣殼，最里面是兩條相同的正股RNA鏈和酶(逆轉錄酶、整合酶和蛋白酶)。慢病毒實驗原理慢病毒（Lentivirus）是逆轉錄病毒的一種，基因組為雙鏈RNA。但區別于一般的逆轉錄病毒，慢病毒具有更廣的宿主范圍，對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力。重組慢病毒載體是以HIV-1（人類免疫缺陷I型病毒）為基礎發展起來的工具載體，其毒性基因已經被剔除

攪拌罐生物反應器培養貼壁細胞如何選擇微載體2023/04/11

微載體能夠在攪拌罐生物反應器中培養貼壁細胞。然而，不存在用于微載體選擇的穩健、可轉移的方法，研究提供很少或沒有解釋為什么使用微載體的原因。我們系統地評估了來自三個供體的用于人骨髓來源的MSC(hBM-MSCs)擴增的13種微載體，以建立一種可重現和可轉移的微載體選擇方法。單層研究證明了輸入細胞系在生長動力學和代謝物通量方面的變異性。與hBM-MSC2和hBM-MSC3相比，HBM-MSC1在三個傳代中經歷了更多的累積群體倍增。在100mL轉瓶中，攪拌條件明顯優于靜態條件，與供體無關，并且相對微載

細胞培養過程中細胞質控方案2023/04/07

正如人有喜怒哀樂，細胞也是如此，細胞的活力和狀態是不斷變化的，而非一成不變的。在細胞體外培養的過程中，離開機體保護的細胞是很脆弱的，在陌生的生長環境下即便是培養條件的輕微改變，也可能對細胞產生無法預估的影響。在原代細胞培養過程中，即使保持培養條件一致，在傳代過程中，細胞的存活質量也是逐漸下降的。以人臍靜脈內皮細胞（HUVEC細胞）為例，HUVEC細胞是研究內皮細胞功能的經典體外細胞模型。在心血管疾病的研究中，主要用于研究內皮細胞功能改變或損傷后其衍生細胞因子對血壓的影響；在腫瘤研究中，主要用于實

生育研究新途徑-科學家利用 2 只雄性細胞制造小鼠2023/04/06

近期，科學家們從兩只雄性小鼠中培育出幼鼠。這提高了將同樣的技術用于人類的可能性——盡管專家警告說，很少有小鼠胚胎發育成活的小鼠幼崽，而且沒有人知道它是否適用于人類。盡管如此，“這是一個非常聰明的策略，”加州大學舊金山分校的干細胞和生殖專家DianaLaird說，她沒有參與這項研究。“這是干細胞和生殖生物學的重要一步?！薄笨茖W家們在周三發表在《自然》雜志上的一項研究中描述了他們的工作。首先，他們從雄性小鼠的尾巴上提取皮膚細胞，并將其轉化為“誘導性多能干細胞”，這些細胞可以發育成許多不同類型的細胞或

細胞培養干貨-干細胞培養基和培養基添加劑2023/04/04

30多年來，生物產業一直在為許多細胞類型開發專門的細胞培養基，包括原代細胞和干細胞。細胞培養是生命科學中常見和復雜的技術之一，培養基本身是維持培養中健康、增殖的干細胞的關鍵因素。所有干細胞培養基的基本成分主要包含：基礎培養基、緩沖系統、谷氨酰胺、血清（或血清替代品）、特定生長因子以及其他補充劑等。一、基礎培養基經典基礎培養基（DMEM、MEM、RPMI等）是化學成分明確的配方，每種配方都是為支持特定的細胞系或培養條件而開發的。許多基礎培養基起初是使用小鼠成纖維細胞、HeLa或CHO細胞系開發的，

hTERT 永生化腎上皮細胞培養方法2023/04/03

血管平滑肌脂肪瘤是腎臟的良性腫瘤，起源于假定的血管周圍上皮樣細胞。這些細胞可能會分化成具有黑素細胞、平滑肌或脂肪細胞特征的細胞。然而，血管平滑肌脂肪瘤的研究因缺乏成熟的血管平滑肌脂肪瘤衍生細胞系和良好的動物模型而受到限制。hTERT永生化腎上皮細胞來源于血管平滑肌脂肪瘤，因此研究人員現在可以在體外利用這些細胞的原代細胞特性和延長的壽命。UMB1949細胞系表達NG2和L1，并且在塊蛋白(Tsc2)的外顯子33中有一個確定的5bp缺失，在塊蛋白（和/或錯構蛋白）中有突變。因此，該細胞系可用于研究結

為什么要進行進行細胞系STR鑒定2023/04/03

據統計約30%細胞系被交叉污染或錯誤辨識，只因使用了交叉污染或錯誤辨識的細胞而導致研究結論錯誤、結果不可重復、臨床細胞治療災難性后果……，這將浪費大量時間、精力和金錢。世人皆知，細胞身嬌體貴難養活，養好細胞實屬不易。而這其中煩的是污染、怕的是掉包。因為盡管研究僧們有方法把一切污染的源頭扼殺在搖籃之內，卻沒有火眼金睛辨別已經換了馬甲的錯誤細胞。因而細胞一旦被李代桃僵，再資深的科研者都會陰溝里翻船，所以細胞鑒定顯得尤為重要。為什么要進行細胞系鑒定？進行細胞系STR鑒定是很重要的。很多生物醫藥的研究都

