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蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司
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DNA重組實驗技術總結2023/02/15
DNA重組技術,是分子的生物學研究生需要掌握的實驗技術之一,DNA重組實驗方法總結如下:一、實驗目的體外連接獲得重組分子,用于轉化受體細胞。二、實驗原理DNA重組技術是用內切酶分別將載體和外源DNA切開,經分離純化后,用連接酶將其連接,構成新的DNA分子。外源DNA片段和質粒載體的連接反應策略有以下幾種:1、帶有非互補突出端的片段用兩種不同的限制性內切酶進行消化可以產生帶有非互補的粘性末端,這也是最容易克隆的DNA片段,一般情況下,常用質粒載體均帶有多個不同限制酶的識別序列組成的多克隆位點,因而
PCR儀使用參數設定注意事項2023/02/15
PCR儀使用參數設定注意事項PCR儀使用參數設定不正確會影響到PCR實驗結果,這主要表現在溫度、時間和循環次數上,如果溫度參數設置過高,延伸時間不夠都會對實驗結果造成影響,下面談談使用PCR儀參數設定時的注意事項:一、溫度和時間溫度與時間的設置:基于PCR原理三步驟而設置變性-退火-延伸三個溫度點。在標準反應中采用三溫度點法,雙鏈DNA在90~95℃變性,再迅速冷卻至40~60℃,引物退火并結合到靶序列上,然后快速升溫至70~75℃,在TaqDNA聚合酶的作用下,使引物鏈沿模板延伸。對于較短靶基
一種通過改造CHO 細胞提升抗體產量的新技術2023/02/15
丙酮酸羧化酶是細胞質和線粒體代謝途徑的重要元素,可以有效促進能量代謝。在CHO細胞中過表達酵母胞質丙酮酸羧化酶(PYC2),可以增加丙酮酸流向TCA循環。增強的PYC2表達導致丙酮酸通量增加,從而使乳酸積累減少多達4倍,并顯著增加細胞密度和培養壽命。有了這個結果,與親本細胞相比,工程細胞的抗體表達顯著提高了70%,產品質量也有所提高(約3倍)。通過PYC2工程改造提升細胞性能,在丙酮酸、葡萄糖、乳酸和細胞能量代謝方面具有均高于親代細胞的各種優勢。PYC2工程改造原理和方法在補料分批上游工藝中,產
核酸酶切反應原理及注意事項2023/02/14
A載體和外源DNA的酶切一、實驗目的學習和掌握核酸的酶切操作原理;通過酶切獲得可進行體外重組的載體和外源DNA。二、實驗原理限制性內切酶能特異地結合于一段被稱為限制性酶識別序列的DNA序列之內或其附近的特異位點上,并切割雙鏈DNA。絕大多數限制酶識別長度為4至6個核苷酸的回文對稱特異核苷酸序列(如EcoRⅠ識別六個核苷酸序列:5'-G↓AATTC-3'),有少數酶識別更長的序列或簡并序列。Ⅱ類酶切割位點在識別序列中,有的在對稱軸處切割,產生平末端的DNA片段(如SmaⅠ:5'-CCC↓GGG-3
質粒DNA的提取實驗方法和步驟2023/02/14
質粒DNA的提取實驗方法和步驟一、實驗目的通過本實驗學習和掌握堿裂解法提取質粒的原理和步驟。二、實驗原理從細菌中分離質粒DNA的方法都包括3個基本步驟:培養細菌使質粒擴增;收集和裂解細胞:分離和純化質粒DNA。采用溶菌酶可以破壞菌體細胞壁,十二烷基磺酸鈉(SDS)和TritonX-100可使細胞膜裂解。經溶菌酶和SDS或TritonX-100處理后,細菌染色體DNA會纏繞附著在細胞碎片上,同時由于細菌染色體DNA比質粒大得多,易受機械力和核酸酶等的作用而被切斷成不同大小的線性片段。堿裂解法提取質
PCR反應的基本原理與實驗技術2023/02/14
一、實驗目的:掌握PCR反應的基本原理與實驗技術二、PCR反應實驗原理PCR(PolymeraseChainReaction)-聚合酶鏈式反應,可以選擇性擴增一段DNA序列。其基本步驟是,首先將待擴增的模板DNA變性使之成為單鏈,DNA樣品中,特異性的引物能夠與其互補的序列雜交,在dNTPs和Taq酶存在時,就可以合成模板DNA的互補鏈,反應完成后,將反應混合物加熱使DNA雙鏈變性,溫度下降后,過量的引物又可以開始第二輪的合成反應。這種延伸-變性-退火-延伸的循環可以重復多次,使所需要的DNA片
瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA的方法2023/02/14
