熒光定量PCR(Real-time PCR),是指在PCR擴增反應體系中加入熒光基團,通過對擴增反應中每一個循環產物熒光信號的實時檢測,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
熒光定量PCR(qPCR)作為一種強大的核酸定量分析工具,其應用范圍廣泛,涵蓋了多個領域:
1. 醫學診斷:
1) 病原體檢測:能夠快速、準確地檢測病毒、細菌、真菌等病原體的核酸,如淋球菌、沙眼衣原體、人類乳頭瘤病毒、流感病毒等。
2) 基因表達分析:用于監測特定基因在不同條件下的表達水平,如藥物處理、物理處理、化學處理等的影響。
3) 腫瘤基因檢測:檢測癌基因的表達量和突變,如端粒酶hTERT基因、慢性粒細胞性白血病WT1基因等。
4) 藥物療效考核:評估病毒(如HBV、HCV)與藥物治療效果的關系,監控病毒載量變化。
5) 產前診斷:通過檢測孕婦外周血中的胎兒DNA,進行性別鑒定或遺傳病篩查。
2. 分子生物學研究:
1) 基因表達差異分析:比較不同樣本間特定基因的表達差異,驗證cDNA芯片或差顯結果。
2) SNP檢測:高通量地檢測單核苷酸多態性,研究個體對疾病的易感性或藥物反應差異。
3) 甲基化檢測:區分甲基化和非甲基化的DNA,研究癌癥等疾病與DNA甲基化的關系。
3. 食品安全檢測:
轉基因成分檢測:確認食品中是否存在轉基因成分,確保符合食品安全標準。
病原微生物檢測:快速檢測食品中的致病菌,保障消費者健康。
4. 動植物檢疫:
病原體檢測:用于檢測動植物中的病原體,防止疾病的傳播。
5. 藥物開發與篩選:
基因表達調控研究:在藥物研發過程中,用于篩選能夠有效調控特定基因表達的化合物。
6. 環境監測:
污染物檢測:通過檢測特定生物標志物的表達水平,評估環境污染物對生物體的影響。
7. 法醫學:
DNA指紋鑒定:在fan罪現場樣本中進行DNA分析,用于個人身份鑒定。
8. 基礎科學研究:
基因功能研究:通過調控特定基因的表達,研究其在生物體中的功能。
總之,熒光定量PCR憑借其高靈敏度、高特異性和實時定量的能力,在醫學、生物學、環境科學、法醫學等多個領域展現出廣泛的應用價值。
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