使用ipsc誘導多能干細胞生成類器官技術簡介2023/03/31

類器官是復雜的3-D器官樣微組織，由多種分化的細胞類型組成，其結構組織類似于體內發現的細胞，具有中央腔和其他類似體內的結構特征。從ipsc誘導多能干細胞產生的類器官已被描述用于胃、腸、肺、大腦、腎、肝臟等各種組織，這些類器官是其他體外模型的有吸引力的替代品；這些微組織比2-D細胞培養或簡單的3-D球體聚集體更好地概括了體內組織表型，但沒有與器官外植體或組織切片相關的挑戰，例如培養壽命有限。事實上，類器官保留了許多細胞培養的典型有利特征，例如維持穩定培養數月的能力，以及冷凍保存和恢復培養物的能力。

單層細胞系傳代培養指南2023/03/31

大多數細胞系和原代細胞培養物生長為單一厚度的細胞層（單層）或附著在玻璃或經過特殊處理的塑料基質上的薄片。為了保持培養物的健康和積極生長，通常需要定期對它們進行傳代培養。常見的傳代培養方法涉及通過使用蛋白水解酶（如胰蛋白酶或膠原酶）破壞細胞間和細胞與基質的連接。在細胞解離成主要由單細胞組成的懸浮液后，將它們稀釋并轉移到新的培養容器中。在那里它們可以重新附著并開始生長和分裂，經過一段時間的孵化后再次接近匯合。此時，它們可以再次進行傳代培養或用于實驗。以下指南描述了典型單層細胞培養的常規傳代和維護所涉

hTERT-成纖維細胞培養解決方案2023/03/29

hTERT成纖維細胞為永生化子宮內膜成纖維細胞(THESC)具有延長的壽命，并且在核型、形態和表型方面與原代親代細胞相似。在功能上，THESCs顯示激素治療后蛻膜化的生化終點。THESCs來源于從患有肌瘤的成年女性身上獲得的基質細胞。原代基質子宮內膜細胞通過用來自包裝細胞系pA317-hTERT的上清液感染而永生化，該細胞系表達hTERT和嘌呤霉素抗性基因。hTERT成纖維細胞培養方案如下：一、所需材料Dulbecco改良Eagle培養基(DMEM)/F12(Sigma,D2906)碳酸氫鈉IT

CRISPR-Cas9基因編輯實驗中的注意事項2023/03/29

在細胞上做基因研究的一般的過程就是：利用CRISPR-Cas9先做基因除(GeneKnockout)，獲得基因敲除細胞系純合細胞：然后分析相關的生物學表型；最后做為對照還需要將原敲除的基因回補會到原細胞系中，做為對照細胞進行實驗對比。而利用Cas9進行細胞敲除之后，細胞回補實驗室要注意哪些問題?特別需要考慮的技術原理是那些？如何規劃好實驗流程，下面我們就一步步的進一下細胞其因敲除和回補實驗的效率/價格/周期等。一、敲除細胞的方式一般都是純合基因敲除細胞，當然也可以選擇MixClone的方式；純合

細胞培養基pH值對細胞的影響2023/03/28

細胞培養基pH值對細胞的影響培養基是用來供給細胞營養，促使細胞增殖的，也是細胞賴以生長的環境。細胞培養實驗中用量最多的就是細胞培養基，雖然細胞培養試驗基本技術大同小異，但是每種細胞的培養條件卻相差甚遠。若偏離某種細胞所需的培養條件，則會導致細胞表達不同的表型。一、培養基體系主要成分及功能介紹1、葡萄糖：用于細胞能量代謝。2、CO?：細胞需要少量的二氧化碳來維持生長。在培養基中，溶解的CO?與碳酸氫鹽離子處于平衡狀態，許多培養基利用了這種CO?/碳酸氫鹽反應來緩沖培養基的pH值。CO?溶解在培養基

菌種保存常用的五種方法2023/03/27

各種微生物由于遺傳特性不同，因此適合采用的保藏方法也不一樣。一種良好的有效保藏方法，首先應能保持原菌種的優良性狀長期不變，同時還須考慮方法的通用性、操作的簡便性和設備的普及性。下面介紹幾種常用的菌種保藏方法：1.斜面低溫保藏法將菌種接種在適宜的斜面培養基上，待菌種生長完成后，置于4℃左右的冰箱中保藏，每隔一定時間（保藏期）再轉接至新的斜面培養基上，生長后繼續保藏，如此連續不斷。此法廣泛適用于細菌、放線菌、酵母菌和霉菌等大多數微生物菌種的短期保藏及不宜用冷凍干燥保藏的菌種。放線菌、霉菌和有芽孢的細