一、實驗目的:通過本實驗學習瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA的方法和技術。二、實驗原理DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時有電荷效應和分子篩效應。DNA分子在高于等電點的pH溶液中帶負電荷在電場中向正極移動。由于糖-磷酸骨架在結構上的重復性質,相同數量的雙鏈DNA幾乎具有等量的凈電荷,因此他們能以相同的速度向正極方向移動。在一定的電場強度下,DNA分子的遷移速度取決于分子篩效應,即DNA分子本身的大小和構型。具有不同的相對分子質量的DNA片段泳動速度不一樣,可進行分離。DNA分子的遷移速度與相對分子質量對數值
病毒純化方法2023/02/14
病毒是一類非細胞型生物,需要寄生在其活細胞體內,雖然大部分病毒對人體是有害的,但是隨著科學的發展,發現很多病毒有較高的利用價值。例如:可以作為基因工程載體的慢病毒、腺相關病毒等;還有噬菌體展示技術,可以幫助我們對蛋白質進行相關研究;以及曾作為細胞融合應用的仙臺病毒;而病毒最重要的應用,就是用來制備滅活、減毒、亞單位疫苗。本期,我們主要對病毒疫苗生產過程中的純化方法進行介紹。病毒提純是病毒學研究的重要前提,病毒的相關詳細研究都需要高純度的病毒樣品。病毒純化是在病毒不受損、不失活的前提下使用一些物理
分光光度計選購指南2023/02/13
光譜儀或分光光度計是用于識別或確認樣品中物質的化學種類、化學結構或濃度的分析儀器。分光光度計將發射能量源通過溶液并測量不同波長的光強度。若溶液的分子濃度較高,則可能會吸收更多的光。所以,提交用于光譜分析的樣品必須非常純凈,以避免產生不良或受污染的結果。分光光度計主要由激發光源、濾光片、比色皿,以及光信號檢測器所組成。選擇合適的分光光度計/光譜儀時要考慮的重要標準:檢測限制您要測量的產品的密度、形狀或尺寸波長范圍分析工作范圍樣品通量(單樣品與多樣品)數據質量儀器和相關消耗品的成本可定制和/或預配置
動物細胞培養生物反應器中乳酸含量的控制方法2023/02/13
銨產量過多、乳酸產量過剩、營養限制或與營養補給、添加堿以控制pH值相關的高滲應激等因素,使得動物細胞培養生物反應器中的細胞密度被限制。為了部分克服這些因素,使用乳酸補充和適應LSA技術是減少銨和乳酸產生的一種簡單方法。使用這種簡單的方法,可以實現了將近乳酸產量的大幅度減少,同時在分批搖瓶培養中減少了50%的銨產量。在隨后的補料分批生物反應器培養中,使用BiosenC-Line乳酸分析儀測定乳酸產量減少了近8八倍。甚至可以實現3500萬個細胞/mL的活細胞密度和2.73億個細胞-天/mL的完整活細
如何選擇移液槍移液吸頭2023/02/13
如何選擇移液槍移液吸頭如何選擇實驗室移液吸頭?任何移液器,其性能和精確度都會因使用質量不佳或不合適的吸頭而受到嚴重影響。移液器和移液器吸頭作為一個系統,只有互相匹配才能保證準確地轉移和輸送液體。在掌握正確的移液技術后,匹配推薦的吸頭,就能保證移液的精度。一般分為:①袋裝吸頭、②盒裝吸頭、③低吸附吸頭、④濾芯吸頭、⑤自動化吸頭等。透明吸頭VS.有色吸頭當前,市場上吸頭基本上都是用聚丙烯塑料(化學惰性高,使用溫度范圍廣的無色透明塑料)做的。不過,同樣是聚丙烯,品質差別也會很大:高品質的吸頭一般都是用
紫外可見分光光度計使用注意事項2023/02/10
紫外可見光譜分析技術是一種廣泛應用于許多科學領域的技術,從細菌培養、藥物鑒定和核酸純度檢查和定量,到飲料行業的質量控制和化學研究。可見光譜是一種分析技術,它測量與參考或空白樣品相比樣品吸收或透射過的UV或可見光的離散波長的數量。此屬性受樣品成分的影響,分析結果可能會提供有關樣品中成分和濃度的信息。人類能夠看到一系列可見光,從大約380nm(我們看到的紫色)到780nm(我們看到的紅色)。紫外光的波長比可見光短,約為100nm。因此,光可以通過其波長來描述,這在紫外可見光譜中可用于通過定位與吸光度
實驗室電子天平的使用及維護方法2023/02/10
實驗室電子天平的使用及維護方法實驗室電子天平主要用于實驗過程中的樣品稱量、樣品制備等過程。使用及維護方法如下:1.實驗室電子天平的使用條件稱量臺:穩固的實驗臺或石臺,不得用鐵板制品、塑料和玻璃制品的材料工作室:只有一個出入口,防止空氣對流;窗戶數量盡量少,避免陽光直射溫濕度:溫度要求15-30℃,并盡可能保持穩定;濕度30-65%RH,盡量保持在50%RH空氣:避免空調或風扇直吹天平,并避免將調溫、除濕設施安放于天平附近2.實驗室電子天平操作注意事項調平:使用天平前應首先檢查氣泡是否在水平儀的中
使用實驗室儀器進行小鼠抗體生產技術2023/02/10
小鼠抗體是科研實驗中常用的一種抗體,它主要有IgA、IgD、IgE、IgG和IgM五種類型,下面小編就小鼠抗體分類及使用實驗室儀器進行小鼠抗體生產技術做一下簡單介紹:小鼠抗體同種型/類、亞類和小鼠抗體同種型與人類相同,小鼠有五種抗體同種型(IgA、IgD、IgE、IgG和IgM)。每個同種型都有不同的重鏈。同種型也稱為類。抗體的另一個名稱是免疫球蛋白,因此后綴“Ig”表示抗體類別和亞類。幼稚B細胞產生IgM和IgD。在B細胞成熟過程中,通過同種型轉換,成熟的B細胞將產生IgG、IgA或IgE同種
使用微載體生物反應器規模化擴增 Vero 細胞的方法2023/02/10
絕大多數貼壁Vero細胞擴增培養都是使用微載體技術在攪拌式細胞生物反應器中進行的。在這里,細胞附著在微載體上,微載體被設計成在攪拌培養中保持懸浮。微載體的種類很多,主要分為固體和大孔兩種,表面性質不同。幾項研究比較了不同類型的微載體用于Vero細胞的繁殖.目前多數使用Cytodex1微載體.Cytodex1微載體是基于葡聚糖的固體微載體,顯示帶電表面,平均直徑為180μm左右。近年來,國內生產的DISKS片狀載體孔徑只有15μm,單層厚度約0.44mm,可以維持較好的營養物質交換環境,并且減少細
克隆抗體的特點和應用2023/02/09
單克隆抗體是由單一B細胞克隆產生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體。通常采用雜交瘤技術來制備,雜交瘤(hybridoma)抗體技術是在細胞融合技術的基礎上,將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細胞融合為B細胞雜交瘤。1975年分子生物學家G.J.F.克勒和C.米爾斯坦在自然雜交技術的基礎上,創建立雜交瘤技術,他們把可在體外培養和大量增殖的小鼠骨髓瘤細胞與經抗原免疫后的純系小鼠B細胞融合,成為雜交細胞系,既具有瘤細胞易于在體外無限增殖的特性,又具有抗體形成細胞的合成
多克隆抗體及抗體制備流程2023/02/09
抗體,又名免疫球蛋白(Ig),是一種由B細胞產生的大型Y形糖蛋白,可在免疫防御中起主要作用。抗體與病原體的特定分子(即抗原)發生特異性結合。抗體以一個或者多個Y形單體存在,每個Y形單體由4條多肽鏈組成。每個Y形單體包含兩條相同的重鏈(H)和兩條相同的輕鏈(L),重鏈和輕鏈的序列和長度不同。Y形單體的頂部包含可變區(V),也稱抗原結合片段(F(ab))區。該區可與給定抗原上的表位特異性緊密結合。抗體的基本結構包含恒定區(C)和可結晶片段(Fc)區。這一區域對抗體的免疫應答功能非常重要。此外,將熒光
蛋白酶K的應用2023/02/09
近年來,隨著對蛋白酶K研究的深入,該酶的應用范圍不僅在醫療診斷及科研領域得到了十分廣泛的應用,該酶還作為替代其它作用范圍較窄的蛋白酶,主要應用于造紙、工業制革、飼料生產、食品加工等行業中。此外,該酶還可以替代傳統的通過化學方法處理原材料的方法,減少污染。在各行各業中,蛋白酶K的主要用途有:①在分離DNA和RNA的過程中,用于核酸酶的蛋白水解失活。蛋白酶K能降解與核酸結合的蛋白質,促進蛋白與核酸的分離,因此該酶在提取高分子量的核酸時具有很大的優勢。蛋白酶K還常被用于RNA提取過程中抑制和降解RNa
什么是蛋白酶K,蛋白酶K的生產有哪些挑戰?2023/02/09
蛋白酶K(ProteinaseK)是一種廣譜絲氨酸蛋白酶,蛋白酶K于1974年在fungusEngyodontiumalbum的提取物中發現。能合成該種蛋白酶的微生物能在以角蛋白(Keratin)作為碳源和氮源的環境中生長,說明該酶可以消化角蛋白,因此被稱為“蛋白酶K”。蛋白酶K由一條肽鏈組成,含有277個氨基酸,該蛋白的相對分子量~28.9kDa,蛋白酶K是一種穩定且具有高活性的絲氨酸蛋白酶。晶體和分子結構研究證據表明該酶屬于枯草素家族,具有活性位點催化三聯體(Asp39-His69-Ser2
熒光蛋白Marker優化方案2023/02/09
熒光蛋白Marker優化方案有報道稱一種自預染熒光蛋白Marker,能夠實現蛋白Marker即是預染蛋白又是曝光蛋白。具體原理是:將天然提取的熒光蛋白(包括藻紅蛋白、藻藍蛋白、別藻藍蛋白、綠色熒光蛋白、黃色熒光蛋白和紅色熒光蛋白等,其分子量為20-300kDa),與能夠結合抗體IgG的proteinA、proteinG和能被二抗結合的抗體Fc區蛋白或肽共價偶聯,由于熒光蛋白自帶顏色,從而實現蛋白即是預染蛋白,又是熒光蛋白的目的,無需轉膜染色或X光片成像,此外,熒光蛋白Marker條帶可特異性結合
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